含二苯醚结构单元的新型烟酰胺类衍生物的合成及杀菌活性研究

李 华，武 园，高梦琪，朱晓磊，杨光富

（华中师范大学农药与化学生物学教育部重点实验室，武汉 430079）

琥珀酸脱氢酶（SDH）作为一类重要的杀菌剂靶标，在农药学研究领域扮演着十分重要的角色。琥珀酸脱氢酶抑制剂（SDHI）类杀菌剂因其具有高效、广谱的杀菌活性和环境友好的特点，成为杀菌剂市场的“黑马”，受到世界各大农药公司的关注[1]。啶酰菌胺（boscalid）为巴斯夫公司开发的烟酰胺类杀菌剂，是第一个广谱性的SDHI类杀菌剂，几乎对所有的真菌病害都有效果，主要用于防治白粉病、灰霉病、菌核病、各类腐烂病、褐腐病和根腐病等[2]。啶酰菌胺是在灭锈胺和氟酰胺的基础上，利用生物电子等排原理，将酸部分的苯环替换为吡啶环，同时将胺部分的苯环替换为空间位阻更大的联苯结构而得到高活性、低毒性、高内吸性和高选择性的化合物。啶酰菌胺与多菌灵、腐霉利等无交互抗性，对作物安全，加上有利的生态效果和毒理学数据，使之迅速成为上亿美元的产品[3]。其结构式见图1。

图1 啶酰菌胺的结构式

近年来，一些结构类似的品种不断涌现，如氟唑菌酰胺（fluxapyroxad）、联苯吡菌胺（bixafen）和pyraziflumid等（图2）。这些化合物的显著特点为：酸部分不再局限于吡啶环，出现了吡唑环和吡嗪环；酰胺键旁边碳上的取代基由氯原子变成了二氟甲基或三氟甲基，活性有了进一步提高[4-6]。但这些化合物的胺部分仍为联苯结构，需要昂贵的钯催化剂和苯硼酸作为原料，成本较高[7]。

图2 近年来上市的联苯类SDHIs的结构式

在课题组前期的工作中，笔者发现柔性的二苯醚片段替换刚性的联苯片段，可以有效地降低合成成本，提高生物活性，并且成功开发了候选杀菌剂品种氯苯醚酰胺和氟苯醚酰胺[8]。因此，本文在啶酰菌胺的基础上，将其胺部分的联苯替换为二苯醚，酰胺键旁边碳上的取代基由氯原子替换为三氟甲基，继而合成了一系列含二苯醚结构单元的新型烟酰胺类化合物。目标化合物的合成路线见图3。在本研究中，以廉价的取代苯酚和邻氟硝基苯为起始原料，通过芳环上的亲核取代反应和还原反应得到氨基二苯醚，其再与2-三氟甲基烟酸经EDCI/HOBt酰化得到22个未见报道的烟酰胺类化合物。随后，对所合成的目标化合物进行了结构鉴定、离体酶抑制活性测试、作用模式研究、构效关系和活体杀菌活性研究，旨在发现较高活性的新化合物。

图3 目标化合物的合成路线

1 材料与方法

1.1 所用仪器及试剂

使用仪器及试剂：循环水式真空泵，型号为SHZ-D（Ⅲ）；远红外线干燥箱，型号为W70-1；电子天平，型号为德国Sartotuis BSA223S-CW；旋转蒸发仪，型号为BüCHI R-200；隔膜泵，型号为BuCHI Vacuum Pump=V-700；低温循环冷却泵，型号为DLSB；恒温磁力搅拌器，型号为德国Heidolph MR3001。使用60～90℃沸程的石油醚；其他溶剂和试剂如无特殊说明，均从各大试剂公司购买，为分析纯或化学纯。

化合物结构鉴定与表征使用仪器：核磁共振仪，型号为Varian VNMR 400 MHz（溶剂为DMSO-d6，内标为TMS）；数字熔点仪（温度计未经校正），型号为BüCHI B-545；高分辨质谱仪，型号为WATERS MALDI SYNAPT G2 HDMS（MA，USA）。

1.2 关键中间体的合成

1.2.1 中间体M-1的合成

在100 mL圆底烧瓶中加入5 mmol 2-氟硝基苯、6 mmol取代苯酚和7.5 mmol碳酸钾，再加入20 mL DMF后升温至100℃。TLC监测原料反应完全后停止反应，加入50 mL乙酸乙酯后用30 mL 2 mol NaOH洗2次，再用50 mL饱和食盐水洗1次，减压除去溶剂后得中间体M-1。

