血小板相关抗体在维吾尔族免疫性血小板减少性紫癜诊断中的应用价值分析*

焦阿金，何川疆，许爱敏

(新疆喀什地区第一人民医院检验科，新疆喀什 844000)

免疫性血小板减少性紫癜(ITP)是由体内血小板相关抗体产生引起自身免疫系统对血小板的破坏增加，血小板数量减少而产生的一些列出血性症状和体征[1]。ITP的病因和机制尚未明确，儿童ITP可能与某些特异性病毒的感染有关，男、女发病率的差异提示ITP与雌激素水平也有一定关系[2]。临床上还有一部分血小板减少继发于一些内科系统疾病，如血液病、恶性肿瘤等，这类疾病引起血小板减少的原因主要为骨髓巨核细胞系功能障碍导致血小板生成减少，因此称为非免疫性血小板减少性紫癜[3]。不同类型紫癜治疗原则截然不同，这就需要对ITP进行准确可靠的诊断。本次研究对ITP与非免疫性血小板减少性紫癜患者体内血小板抗体水平进行分析，旨在为ITP的诊断与鉴别诊断提供临床依据。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2017年9月至2018年9月本院收治的ITP患者40例作为免疫组，其中男性13例，女性27例，年龄9～26岁，平均(17.7±2.6)岁，急性型15例，慢性型25例。同期选取非免疫性血小板减少性紫癜患者30例作为非免疫组，其中男性9例，女性21例，年龄13～30岁，平均(18.5±3.1)岁，再生障碍性贫血13例，骨髓增生异常综合征9例，急性髓系白血病8例。同期选取体检健康者20例作为对照组。诊断标准：符合《特发性血小板减少性紫癜诊疗建议(修订草案)》标准[4]。纳入标准：初次诊断为ITP，年龄在6～40岁，维吾尔族，血小板数量(30～300)×109/L。排除标准：合并其他内分泌及免疫系统疾病，妊娠及哺乳期妇女，入院前2周使用过影响血小板的药物。所有入选者均自愿加入本次研究并签署知情同意书，本研究已经本院伦理委员会认证批准。各组患者性别、年龄等一般临床资料差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2仪器及试剂 酶标仪(Epics XL Ⅳ)购自美国贝克曼-库尔特公司；血细胞自动分析仪购自上海雷度医疗设备公司，型号ABL80；血小板抗体检测试剂盒购自美国Galtag公司。

1.3方法 用真空采血管采取清晨空腹静脉血2 mL，无脂血和溶血，即刻分离血小板，在4只试管中分别加入同型、免疫球蛋白(Ig)G、IgA、IgM各10 μL和分离后血小板标本50 μL，室温避光保存30 min，磷酸盐缓冲液洗涤，2 500 r/min离心、弃上清。采用酶联免疫吸附测定法测定血小板相关抗体(PAIgA、PAIgM、PAIgG)，采用单克隆抗体特异性俘获血小板抗原(MAIPA)法测定血小板特异性抗体(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)，方法及操作步骤按说明书完成。检测过程中是同一操作人、试剂及仪器性能均一致，通过室内质控尽量减小实验误差。

2 结 果

2.1各组血小板抗体水平比较 非免疫组患者血小板相关抗体(PAIgA、PAIgM、PAIgG)及血小板特异性抗体(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)水平高于对照组；免疫组患者血小板相关抗体(PAIgA、PAIgM、PAIgG)及血小板特异性抗体(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)水平高于非免疫组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 血小板抗体表达水平及血小板计数情况

注：与免疫组相比，*P<0.05；与非免疫组相比，#P<0.05。

表2 ITP患者不同血小板水平组各血小板抗体水平比较

注：与>100组相比，*P<0.05；与50～100组相比，#P<0.05。

2.2血小板计数与各血小板抗体关系 不同血小板水平ITP患者血小板相关抗体(PAIgA、PAIgM、PAIgG)水平差异无统计学意义(P>0.05)，血小板特异性抗体(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)水平随血小板水平的降低而升高，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

2.3ITP患者血小板计数与血小板特异性抗体相关性分析 多元线性回归分析显示，ITP患者血小板计数与GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ水平具有负相关关系(r=-0.282、-0.331)，见表3。

表3 血小板计数与GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ水平相关性分析

3 讨 论

ITP是一组免疫介导的血小板过度破坏引起的出血性疾病，近年来，大量临床和动物试验证实，血小板抗体在ITP的发生和发展中扮演着重要角色[5-6]。血小板是从成熟的巨核细胞胞质中脱落而来，其表面具有复杂的抗原物质，根据抗原类型不同，血小板抗体可分为两大类：相关性抗体(PAIgA、PAIgM、PAIgG)和特异性抗体(GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ)，后者为血小板膜蛋白抗体[7-8]。血小板相关抗体(PAIG)通过Fab段与血小板表面抗原相结合，促进单核巨噬细胞对血小板的破坏和吞噬[9-10]。此外，PAIG还可与巨核细胞表面抗原结合，直接抑制血小板的生成[11-12]，因而PAIG升高是ITP的一个重要标志，现已列为ITP诊断标准之一[13]。

对于非免疫型患者来说，血小板的减少继发于其他系统病变引起的骨髓巨核细胞发育异常和生成障碍，而血小板抗体的产生则是次要因素，因此，理论上2种类型血小板减少性紫癜可通过血小板抗体水平加以鉴别[14]。本研究结果显示，免疫组患者PAIgA、PAIgM、PAIgG、GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ水平均高于非免疫组，差异有统计学意义(P<0.05)，说明血小板抗体可以作为2种类型紫癜的鉴别诊断依据。但需要注意的是，非免疫组患者血小板抗体水平与对照组的差异也有统计学意义(P<0.05)，提示非免疫性血小板减少性紫癜患者体内也有少量抗体产生并一定程度的参与发病过程，单纯将血小板抗体升高作为两种类型紫癜的鉴别诊断依据仍需慎重[15]。有学者认为，ITP与其他类型血小板减少性紫癜在血小板抗体水平方面可能存在某个临界值，这还需要大量临床试验加以证实[16]。

目前，现有文献中对于血小板抗体与血小板计数之间的关系报道较少，本研究将ITP患者按血小板计数不同分为3组，对比不同血小板计数ITP患者的血小板抗体水平，结果显示，PAIgA、PAIgM、PAIgG水平与血小板数量之间没有明显相关性，而GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ水平则随着血小板数量的降低而升高，与血小板计数存在明显的负相关关系(r=-0.282、-0.331)。提示血小板特异性抗体可用于评估疗效及预后。但也有学者认为，MAIPA测定法与酶联免疫吸附测定法相比过于繁琐，难以在临床中推广，且与PAIg相比，特异性抗体也无法提供更好的诊断价值，因而不推荐使用特异性抗体对两者进行鉴别[17]。笔者认为是否检测特异性抗体还需结合医疗中心检验技术水平和临床需求。且其诊断价值与PAIg一样，单纯升高时不能完全排除非免疫性血小板减少性紫癜。但对于已经确诊的ITP患者，可以通过监测特异性抗体水平对疾病的预后和疗效进行评估[18-19]。

综上所述，血小板抗体在ITP诊断和鉴别诊断中具有重要意义，其中，GPⅡb/Ⅲa、GPⅠb/Ⅸ水平还可作为评估疗效及预后的重要指标。