哮喘患儿血清抗菌肽LL-37、白三烯B4与25-羟维生素D3的相关研究

王璐 司利钢 王亚君

支气管哮喘为影响小儿生长发育、健康常见呼吸系统疾病，对患儿家庭、社会均造成严重负担。支气管哮喘发生机制尚未研究清楚，可能与气道高炎症反应、高应激反应等有相关性。研究指出，肥大细胞、白三烯及相关炎症因子在哮喘患儿气道分泌物中有较高表达水平[1]。抗菌肽LL-37为近年临床发现天然防御系统重要组成部分，与多种过敏原致病性有密切相关性[2]。白三烯为花生四烯酸在5-脂氧合酶代谢作用下产生代谢产物，为气道炎症反应重要介质物质。25-(OH)VD3在哮喘发生、发展中同样有一定相关性，但其具体关系仍存在争议[3]。为探究三者在哮喘患儿中表达水平及相关性，笔者研究如下。

资料与方法

一、一般资料

选取2017年2月～2018年3月哈尔滨医科大学附属第一医院儿科住院或门诊诊治哮喘患儿20例、非哮喘肺炎患儿20例分别作为哮喘组和肺炎组，选取同期我院体检中心体检健康儿童20例作为对照组。纳入标准：①年龄3～16岁。②哮喘组患儿诊断符合《儿童支气管哮喘诊断与防治指南(2016年版)》[4]，均为哮喘稳定期。③肺炎组患儿诊断符合《儿科学(第8版)》中小儿肺炎诊断并标准[5]。④对照组均为体检健康儿童。⑤各组儿童家属均在医师告知下了解本次研究方法和内容，签署知情同意书自愿配合进行本次研究。排除标准：①近2周服用糖皮质激素、免疫抑制剂或影响炎症反应、应激反应药物。②合并有其它过敏性、氧化应激反应疾病者，如红斑狼疮等。哮喘组、肺炎组、对照组间男/女、年龄比较无统计学差异(P>0.05)(见表1)。

表1 组一般临床资料

二、方法

1 标本收集 收集入组儿童病史，包括过敏性皮炎、湿疹、食物过敏、过敏性鼻炎、药物过敏等，并仔细进行体格检查。符合标准后，检测并比较儿童LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平，分析各组间LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平相关性。

2 检测方法 入组次日，空腹状态下，抽取各组儿童肘部静脉血3～5 mL置入离心管中，在常温下放置2 h，使标本凝固，再放入4℃冰箱(中国，容声)中，冷藏4～8 h，以4000 r/min速度离心5 min(台式高速离心机)，吸取上清液至少100 μL置入Eppendorf管中，并在对应Eppendorf管上编码患儿姓名、编号，后将标本冷冻于-20℃冰箱中，保存待测。用酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)中双抗体夹心(Double-antibody sandwich)方法定量分析LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平。试剂盒均由武汉华美生物(CUSABIO)公司生产。

三、统计学处理

结 果

一、各组LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平比较

哮喘组LL-37、LT-B4水平显著高于肺炎组、对照组，25-(OH)VD3水平显著低于肺炎组、对照组(P<0.05)；肺炎组LL-37、LT-B4水平显著高于对照组，25-(OH)VD3水平显著低于对照组(P<0.05)(见表2)。

二、各组LT-B4与LL-37水平相关性

Pearson分析得出：哮喘组LT-B4与LL-37相关系数为-0.0221，无相关性。肺炎组LT-B4与LL-37相关系数为-0.247，无相关性。对照组LT-B4与LL-37相关系数为0.225，无相关性。

三、各组LL-37与25-(OH)VD3水平相关性

Pearson分析得出：哮喘组LL-37与25-(OH)VD3相关系数为0.199，无相关性。肺炎组LL-37与25-(OH)VD3相关系数为-0.039，无相关性。对照组LL-37与25-(OH)VD3相关系数为0.041，无相关性。

讨 论

哮喘为小儿常见呼吸系统过敏性、炎症反应性疾病，与患儿遗传、环境、反复呼吸道感染等均有相关性，对患儿健康、生活质量均造成严重影响。支气管哮喘发病机制尚未研究清楚，认为与多种炎症介质、炎症因子发生有关[6-7]。分析炎症因子、炎症介质在哮喘患儿中表达水平及相关性，对临床诊断、治疗支气管哮喘有重要指导价值[8-10]。

根据本研究结果得出，哮喘患儿LL-37、LT-B4水平显著升高，25-(OH)VD3水平显著降低(P<0.05)；但各组间相LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平无相关性(P>0.05)。有关研究发现，肺部感染患者中，LL-37在支气管上皮细胞、肺内炎性细胞、肺泡上皮细胞及成纤维细胞细胞浆和细胞膜中均表达阳性[11-12]。支气管哮喘和肺炎虽然发病因素不同，但两者均能诱导支气管上皮细胞产生炎症介质，引起炎症细胞在支气管中聚集，认为LL-37为重要免疫调节因子[13-14]。另有学者分析哮喘患者中LL-37表达水平，得出LL-37水平显著升高，分析LL-37在哮喘患者中通过趋化中性粒细胞、肥大细胞、T细胞及单核细胞作用，能刺激肥大细胞脱颗粒，调节主动防御机制[15-16]。肥大细胞为介导免疫反应重要细胞，能引起气道水肿、痉挛狭窄，为哮喘发生的重要病理作用，因此，可见LL-37在哮喘中有重要促进作用。LT-B4为白三烯中趋化嗜酸细胞、中性粒细胞最强的白三烯类细胞激活剂，为引起呼吸系统过敏反应重要介质之一。实验研究指出，吸入LT-B4后，支气管灌洗液中，中性粒细胞数量可增加17倍[17-18]。有学者分析学龄期哮喘儿童与健康儿童呼气气体中LT-B4水平差异，同样得出LT-B4水平在哮喘患儿中水平较高，且与患儿哮喘严重程度呈相关性[19-21]。另有学者研究证实，LT-B4具有较强中性粒细胞趋化作用，能促使中性粒细胞在支气管肺泡内聚集，促使哮喘发生，并加重哮喘患者症状[22]。临床有相关研究，表明25-(OH)VD3途径中多个基因与哮喘发生有相关性[23-24]。一项国外独立研究发现，哮喘、过敏反应均与25-(OH)VD3有相关性，同时证实25-(OH)VD3水平与哮喘严重程度有一定负相关性[25]。分析25-(OH)VD3在哮喘中致病作用，认为25-(OH)VD3水平下降能影响机体免疫功能，增加患儿呼吸系统感染发生风险，进而增加对小儿气道刺激损伤作用，增加哮喘发生风险。但目前，临床中针对哮喘患儿是否需要补充25-(OH)VD3进行治疗，仍存在较大争议，今后临床还应进行大量实验研究，以准确分析25-(OH)VD3和哮喘关系，为临床治疗哮喘提供另一新思路。

表2 各组LL-37、LT-B4、25-(OH)VD3水平比较

注：与肺炎组、对照组比较，*P<0.05；与对照组比较，#P<0.05

综上所述，哮喘患儿LL-37、LT-B4水平显著升高，认为LL-37和IL-B4与哮喘发生有一定关联性；哮喘患儿25-(OH)VD3水平显著降低，认为25-(OH)VD3水平降低影响患儿免疫功能，为增加哮喘发生风险重要原因。但本研究受到实验条件、样本数量限制，可能对实验结果造成一定影响，今后可进一步扩大研究样本量进行研究和分析，以获得更为准确研究数据。