1.2.2 中间体M-2的合成

在100 mL圆底烧瓶中加入3 mmol中间体M-1和3.6 mmol氯化铵，再加入50 mL乙醇和5 mL水，加热至回流后加入还原铁粉（9 mmol），TLC监测原料反应完毕后停止反应，硅藻土过滤，滤液旋去大部分溶剂后加入50 mL乙酸乙酯萃取，有机相用50 mL饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后柱层析得中间体M-2。

将3 mmol取代的1-氟-4-三氟甲苯、3.6 mmol 2-氨基苯酚和4.5 mmol碳酸钾加入到50 mL圆底烧瓶中，再加入20 mL DMF，升温至70℃，TLC监测原料反应完毕后停止反应，加入50 mL乙酸乙酯，分别用50 mL饱和食盐水洗2次后加无水硫酸钠干燥，减压除去溶剂后柱层析得中间体M-2。

1.3 目标化合物的合成及表征

在100 mL圆底烧瓶中加入2-(三氟甲基)烟酸（2 mmol）、EDCI（0.460 g，2.4 mmol）、HOBt（0.325 g，2.4 mmol）和10 mL DMF，室温下反应1 h，然后将中间体M-2（2.4 mmol）加入到上述溶液，室温下反应24 h,减压除去溶剂后柱层析得目标化合物TM（图4、表1）。

图4 目标化合物的结构式

表1 目标化合物的结构

化合物TM-1为白色粉末，收率为85%，熔点为112.6～113.3℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.49（s，1H）、8.82（d，J=4.5 Hz，1H）、8.00（dd，J=10.3、5.9 Hz，2H）、7.79（dd，J=7.8、4.7 Hz，1H）、7.47-7.32（m，1H）、7.27-7.15（m，4H）、7.13-7.02（m，1H）、6.86（dd，J=6.2、3.3 Hz，1H）。HRMS（MALDI）Calcd for C19H12F4N2O2[M＋H]＋：377.090 77，found 377.090 19。

化合物TM-2为白色粉末，收率为75%，熔点为109.0～110.1℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.49（s，1H）、8.82（d，J=4.5 Hz，1H）、8.00（dd，J=10.3、6.0 Hz，2H）、7.79（dd，J=7.8、4.8 Hz，1H），7.46-7.33（m，1H）、7.27-7.14（m，4H）、7.13-7.02（m，1H）、6.91-6.80（m，1H）。HRMS（MALDI）Calcd for C19H12ClF3N2O2[M＋Na]＋：415.043 16，found 415.045 00。

化合物TM-3为白色粉末，收率为83%，熔点为126.5～127.6℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.46（s，1H）、8.82（d，J=4.4 Hz，1H）、7.99 （dd，J=8.4、5.2 Hz，2H）、7.80（dd，J=7.8、4.8 Hz，1H）、7.74（dd，J=8.0、1.4 Hz，1H）、7.47-7.34（m，1H）、7.26-7.16（m，2H）、7.16-7.10（m，1H）、7.01（dd，J=8.2、1.1 Hz，1H）、6.85-6.72（m，1H）。HRMS（MALDI）Calcd for C19H12BrF3N2O2[M＋H]＋：437.010 70，found 437.011 48。

化合物TM-4为白色粉末，收率为81%，熔点为87.2～88.1℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.39（s，1H）、8.82（d，J=4.5 Hz，1H）、8.01-7.91（m，2H）、7.79（dd，J=7.8、4.7 Hz，1H）、7.32（d，J=7.2 Hz，1H）、7.21（t，J=7.1 Hz，1H）、7.17-7.07（m，3H）、6.86（d，J=7.9 Hz，1H）、6.74-6.66（m，1H）、2.18（s，3H）。HRMS（MALDI）Calcd for C20H15F3N2O2[M＋Na]＋：395.097 78，found 395.097 39。

