HSP90 和PLK1 在脑胶质瘤的表达及其临床意义

赵伟

（新疆维吾尔自治区人民医院 新疆 乌鲁木齐 830000）

脑胶质瘤是临床中最为常见的一种颅内肿瘤，多呈浸润性生长，不仅治疗难度大，而且患者预后较差，严重影响人们身心健康[1]。近年来，随着分子检测手段的不断发展进步，恶性肿瘤相关基因表达情况已经成为临床研究的一个热点。研究显示[2]，热休克蛋白90（HSP90）在多种恶性肿瘤中均呈高表达，参与了恶性肿瘤发生及发展过程。Polo 样激酶1（PLK1）为细胞周期调控基因，在结肠癌等恶性肿瘤发生及发展中起到了重要作用[3]。本文分析了HSP90 和PLK1 在脑胶质瘤的表达及其临床意义，现将结果报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取医院2019 年1 月—2020 年4 月接受手术治疗的脑胶质瘤患者47 例，手术切除患者脑胶质瘤组织作为脑胶质瘤组，另选取同时期47 例脑外伤手术患者健康脑组织作为对照组。详细收集患者的基线资料，主要包括年龄、性别、病理学类型、浸润深度等一般资料。47 例患者中，男性28 例，女性19 例；年龄43～69 岁，平均年龄（56.09±7.46）岁。

1.2 方法

1.2.1 HSP90 和PLK1 蛋白检测 取甲醛溶液固定脑胶质瘤组织和健康脑组织，开展石蜡包埋和连续切片（厚度4m），再实施常规二甲苯脱蜡和梯度酒精脱水处理，用3%过氧化氢封闭处理内源性过氧化物酶，并对标本实施常规脱蜡，再开展微波抗原修复，于10%山羊血清封闭组织内加入非特异性抗原开展操作，并加入适量兔抗人HSP90 和PLK1 抗体，抗体均购自南京福麦斯生物科技有限公司，在4℃的冰箱内孵育24h，用PBS 缓冲溶液替代一抗作阴性对照；同时，于次日滴加适量的羊抗兔二抗（HSP90和PLK1 蛋白二抗均经生物素标记），实施SP（免疫组化）染色及DAB 显色，用苏木素实施复染，选择中性树脂封片，于显微镜下观察，将已知的脑胶质瘤阳性切片视作阳性对照。

1.2.2 结果判读 通过半定量积分法实施结果判定：①按每张切片内细胞染色强度进行评分，无显色记0 分，浅黄色染色记1 分，棕黄色染色记2 分，棕褐色染色记3 分。②按组织切片内阳性染色细胞数和总肿瘤细胞数的比值实施评分，若0 分：比值≤5%，1 分：＞5%并≤25%，2 分：＞25%并≤50%，3 分：＞50%并≤75%，4 分：比值＞75%。将上述两项评分相乘获取总评分，总评分为0 分代表阴性（-），1-12 分代表阳性。

1.2.3 浸润程度判断 取脑胶质瘤瘤周水肿区标本进行病理检查，常规处理后进行HE 染色，于高倍镜头下随机选取5 个视野进行肿瘤细胞计数，计算肿瘤细胞占正常细胞额百分比，其中无肿瘤细胞为无浸润，肿瘤细胞＜20%为轻度浸润，20%～40%为中度浸润，＞40%为重度浸润[4]。

1.2.4 瘤周水肿程度 根据中华医学会神经外科会2009 年专家共识征求意见稿的中标准，采用水肿指数对瘤周水肿进行分级，分为无水肿、轻度水肿、中度水肿以及重度水肿[5]，见图1。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0 统计软件对数据进行处理，计数资料用百分数（%）表示，采用χ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 两组HSP90 和PLK1 阳性表达水平比较

脑胶质瘤组HSP90 和PLK1 阳性率显著高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05）。见图2～3、表1。

图2 Ⅰ级～Ⅳ级的脑胶质瘤HE 染色（标尺为50μm）

图3 A：HSP90 在正常脑组织中的表达；B：HSP90 在脑胶质瘤组织中的表达；C：PLK1 在正常脑组织中的表达；D：PLK1 在脑胶质瘤组织中的表达（SP×400）

图1：A 无水肿；B 轻度水肿；C 中度水肿；D 重度水肿

表1 两组HSP90 和PLK1 阳性表达水平比较[n（%）]

2.2 脑胶质瘤患者临床病理特征与HSP90 和PLK1 表达的关系

HSP90、PLK1 在脑胶质瘤组织中的表达与年龄、性别、病理学类型无关（P＞0.05），与瘤周水肿、病理分级、组织分化程度以及浸润深度相关（P＜0.05），见表2。

表2 脑胶质瘤患者临床病理特征与HSP90 和PLK1 表达的关系[n（%）]

3.讨论

目前，对于脑胶质瘤患者虽然给予手术以及化疗等综合治疗，但是患者预后依然不满意，因而深入分析脑胶质瘤发病机制，对该病早期诊断以及改善患者预后具有重要意义。PLK1 是一种在真核细胞中广泛存在的高度保守的丝氨酸/苏氨酸激酶，参与了多种细胞周期性事件，在促进细胞增殖方面如胞质分离以及纺锤体形成等起到重要作用；PLK1 对细胞分裂进行精确调节的同时，对维持基因组稳定、纺锤体组装和DNA 损伤反应至关重要[6]。研究指出[7]，PLK1 过度表达出现在多种癌细胞中,并且与癌症预后不良相关；此外，PLK1 过表达与癌症侵袭和转移也存在关系。

热休克蛋白又名应激蛋白，是机体受到外界不利因素刺激后，迅速合成表达的一类蛋白。HSP 家族成员有6 类，根据分子量的不同分为HSP110、HSP90、HSP70、HSP60、HSP40 以及小分子热休克蛋白。作为一类糖蛋白，HSP 在遗传上高度保守,不同种属的同种HSP 的核苷酸序列和氨基酸序列具有高度的同源性。在细胞中，HSP 最主要的作用之一是作为分子伴侣参与新合成蛋白的正确折叠、帮助受到压力作用后被破坏的蛋白质的重新复性、维持蛋白质的构象和稳定等[8]。随着对肿瘤发生发展分子机制研究的深入，人们发现HSP90 由于对肿瘤癌变过程中多条信号通路中的蛋白质起重要调节作用。

研究显示，在多种恶性肿瘤中PLK1、HSP90 均表现为异常表达状态，而抑制HSP90、PLK1 活性可以降低肿瘤细胞的增殖以及迁移活性[9,10]。本文结果显示，脑胶质瘤组HSP90 和PLK1 阳性率显著高于对照组，表明HSP90 和PLK1 在脑胶质瘤中均呈高表达。进一步分析发现，HSP90、PLK1 在脑胶质瘤组织中的表达与瘤周水肿、病理分级、组织分化程度以及浸润深度相关，瘤周水肿、病理分级、组织分化程度越高，浸润深度越深，HSP90、PLK1 阳性率越高。研究结果提示，HSP90 和PLK1 与脑胶质瘤患者病情进展密切相关，可作为评估脑胶质瘤患者病情进展的重要指标。

综上所述，HSP90 和PLK1 在脑胶质瘤中均呈高表达，且与病情进展密切相关。在随后的研究中还需要扩大样本量，进一步深入研究，以明确HSP90、PLK1 蛋白的作用机制及其对脑胶质瘤患者远期预后的影响。