钠离子通道调节蛋白1与肝癌患者3年预后的相关性研究

唐巧萍 段志强 乔悾

肝癌在各类肿瘤中发病率位居第5位，死亡率居于第3位[1]。由于早期缺乏典型症状，大部分患者入院就诊时，病情进展成中、晚期，增加治疗难度与死亡风险。近年来，有研究发现钠离子通道调节蛋白1(SCNM1)与肿瘤进展、转移存在关联[2]。SCNM1可促使肿瘤细胞中钙离子浓度改变，从而致其处于暂时性去极化状态，促进肿瘤进展[3]。本研究旨在分析SCNM1与肝癌患者3年预后的相关性，便于对患者预后进行预测，为临床治疗提供依据，现报道如下。

资料与方法

一、一般资料

回顾性分析我院2014年2月—2016年2月收治的90例肝癌患者的临床资料，所有患者均经病理穿刺证实为肝癌。其中男47例，女43例，年龄35～77岁，平均(58.93±11.26)岁；肿瘤直径：≥5 cm 41例，<5 cm 49例；肿瘤分期：Ⅰ～Ⅱ期52例，Ⅲ～Ⅳ期38例；Child-Pugh分级：A级32例，B级48例，C级10例；肝硬化：有36例，无54例。

二、纳入与排除标准

(一)纳入标准 ①经病理检查证实为肝癌，诊断明确；②取癌组织及癌旁组织检测SCNM1表达水平；③入院前无肝部手术史与放疗、化疗史；④病例资料完整。

(二)排除标准 ①合并其他恶性肿瘤；②复发性肿瘤；③未留联系方式，无法进行随访；④病理标本不合格。

三、方法

采用RT-qPCR检测法测定癌组织、癌旁组织的SCNM1表达水平。(1)提取标本总RNA：①取去离子水800 mL加入烧杯内，然后取DEPC800 μL加入，制备成DEPC水，封闭，避光下反应4 h。将器材、耗材于DEPC水内浸泡，将瓶口封闭，过夜。所有耗材均进行高压灭菌，将残余DEPC水去除，烤干。②将组织标本取出，取组织块50 mg置于玻璃器皿内。取Trizol试剂200 μL加入，待彻底研磨后，移至EP管内。另取Trizol试剂800 μL对研磨器予以冲洗，转移液体至EP管内，充分混匀，在室温下反应5 min。③取200 μL氯仿加至EP管内，振荡15 min，混合充分，在室温下反应10 min，离心15 min(7500 rpm)。④选取一个新的EP管，将上层水相移至EP管内。⑤取异丙醇500 μL加入，充分混匀，在-20 ℃条件下反应20 min，离心1 min(7500 rpm)。⑥弃血清，将沉淀物留取，取提前配制的乙醇溶液1000 μL加至EP管内，振荡、洗涤，离心5 min(7500 rpm)。⑦弃血清，将EP管的管口打开，吹干。⑧取无菌DEPC水20 μL将沉淀溶解，获取样本RNA。(2)逆转录：①常规对标本进行溶解。②取总RNA 1 μg加入EP管内，振荡，充分混匀，短暂离心。③在70 ℃条件下进行水浴，时间为5 min，转入冰上。④依次取5×Buffer 4 μL、RNase抑制剂1 μL、dNTP混合物2 μL加入，振荡，短暂离心。⑤在37 ℃条件下水浴，时间为5 min。⑥取逆转录酶1 μL加入，混匀，短暂离心。⑦在42 ℃条件下水浴1 h。⑧完成逆转录反应后，在70 ℃条件下水浴10 min，反应终止，存放于-80 ℃冰箱内。(3)PCR反应：SCNM1上游引物为CCGTGCAGGCA-AGAAACATC，下游为TTTCCCGTCCCATACCT-GTACT。反应条件为98 ℃ 60 s，(98 ℃ 10 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 60 s，42个循环)，72 ℃ 10 min。根据2-△△Ct法对其相对表达量进行计算。

