常用输液溶剂中注射用乌司他丁稳定性研究

2020-03-15朱龙社胡晓艺王昕阳胡文利康传哲

中国药业 2020年5期

李鹏，朱龙社，张方，胡晓艺，王昕阳，胡文利，康传哲

（中国人民解放军西部战区空军医院药剂科，四川成都 610065）

注射用乌司他丁为蛋白酶抑制剂，是运用现代生物技术分离提取人新鲜尿液中抑制多种蛋白水解酶活力的糖蛋白而制成的冻干粉针剂，主要有效成分为乌司他丁，临床主要用于治疗急、慢性胰腺炎及急性循环衰竭的抢救[1-5]。乌司他丁的半衰期约为40 min，而药品说明书中推荐的给药方法为静脉滴注1 ～2 h，该方法会导致还未给药完成药物就可能已代谢消除完全。因此，临床用于急性胰腺炎及急性循环衰竭的抢救时，为了维持有效的血药浓度，常采用输液泵持续输注的给药方式，不仅给药方便、快速，且可有效控制给药速率和给药剂量，临床应用广泛[6-8]。但注射用乌司他丁与2 种常用输液溶剂混合配制12 h 内的稳定性目前尚未见相关研究报道。本研究中对注射用乌司他丁与2 种常用输液溶剂的配伍稳定性进行了考察，为临床合理安全使用注射用乌司他丁提供参考。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

PHS-3C 精密型pH 计（广州市深华生物技术有限公司）；L01A-24 型智能微粒检测仪（江苏苏净集团有限公司）；Waters 2489 型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；HYC-360 型医用冷藏箱（青岛海尔特种电器有限公司）；BL-310 型电子分析天平（德国Sartorius 公司）；SW-CJ-2FD 型水平层流洁净工作台（苏州安泰空气技术有限公司）。

1.2 试药

注射用乌司他丁（广东天普生化医药股份有限公司，批号为H031611015，规格为100 000 单位）；乌司他丁对照品（中国食品药品检定研究院，纯度≥99%，批号为140785-201501）；5%葡萄糖注射液（5%GS，批号为A17031207-1）、0.9%氯化钠注射液（0.9%NS，批号为A17012002-1），规格均为500 mL，均购自四川科伦药业股份有限公司；磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、乙腈均为色谱纯，纯度≥99.9%；水为超纯水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 溶液配制

在我院静脉用药调配中心百级水平层流操作台洁净条件下，按无菌操作规程由经验丰富的专业配液药师进行溶液配制[9]。根据注射用乌司他丁药品说明书规定的用量，将注射用乌司他丁1 支（规格为10 万单位）分别溶于5%GS 500 mL 和0.9%NS 500 mL 中，摇匀，备用。在溶液配伍前，先对空白对照组溶液的外观、pH 和不溶性微粒情况进行测定。结果见表1。

表1 空白对照组溶液配伍前外观、pH 和不溶性微粒测定结果（n=3）

2.2 外观考察

上述配制的各溶液分别于配制后0，1，3，6，9，12 h取样，在黑色和白色背景下目视检查外观并记录。室温条件下放置12 h，溶液均为澄明溶液，且未出现浑浊、沉淀现象及溶液颜色的明显改变。

2.3 pH 测定

参照2015 年版《中国药典（四部）》[10]中pH 测定的操作规则，在静脉用药调配中心万级洁净条件下，分别于0，1，3，6，9，12 h 时取样测定并记录上述配制的各溶液的pH。注射用乌司他丁与2 种临床常用的输液溶剂混合配制后，室温条件下放置12 h 后pH 基本无变化，且均在静脉输液质量要求的正常范围内。详见表2。

表2 注射用乌司他丁与2 种常用输液溶剂配伍后不同检测时间点pH 变化（±s，n=3）

溶剂5%GS 0.9%NS 0 h 5.65±0.04 5.95±0.03 1 h 5.68±0.11 6.01±0.05 3 h 5.75±0.07 5.93±0.10 6 h 5.69±0.04 5.92±0.04 9 h 5.73±0.05 5.86±0.06 12 h 5.70±0.06 5.89±0.02

2.4 微粒测定

参照2015 年版《中国药典（四部）》不溶性微粒指定的检查法光阻法的测定操作规则和结果判定，在静脉用药调配中心万级洁净条件下，分别于0，1，3，6，9，12 h时取样测定上述配制的各溶液≥10 μm 和≥25 μm 的微粒数并记录。注射用乌司他丁与2 种常用输液溶剂混合配制12 h 内，≥10 μm 和≥25 μm 的微粒数均无明显变化，且均符合2015 年版《中国药典（四部）》规定的限度。详见表3。

表3 注射用乌司他丁与2 种常用输液溶剂配伍后不溶性微粒变化情况（±s，粒/mL，n=3）

5%GS 0.9%NS≥10≥25≥10≥25 0 h 6.43±0.28 0.18±0.03 5.07±0.41 0.46±0.05 1 h 4.80±0.31 0.12±0.02 4.75±0.26 0.32±0.03 3 h 4.72±0.40 0.25±0.02 4.87±0.33 0.28±0.01 6 h 4.84±0.36 0.20±0.01 5.11±0.47 0.34±0.02 9 h 5.39±0.22 0.27±0.02 4.96±0.35 0.43±0.04 12 h 5.76±0.17 0.29±0.05 5.30±0.19 0.52±0.02溶剂品种粒径（μm）配伍后

