溶血试验方法在医疗器械领域的应用

栾庆玲，隋馨，高雅松，孙长春

吉林省医疗器械检验所，吉林 长春 130000

溶血试验方法，是一项非常有意义的筛选试验，在试验操作规范的情况下，血浆血红蛋白量升高指示溶血并反映出在与材料和器械接触中红细胞膜的易破裂性[1-3]。红细胞因药物或毒性物质作用可发生溶解，本试验系将医疗器械或注射器的供试液与血液或血液稀释液直接接触，通过测定红细胞溶解后释放的血红蛋白量，来判定或检验供试品的体外溶血程度。本试验不适用于评价带药剂的器械。输液器和注射器是在医院和诊所中使用广泛，且与人体血液直接接触的医疗器械，因此溶血试验方法在检测医疗器械生物学评价中显得非常重要。本文采用两种溶血试验方法分别对二者进行检测，现将检测过程结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 仪器与材料

1.1.1 仪器 紫外分光光度计、电子天平、生化培养箱、水浴锅、离心机。

1.1.2 材料 蒸馏水；0.9%氯化钠溶液；新鲜抗凝兔血；新鲜稀释抗凝兔血：取新鲜抗凝兔血8 mL，加0.9%氯化钠注射液10 mL，即得；2%全血稀释液：取新鲜抗凝兔血2 mL，加0.9%氯化钠注射液至100 mL，即得；1%全血稀释液：取部分2%全血稀释液，加入等容积的0.9%氯化钠注射液即得。

1.2 方法

1.2.1 一次性使用输液器溶血试验

a.供试品的制备：称取各部件15 g，切成0.5 cm小段或约0.5 cm×2 cm大小块状。

b.供试液分组：试验组（A）：取3支试管，每支各加5 g供试品和0.9%氯化钠注射液10 mL；阴性对照组（B）：取3支试管，每支试管各加入0.9%氯化钠注射液10 mL；阳性对照组（C）：取3支试管，每支试管各加入蒸馏水10 mL。

c.按GB/T 14233.2中方法进行试验，将上述各组置（37±1）℃水浴中保温30 min，每管加入0.2 mL稀释兔血，混匀，置（37±1）℃水浴中保温60 min。倒出试管中液体，以800 g离心5 min。取上清液，用紫外分光光度计在545 nm处测定吸光度。

1.2.2 一次性使用无菌注射器（10 mL）溶血试验

a.供试液的制备：试验组（A）：取该批注射器3支，各加入1%的全血稀释液至全刻度容量；阴性对照组（B）：取3支试管，每管各加入1%的全血稀释液10 mL；阳性对照组（C）：取3支试管，每管各加入蒸馏水5 mL，2%的全血稀释液5 mL。

b.按GB 15810中规定的方法进行试验，将上述三组试验液同时置于（37±1）℃恒温箱中，保持60 min＋5 min。把供试液A分别装入3支试管中，每管各10 mL，以1500 r/min离心5 min。取上清液，用紫外分光光度计在545 nm处测定吸光度。

2 结果

2.1 结果计算 各组取3管平均值，按公式计算：溶血率（%）＝×100%。

注1：阴性对照管的吸光度应不大于0.03，阳性对照管的吸光度应为（0.8±0.3），否则应重新试验。

注2：按GB/T 14233.2中7.8规定，按本试验检验时，合格判定指标一般规定为溶血率应小于5%[1]；按GB 15810中5.12.3中规定注射器应无溶血反应（溶血率≤5%）[2]。

2.2 试验结果

2.2.1 一次性使用输液器溶血检测结果：溶血率为0.2%。

阴性对照组（B）吸光度值分别为：0.104、0.108、0.110；

试验组（A）吸光度值分别为：0.125、0.101、0.101；

阳性对照组（C）吸光度值分别为：1.006、0.984、0.822。

2.2.2 一次性使用无菌注射器溶血检测结果：溶血率为0.7%。

阴性对照组（B）吸光度值分别为：0.102、0.131、0.140；

试验组（A）吸光度值分别为：0.126、0.113、0.149；

阳性对照组（C）吸光度值分别为：0.936、0.809、0.890。

3 讨论

根据GB/T 16886.1标准中附录A中表A.1要考虑的评价试验[4]中与血间血路、循环血液接触的外部接入器械和与血液接触的植入器械需要进行血液相容性的评价试验。故以最常用的输液器和注射器为代表进行溶血检验，暂未发现二者产生溶血反应，结果表明，二者的溶血风险相对较低，但不代表所有医疗器械产品不存在溶血风险。该试验方法相对操作简便快捷，能快速准确的检测医疗器械产品的体外溶血程度，但不排除人为因素会影响试验结果。因此，在试验过程中，需要注意细节，如采血时，容易导致破坏血细胞的动作要轻，以免破坏血细胞，导致实验结果不准确；同时注意确保试验中所用的仪器均应该为检定合格的仪器，避免因仪器的因素，如离心机转速不够，影响试验结果等。