化合物TM-5为白色粉末，收率为89%，熔点为127.0～128.1℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.43（s，1H）、8.82（d，J=4.5 Hz，1H）、7.97（d，J=7.7 Hz，1H）、7.92-7.85（m，1H）、7.82（dd，J=7.8、4.7 Hz，1H）、7.77（d，J=7.8 Hz，1H）、7.64（t，J=7.4 Hz，1H）、7.32（d，J=7.6 Hz，1H）、7.28-7.24（m，2H）、6.99（d，J=8.3 Hz，1H）、6.94（dd，J=6.1、3.5 Hz，1H）。HRMS（MALDI）Calcd forC20H12F6N2O2[M＋H]＋：427.087 57，found 427.088 01。

化合物TM-6为白色粉末，收率为95%，熔点为112.2～112.9℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.43（s，1H）、8.81（d，J=3.2 Hz，1H）、7.96（d，J=7.5 Hz，1H）、7.84-7.70（m，2H）、7.49（t，J=8.3 Hz，1H）、7.36-7.25（m，2H）、7.12（dd，J=7.5、1.8 Hz，2H）、6.98-6.87（m，2H）。 HRMS（MALDI） Calcd for C20H12F6N2O3[M＋H]＋：443.082 49，found 443.081 49。

化合物TM-7为白色粉末，收率为78%，熔点为87.5～88.2℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.41（s，1H）、8.81（d，J=3.7 Hz，1H）、7.95（dd，J=6.3、3.2 Hz，1H）、7.78（dt，J=7.8、5.7 Hz，2H）、7.40（t，J=8.2 Hz，1H）、7.32-7.23（m，2H）、7.19（dd，J=8.0、1.2 Hz，1H）、7.12-7.06（m，1H）、6.99（t，J=2.0 Hz，1H）、6.92（dd，J=8.3、2.1 Hz，1H）。HRMS（MALDI）Calcd for C19H12ClF3N2O2[M＋H]＋：393.061 22，found 393.061 47。

化合物TM-8为白色粉末，收率为75%，熔点为122.8～123.9℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.42（s，1H）、8.81（d，J=4.5 Hz，1H）、8.02-7.94（m，1H）、7.91（d，J=7.7 Hz，1H）、7.78（dd，J=7.8、4.7 Hz，1H）、7.28-7.22（m，4H）、7.08-6.98（m，2H）、6.97-6.89（m，1H）。HRMS（MALDI） Calcd for C19H12F4N2O2[M＋Na]＋：399.072 71，found 399.072 03。

化合物TM-9为白色粉末，收率为83%，熔点为119.5～120.6℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.41（s，1H）、8.81（d，J=4.3 Hz，1H）、8.05-7.90（m，1H）、7.86（d，J=7.5 Hz，1H）、7.77（dd，J=7.7、4.7 Hz，1H）、7.43（d，J=8.8 Hz，2H）、7.31-7.18（m，2H）、7.07-6.89（m，3H）。HRMS（MALDI） Calcd for C19H12ClF3N2O2[M＋H]＋：393.061 22，found 393.060 87。

化合物TM-10为白色粉末，收率为82%，熔点为113.5～114.5℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.40（s，1H）、8.82-8.78（m，1H）、7.99-7.91（m，1H）、7.78-7.69（m，4H）、7.37-7.27（m，2H）、7.21-7.14（m，1H）、7.09（d，J=8.6 Hz，2H）。HRMS（MALDI）Calcd for C20H12F6N2O2[M＋H]＋：427.087 57，found 427.087 30。

化合物TM-11为白色粉末，收率为84%，熔点为109.0～109.9℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.50（s，1H）、8.82（d，J=4.5 Hz，1H）、8.00（t，J=7.5 Hz，2H）、7.80（dd，J=7.8、4.7 Hz，1H）、7.33-7.13（m，4H）、7.03（dd，J=7.6、1.7 Hz，1H）、6.83（t，J=7.6 Hz，1H）。HRMS（MALDI）Calcd for C19H11F5N2O2[M＋H]＋：395.081 35，found 395.080 77。

化合物TM-12为白色粉末，收率为80%，熔点为112.9～113.5℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.41（s，1H）、8.82（d，J=4.2 Hz，1H）、8.00（d，J=7.6 Hz，1H）、7.87（dd，J=7.6、1.7 Hz，1H）、7.80（dd，J=7.8、4.8 Hz，1H）、7.37（d，J=2.3 Hz，1H）、7.24-7.10（m，3H）、6.74（dd，J=7.8、1.3 Hz，1H）、6.68（d，J=8.5 Hz，1H）、1.37（s，9H）、1.27（s，9H）。HRMS（MALDI）Calcd for C27H29F3N2O2[M＋H]＋：471.225 39，found 471.224 49。