2.5 乌司他丁含量测定(高效液相凝胶过滤色谱法)

2.5.1 色谱条件

色谱柱：Shodex LF -604 凝胶色谱柱（150 mm ×6.0 mm，5 μm）；流动相：磷酸二氢钠-磷酸氢二钠混合溶液（0.1% mol/L，39 ∶61，V/ V）-乙腈（90 ∶10，V/ V）；流速：0.7 mL/min；进样量：20 μL；检测波长：280 nm；柱温：30 ℃。

2.5.2 溶液制备

取乌司他丁对照品1 000 单位，置5 mL 棕色容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，即得每1 mL 200 单位的对照品溶液，室温条件下避光保存。取2.1 项下配伍液适量，用0.22 μm 微孔滤膜滤过，续滤液即为供试品溶液[11]。

2.5.3 方法学考察

系统适用性试验：取5%GS、0.9%NS、对照品溶液、供试品溶液各适量，经0.22 μm 微孔滤膜滤过后，精密量取20 μL，依法进样，记录色谱峰，色谱图见图1。结果表明，在拟订色谱条件下乌司他丁峰形对称，保留时间约为7.68 min，且含量测定不受输液溶剂干扰。

线性关系考察：取对照品溶液适量，分别用流动相稀释成每1 mL 20，40，80，160，200，240 单位的标准系列溶液，精密量取20 μL，按拟订色谱条件进样，记录色谱图。以乌司他丁浓度为横坐标（X）、峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归，得线性回归方程Y=0.258X-0.050 2，R2=0.999 9（n=6）。结果表明，乌司他丁在每1 mL 20 ～240 单位范围内浓度与峰面积线性关系良好。

精密度试验：选择低、中、高3 种浓度（每1 mL50，100，200 单位）对照品溶液，按拟订色谱条件重复测定6 次，连续测6 d，考察其日内和日间精密度。结果日内RSD分别为0.61%，0.55%，0.73%（n=6），日间RSD分别为0.70%，0.78%，0.84%（n=6），表明仪器精密度良好。

加样回收试验：取适量注射用乌司他丁，精密称定，加流动相溶解并稀释成每1 mL 200 单位溶液。取上述溶液9 份，每份1 mL，分别加入不同剂量浓度的乌司他丁对照品，制成浓度分别为每1 mL 360，400，440 单位的样品溶液，取20 μL 进样，计算回收率。结果见表4。

稳定性考察：选择每1 mL 50，100，200 单位3 种低、中、高浓度的供试品溶液各3 份，分别于0，1，3，6，9，12 h 进样测定分析，考察方法的稳定性。结果的RSD分别为0.45%，0.52%，0.76%（n=3），表明供试品溶液稳定性良好。

2.5.4 含量测定

取供试品溶液，经0.22 μm 微孔滤膜滤过后，在拟订色谱条件下，分别在0，1，3，6，9，12 h 时自动进样20 μL，测定其峰面积，计算乌司他丁含量。以0 h 的含量为100，计算各时间点的相对百分含量。结果显示，各时间点、各配伍液中乌司他丁的相对百分含量为99.45% ～102.55%，RSD低于1%，表明注射用乌司他丁与5%GS、0.9%NS 混合配制后，12 h 内含量基本无改变。结果见表5。

图1 高效液相色谱图

3 讨论

静脉成品输液的不溶性微粒和药物含量均受配制过程中很多因素影响，如配制过程中的环境洁净度、配置人员的技术及无菌操作等[12-13]。本研究中配伍溶液的配置均由同一名专业技术人员在同一台百级水平层流操作台严格按照无菌操作规程完成，实现了配置环境和人员的条件控制，从而将以上因素对本试验结果的干扰降低至最低，保证了试验结果的真实准确。

注射用乌司他丁药品说明书推荐的用量用法：将1 支（10 万单位）溶于5%GS 或0.9%NS（500 mL）配制成每1 mL 200 单位的静脉输液，静脉滴注每次1 ～2 h，1 ～3 次/日。但乌司他丁的药代动力学特点为消除半衰期（t1/2）极短，仅为40 min，临床用于治疗急性胰腺炎及急性循环衰竭的抢救时，上述给药剂量和给药方式难以保证患者体内的有效血药浓度[14]。故临床医生常采用输液泵持续输注12 h 的给药方式，更有利于快速起效，并保持有效的血药浓度[15]。本研究结果显示，注射用乌司他丁与2 种输液溶剂混合配制12 h，溶液外观和pH均无明显变化，≥10 μm 和≥25 μm 不溶性微粒数均符合2015 年版《中国药典（四部）》规定的限度，且12 h 内乌司他丁的含量基本无改变。故注射用乌司他丁与2 种输液溶剂配伍后，室温条件下，12 h 内可保持相对稳定，临床可采用输液泵持续给药的方法使用。