四、观察指标

比较癌组织、癌旁组织的SCNM1表达水平。记录患者的临床资料，包括性别、年龄、肿瘤直径、肝功能分级、肝硬化，分析SCNM1表达水平与临床特征的关系。利用电话随访3年，记录患者的生存、死亡情况，分析SCNM1表达于3年预后的关系。

五、统计学方法

结 果

一、癌组织、癌旁组织的SCNM1表达水平比较

癌组织中SCNM1表达量为(11.64±3.26)，显著高于癌旁组织的(7.49±2.76)(t=9.217，P=0.000)。

二、SCNM1表达水平与临床特征的关系分析

男性患者癌组织SCNM1表达量为(10.23±3.95)，与女性患者的(10.15±3.89)比较无显著差异(t=0.097，P=0.923)。年龄≥60岁患者的SCNM1表达量为(11.21±2.12)，与年龄<60岁患者的(11.06±2.20)相比无显著差异(t=0.329，P=0.743)。肿瘤直径≥5 cm患者的SCNM1表达量为(10.93±2.12)，显著高于肿瘤直径<5 cm患者的(8.23±2.05)(t=6.127，P=0.000)。Child-Pugh A级患者的SCNM1表达量为(7.13±1.24)，显著低于B、C级患者的(10.45±2.08)、(10.81±2.23)(t=8.245，P=0.000)。有肝硬化患者的SCNM1表达量为(10.96±2.46)，显著高于无肝硬化患者的(8.04±1.34)(t=7.266，P=0.000)。

三、不同预后患者SCNM1表达分析

通过电话随访3年，提示在90例患者中，有43(47.78%)例存活，47(52.22%)例死亡。死亡患者的SCNM1表达量(10.75±2.37)显著高于存活患者(7.93±1.76)(t=9.063，P=0.000)。

讨 论

本研究发现与癌旁组织相比，癌组织中的SCNM1表达量显著增高，提示其表达水平上调与肝癌进展可能存在关联。SCNM1是离子通道的重要组成部分，它对维持机体活动而言意义重大，在肿瘤进展中也发挥着作用。研究表明钠离子通道可通过浓度门控钠离子、酸质子门控钠离子、电压门控钠离子三类通道被激活，这类通道在多种恶性肿瘤中存在表达，包括肺癌、前列腺癌、结肠癌等[4]。另有研究提示SCNM1可促使SCN8A突变表型的表达发生变化，从而对钠离子通道进行调控，参与肿瘤进展[5]。笔者推测这可能是SCNM1参与肝癌进展的重要机制。

通过分析SCNM1表达水平与临床特征的关系，提示其表达量与患者肿瘤直径、肿瘤分期、肝功能分级、肝硬化情况有关。而肿瘤直径肿瘤分期、肝功能分级以及肝硬化均已被证实对肝癌患者预后的影响非常大[6]。基于此，本次研究随访3年，分析SCNM1表达与患者预后的关系，提示与生存患者相比，死亡患者的癌组织中SCNM1表达水平更高。这表明SCNM1表达量越高，死亡风险越大。既往有研究人员针对结直肠癌患者进行分析，发现SCNM1在其癌组织中表达上调，但具体机制并未明确[7]。有研究指出SCNM1与癌症患者新生血管生成存在关联，它能促进血管内皮细胞、淋巴细胞、平滑肌细胞的增殖、分化[8]。笔者推测SCNM1可能通过促进新生血管生成，加重患者病情，导致癌细胞增殖、分化、转移，从而影响肝癌患者预后。

综上，SCNM1在肝癌患者的癌组织中呈高表达水平，其表达量与肿瘤直径、肿瘤分期、肝功能分级、肝硬化情况有关，患者SCNM1表达量越高，则死亡风险越高。此外，本研究也有不足，如仅选取90例患者，样本量少，未来需扩大样本量对此予以探讨。