化合物TM-13为白色粉末，收率为85%，熔点为111.0～112.3℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.45（s，1H）、8.82（d，J=4.5 Hz，1H）、8.00（d，J=2.0 Hz，1H）、7.98-7.91（m，2H）、7.80（dd，J=7.8、4.8 Hz，1H）、7.69（dd，J=8.7、1.9 Hz，1H）、7.38-7.25（m，2H）、7.10（dd，J=7.7、1.7 Hz，1H）、7.03（d，J=8.6 Hz，1H）。HRMS （MALDI） Calcd for C20H11ClF6N2O2[M＋H]＋：461.048 60，found 461.048 77。

化合物TM-14为白色粉末，收率为82%，熔点为119.5～120.7℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.44（s，1H）、8.82（d，J=4.6 Hz，1H）、8.11（d，J=1.9 Hz，1H）、7.98-7.89（m，2H）、7.80（dd，J=7.8、4.8 Hz，1H）、7.73（dd，J=8.7、2.0 Hz，1H）、7.34-7.31（m，2H）、7.08（dd，J=7.7、1.8 Hz，1H）、7.00（d，J=8.6 Hz，1H）。HRMS（MALDI）Calcd forC20H11BrF6N2O2[M＋H]＋：504.998 09，found 504.997 21。

化合物TM-15为白色粉末，收率为81%，熔点为124.5～125.1℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.42（s，1H）、8.82（d，J=4.6 Hz，1H）、8.21（d，J=1.8 Hz，1H）、7.97（d，J=7.8 Hz，1H）、7.92（dd，J=7.6、2.0 Hz，1H）、7.80（dd，J=7.8、4.7 Hz，1H）、7.73（dd，J=8.7、1.9 Hz，1H）、7.36-7.22（m，2H）、7.02（dd，J=7.7、1.8 Hz，1H）、6.92（d，J=8.6 Hz，1H）。HRMS（MALDI）Calcd for C20H11F6IN2O2[M＋H]＋：552.984 22，found 552.984 07。

化合物TM-16为白色粉末，收率为85%，熔点为152.8～153.4℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.47（s，1H）、8.85（d，J=4.4 Hz，1H）、8.09（s，1H）、8.02（dd，J=16.3、8.3 Hz，2H）、7.89-7.83（m，2H）、7.44-7.34（m，2H）、7.21（d，J=7.4 Hz，1H）、7.15（d，J=8.8 Hz，1H）。HRMS（MALDI） Calcd for C21H11F9N2O2[M＋H]＋：495.074 96，found 495.074 18。

化合物TM-17为白色粉末，收率为89%，熔点为73.4～74.1℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.37（s，1H）、8.81（d，J=4.5 Hz，1H）、8.01-7.94（m，1H）、7.89（d，J=7.7 Hz，1H）、7.78（dd，J=7.8、4.8 Hz，1H）、7.22（d，J=7.8 Hz，1H）、7.18-7.09（m，2H）、6.99（d，J=7.7 Hz，1H）、6.74（s，1H）、6.67（dd，J=7.3、2.1 Hz，1H）、2.87-2.74（m，1H）、2.12（s，3H）、1.12（d，J=6.9 Hz，6H）。HRMS（MALDI）Calcd for C23H21F3N2O2[M＋H]＋：415.162 79，found 415.163 37。

化合物TM-18为白色粉末，收率为73%，熔点为85.8～87.1℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.39（s，1H）、8.82（d，J=4.5 Hz，1H）、8.04-7.89（m，2H）、7.80（dd，J=7.8、4.7 Hz，1H）、7.27（d，J=7.9 Hz，1H）、7.13（pd，J=7.4、1.7 Hz，2H）、6.98（d，J=7.7 Hz，1H）、6.73-6.63（m，2H）、3.18（dt，J=13.8、6.9 Hz，1H）、2.56-2.47（m，1H）、1.14（d，J=6.9 Hz，6H）。 HRMS（MALDI）Calcd for C23H21F3N2O2[M＋H]＋：415.162 79，found 415.162 46。

