血站酶联免疫检测技术与核酸检测技术在乙肝病毒筛查中的应用比较

闫晓娟 班永刚

(1.陕西省商洛市中心血站检验科，陕西 商洛 726000；2.陕西省榆林市中心血站质管科，陕西 榆林 719000)

乙型病毒性肝炎主要是由乙型肝炎病毒感染所引起，最终会导致肝脏细胞坏死以及纤维化，部分病患还可出现肝硬化以及肝癌[1-2]。慢性乙肝病患、急性乙肝病患以及乙型肝炎病毒携带者为主要传染源，血站对所有采集的血液进行乙肝表面抗原的酶联免疫吸附法检测和核酸检测,防止受血者出现乙肝病毒感染情况[3-4]。本研究分析血站乙肝病毒采用酶联免疫吸附法检测以及核酸检测效果差异，现报告如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2018年1月至2019年1月本血站血液标本乙肝病毒筛查的献血者22 456例。献血者中男11 230例，女11 226例；年龄30～50岁，平均(40.22±5.16)岁。

1.2方法 献血者均与采集的血液同源留取两管血液标本，各5 mL,其中一管为EDTA.K2抗凝真空管,用于酶联免疫吸附实验；一管为分离胶抗凝真空管,用于核酸检测。所有标本采集后检测前均需保存在2～8 ℃的冰箱内，核酸标本需在4 h内离心，72 h内完成检测。酶联免疫吸附试验检测乙肝表面抗原，室内质控品使用康彻思坦生物标准物质。初检使用北京万泰试剂，使用TECAN Freedom EVO clinical全自动加样系统进行酶免加样，西门子BEPⅢ全自动酶免分析系统进行检测。复检使用厦门新创试剂，使用TECAN Freedom EVO clinical全自动加样系统进行酶免加样，FAME 24/20全自动酶免分析系统进行检测。酶免试验两遍检测均无反应性标本，进行核酸检测。核酸检测乙肝病毒，试剂与设备使用罗氏cobas s 201核酸检测系统，采用6混样的检测模式。混样有反应性标本进行拆分检测，拆分有反应性标本判定为有反应性。室内质控品使用康彻思坦生物标准物质。所有试验操作严格按照试剂盒说明书和实验室标准。酶联免疫检测和核酸检测项目均参加了国家卫健委临检中心室间质评，且室间质评结果均合格。

1.3观察指标 (1)观察酶联免疫吸附法以及核酸检测法阳性检出率。(2)比较两种检查方式窗口期以及漏诊率。

2 结 果

2.1阳性率比较 22 456例献血者经酶联免疫吸附法检测后117例为乙肝表面抗原阳性，诊断阳性率0.52%；核酸检测显示149例诊断为HBV-DNA阳性，诊断阳性率0.66%；两种检测方式乙肝病毒阳性诊断率存在显著差异(χ2=3.873，P<0.05)。

2.2窗口期以及漏诊率比较 酶联免疫吸附法检测表面抗原窗口期是(30.89±1.06)d，核酸检测法检测乙肝病毒窗口期是(25.21±1.01)d，两种检查方式窗口期比较，差异有统计学意义(t=581.343，P<0.05)。酶联免疫吸附法漏诊率是0.07%(15/22 456)，核酸检测法漏诊率是0.02%(5/22 456)，两种检查方漏诊率比较，差异有统计学意义(χ2=5.002，P<0.05)。

3 讨 论

乙肝病毒DNA是乙肝病毒的脱氧核糖核酸，是乙肝病毒感染最直接、敏感度高以及特异性腔的指标，若检测结果显示乙肝病毒DNA呈阳性，则表示乙肝病毒可复制，且具有传染性，并且乙肝病毒DNA水平越高则代表病患复制速度越快，传染性越强[5]。酶联免疫吸附法主要是通过将相应抗原或抗体固定在某一载体表面，并且可长期保持其蛋白免疫活性，再将某种特定酶置于抗体或抗原上，一方面可保持抗体或抗原活性，另一方面也可保留酶特定生物活性[6]。研究[7]认为对无偿献血者联合使用酶联免疫吸附法以及核酸检测技术进行检测，可提升乙肝病毒筛查效果，从而避免通过血液传播乙肝病毒。

采用酶联免疫吸附法进行表面抗原检测，可发挥一定诊断效果，但酶联免疫吸附法操作方法较复杂，反复操作性较差，并且大多数酶联免疫吸附检测试剂盒仅可实施定性检测，若需实施定量检测则成本较高，并且其窗口期较长，不利于临床筛查[8]。核酸是病毒基因存储部位，病毒主要通过核酸进行复制。核酸检测是目前临床准确性最高以及灵敏度最高的检测方式，可通过观察荧光信号收集检测结果，有效避免酶联免疫吸附法检测局限性，从而降低漏诊率。本研究结果发现，核酸检测检测阳性率高于酶联免疫吸附法(χ2=3.873，P<0.05)。核酸检测法窗口期、漏诊率低于酶联免疫吸附法(P<0.05)。核酸检测主要是对人体病毒的核酸进行检测，对环境以及检测者技术水平要求较高，并且为避免出现假阳性结果，对血液样本的保存条件以及处理措施也同样有较高要求[9]。观察其检测结果可直接、有效反应被检测者是否存在乙肝病毒感染情况，同时还可了解乙肝病毒病患血清中病毒量，为临床治疗方案的制定以及治疗效果的判断提供数据支持[10]。