化合物TM-19为白色粉末，收率为75%，熔点为99.1～100.3℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.46（s，1H）、8.83（d，J=4.6 Hz，1H）、8.09-7.95（m，2H）、7.89-7.79（m，2H）、7.67（d，J=8.2 Hz，1H）、7.43-7.28（m，2H）、7.18（s，1H）、7.12（dd，J=7.6、1.9 Hz，1H）。HRMS（MALDI）Calcd for C21H11F9N2O2[M＋H]＋：495.074 96，found 495.074 00。

化合物TM-20为白色粉末，收率为90%，熔点为162.3～163.2℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.35（s，1H）、8.80（d，J=2.8 Hz，1H）、8.02-7.88（m，1H）、7.86-7.72（m，2H）、7.27-7.13（m，2H）、7.03-6.90（m，1H）、6.78（s，1H）、6.60（s，2H）、2.23（s，6H）。HRMS（MALDI）Calcd for C21H17F3N2O2[M＋Na]＋：409.113 43，found 409.113 81。

化合物TM-21为白色粉末，收率为82%，熔点为142.9～143.4℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.44（s，1H）、8.81（d，J=4.0 Hz，1H）、7.99（dd，J=7.7、1.8 Hz，1H）、7.92-7.87（m，1H）、7.84（s，1H）、7.78（dd，J=7.8、4.7 Hz，1H）、7.50（s，2H）、7.44-7.32（m，2H）、7.27（dd，J=7.8、1.7 Hz，1H）。HRMS（MALDI）Calcd for C21H11F9N2O2[M＋H]＋：495.074 96，found 495.075 33。

化合物TM-22为白色粉末，收率为79%，熔点为103.9～104.7℃。

1H NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：10.42（s，1H）、8.83（d，J=4.4 Hz，1H）、8.06-7.90（m，2H）、7.81（dd，J=7.8、4.7 Hz，1H）、7.39-7.24（m，2H）、7.14（dd，J=7.5、2.0 Hz，1H）、6.94（dd，J=9.1、6.0 Hz，2H）。HRMS（MALDI）Calcd for C19H10F6N2O2[M＋H]＋：413.071 92，found 413.410 12。

1.4 离体酶抑制活性测定

按文献[9]中的方法对合成的22个目标化合物进行离体酶水平的活性测试。测试中使用的SDH来自猪心线粒体。反应底物为琥珀酸和2,6-二氯酚吲哚酚钠（2,6-dichlorophenolindophenol,DCIP）。琥珀酸被氧化成延胡索酸，被还原后的泛醌继续将电子传递给电子受体DCIP，最终DCIP被还原并产生光吸收变化。反应总体积为200 μL，其中含pH=7.4的100 mmol/L磷酸缓冲液、20 mmol/L琥珀酸、53 μmol/L DCIP、0.3 mmol/L乙二胺四乙酸（EDTA）和20.6 nmol/L酶，在30℃恒温条件下反应，监测7 min内波长为600 nm处底物DCIP的还原产物的光吸收变化。根据DCIP的摩尔消光系数21 mmol/(L·cm)，可以计算得到DCIP的还原产量，并用origin软件拟合得到反应初速度。加入不同抑制剂时反应速率不同，按照公式计算抑制率，并用Sigmaplot软件拟合求出IC50值。

1.5 分子对接

小分子的三维结构通过SYBYL-X 2.0构建，使用最陡下降法和共轭梯度法各2 000步优化结构，收敛标准为0.001 kcal/(mol·Å)。受体选用猪心SDH，其晶体结构可从PDB库中获取（PDB ID：1ZOY）。由于其活性腔只涉及B、C、D三条链，且距离A链较远，所以对接时将A链删除。对接时格点盒子大小设置为50×44×44，格点间距为0.375 Å。对接过程中使用拉马克遗传算法搜索构象，对接构象个数为256。其余参数均采用默认值。对接结束后，挑选合适的构象进行简单优化并计算结合能，挑选结合能最优的构象确定其结合模式[10]。

1.6 温室盆栽试验

委托沈阳化工研究院对22个目标化合物进行活体水平的杀菌活性测试，具体方法参见文献[11]杀菌剂卷中SOP-SC-1101黄瓜白粉病盆栽法、SOP-SC-1119玉米锈病盆栽法和SOP-SC-1120大豆锈病盆栽法。

2 结果与分析

2.1 离体酶抑制活性

目标化合物对猪心来源SDH的抑制活性测试结果见表2。由表2可见，10个化合物的IC50值达到了微摩尔水平，优于对照药剂啶酰菌胺，其中化合物TM-12、TM-15、TM-18的IC50值分别为0.24、0.23、0.20 μmol/L，较啶酰菌胺（IC50=2.57 μmol/L）提高了近10倍。总结构效关系发现：①对于单取代化合物，2号位取代最优，对于2号位取代的化合物活性，2-CF3＞2-Br＞2-Cl＞2-F，说明2号位的位阻越大，越有利于活性的提高；②对于双取代化合物，2,3-二取代、2,4-二取代和2,5-二取代活性普遍较高，只有3,5-二取代的化合物的活性较差，在10 μmol/L的浓度下抑制率小于50%，进一步说明了2号位对活性的保持至关重要。

2.2 作用模式研究

为了研究目标化合物与靶标蛋白的作用模式，将酶抑制活性较好的代表化合物TM-18和啶酰菌胺分别与猪心来源SDH进行了分子对接，结果发现啶酰菌胺的酰胺氧原子与B_W173残基和D_Y91残基形成两个氢键（图5（A））；吡啶环与C_R46残基形成π-cation相互作用；联苯的中间苯环处于C_I30、C_W35、C_I43和B_W172残基形成的疏水口袋中。代表化合物TM-18的结合模式（图5（B））与啶酰菌胺类似，其酰胺氧原子与B_W173残基和D_Y91残基形成两个氢键；吡啶环与C_R46残基形成π-cation相互作用；二苯醚的中间苯环部分同样处于SDH的疏水口袋中。此外，化合物TM-18二苯醚的末端苯环与D_Y91残基形成π-π相互作用，与C_I43残基和B_W173残基形成疏水相互作用，以上作用使得化合物TM-18与SDH结合时有较强的范德华力，如表3所示，其ΔEvdw为-48.41 kcal/mol，绝对值大于啶酰菌胺与SDH的ΔEvdw（-40.76 kcal/mol）绝对值。

表2 目标化合物对猪心来源SDH的抑制活性

图5 啶酰菌胺和化合物TM-18与猪心来源SDH的结合模式及TM-18和啶酰菌胺的叠合图

表3 代表化合物TM-18和啶酰菌胺与猪心来源SDH的计算结合自由能 kcal/mol

2.3 温室盆栽杀菌活性

目标化合物对黄瓜白粉病、玉米锈病和大豆锈病的杀菌活性测试结果见表4。由表4可见，目标化合物TM-5、TM-13、TM-14、TM-15、TM-16和TM-19表现出广谱的杀菌活性，在6.25 mg/L下对黄瓜白粉病、玉米锈病和大豆锈病防效优异，优于对照药剂啶酰菌胺。进一步EC90值测试结果见表5。化合物TM-16对黄瓜白粉病的治疗效果EC90值为28.74 mg/L，较苯醚甲环唑（108.15 mg/L）提高了近3倍。

3 结 论

本文以啶酰菌胺为先导化合物，设计合成了一类含二苯醚结构单元的靶向SDH的新型烟酰胺类化合物。酶抑制活性测试结果显示，10个化合物对猪心来源SDH的IC50值均达到了微摩尔水平，其中化合物TM-12、TM-15、TM-18的IC50值分别为0.24、0.23、0.20 μmol/L，较啶酰菌胺提高了近10倍。通过分子对接发现，新化合物在保留啶酰菌胺酸部分和酰胺键与SDH之间关键作用的同时，二苯醚的末端苯环还与氨基酸残基形成了π-π相互作用和疏水相互作用，这可能是新化合物活性较好的原因。

表4 目标化合物的温室盆栽杀菌活性筛选结果

表5 目标化合物TM-16的深入杀菌活性筛选

构效关系研究表明，二苯醚末端苯环2号位的取代基对活性的保持至关重要，且2号位上位阻较大的取代有利于活性的提高。进一步温室盆栽试验结果表明，化合物TM-5、TM-13、TM-14、TM-15、TM-16和TM-19表现出广谱的杀菌活性，在6.25 mg/L质量浓度下对黄瓜白粉病、玉米锈病和大豆锈病具有优异的防效，优于对照药剂啶酰菌胺。其中化合物TM-16对黄瓜白粉病的治疗效果EC90值为28.74 mg/L，明显高于苯醚甲环唑，具有进一步研究价值。本研究为新型烟酰胺类化合物的设计与构效关系研究提供了新思路。