BoBs技术：快速产前检测非整倍体和微缺失综合征的有效方法

2020-03-02代文成何美香郭晓利马晓蓉王丽霞马光娟

国际检验医学杂志 2020年4期

代文成，张勇，余珍，何美香，郭晓利，马晓蓉，王丽霞，马光娟△

(1.新疆维吾尔自治区妇幼保健院产前诊断中心，新疆乌鲁木齐 830000；2.新疆普瑞赛新医学检验所，新疆乌鲁木齐 830000)

细胞遗传学方法的金标准为体外细胞培养及染色体核型分析，可以准确检测出染色体非整倍体及染色体倒位、易位、大于10 Mb的重复和缺失等结构异常[1]。目前应用较多的常见染色体非整倍体快速产前诊断技术包括荧光原位杂交技术和多重定量荧光聚合酶链式反应技术等[1-3]。染色体微阵列分析技术可检测染色体微缺失和微重复，但检测结果可能出现临床意义不明的拷贝数变异[4-7]。细菌人工染色体微珠(BoBs)检测技术除了能对21号、18号、13号及性染色体数目异常进行快速诊断外，还能对常见的9种染色体微缺失综合征进行检测[8-9]。本研究联合应用BoBs技术与传统的染色体核型分析技术对1 868例羊水标本进行产前诊断，即达到快速检测染色体非整倍体又扩展了9种染色体微缺失综合征检测。现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料选择2015年11月至2018年6月在新疆维吾尔自治区妇幼保健院就诊的1 868例，具有以下至少1项产前诊断指征的孕妇：(1)孕妇年龄≥35岁；(2)孕妇血清学产前筛查高风险；(3)胎儿超声筛查异常；(4)孕妇无创产前筛查高风险；(5)有染色体异常、染色体微缺失综合征生育史或妊娠史。孕妇年龄18～48岁，孕周18～24周，所有孕妇均签署知情同意书后行羊水穿刺术并获得伦理委员会得批准。

1.2方法

1.2.1BoBs检测仪器与试剂耗材均购自美国Perkin Elmer公司，将10 mL羊水用德国Qiagen公司的试剂盒提取基因组DNA，测量DNA水平后进行DNA标记，PCR扩增、纯化，用微球进行杂交，显色标记。用Luminex 200分析仪进行高通量检测，用BoBsoft软件进行分析，并在24～48 h内得出结果。主要针对染色体13、18、21、X、Y非整倍体及9个目标区域(4p16.3、5p15.3-5p15.2、7q11.2、8q23.2-8q24.1、15q11-15q12、17p13.3、17p11.2、10p14、22q11.2)的微缺失进行检测。

1.2.2羊水细胞培养及染色体核型分析对培养成功的羊水细胞进行收获、常规制片、G显带和染色体核型分析。染色体核型分析诊断标准参考2013年人类细胞遗传学国际命名体系(ISCN)。

2 结果

2.1BoBs技术检出130例染色体非整倍体，其中标准型21-三体综合征91例，标准型18-三体综合征23例，性染色体非整倍体6例，嵌合型21-三体综合征1例，嵌合型性染色体5例，微缺失和微重复4例，漏诊嵌合5例，检出率6.95%。金标准染色体核型分析检出非整倍体131例，漏检4例微缺失，见表1、2。

表1 BoBs检测异常统计结果

表2 BoBs方法与确诊方法统计结果(n)

2.2羊水细胞染色体核型分析胎儿羊水细胞培养成功率为100%。统计13、18、21、X和Y染色体非整倍体131例，其中检出染色体数目嵌合11例，漏诊微缺失4例，检出率为7.01%。对于BoBs不能检测而核型分析能检测的染色体结构改变，如倒位、易位等，将这些标本均归入正常标本。核型无法检出微缺失的不纳入，符合纳入标准的标本染色体非整倍体，评价总一致性异常(+)和正常(-)标本的频数以表格形式报告，总符合率为99.73%，阳性符合率为96.18%，阴性符合率为100.00%。见表3。

表3 BoBs方法与核型分析之间符合率统计结果(n)

3 讨论

0.2%～1.9%的产前诊断标本存在嵌合体现象[10]。因为限制性胎盘嵌合体较为普遍，故相对于羊水标本，绒毛标本嵌合体发生率更高[11]。BoBs技术检测到不同染色体嵌合的阈值为20%～40%[12]，即BoBs技术检测人工混合的模拟标本和临床标本嵌合体的阈值存在轻微差异。分析其原因，可能是由于临床标本通过核型分析技术评估嵌合水平，而人工混合标本是由正常和异常的细胞系根据数学计算混合而成。因为BoBs技术可额外检测9个常见微缺失综合征关键区域的拷贝数变异，故BoBs 技术具有对13、18、21号和 X、Y 染色体非整倍体以及微缺失综合征的快速产前诊断能力。

BoBs检测与核型分析检测在常见染色体非整倍体数目异常检测方面的作用是一致的。染色体微缺失综合征患者常伴有智力低下、发育迟缓、多器官畸形及不良孕产史等症状[13]，但却是细胞染色体核型分析的盲点和难点。BoBs检测可对常见的9种染色体微缺失综合征进行诊断，这9种微缺失综合征在活产婴儿中的综合发生率约为1/1 600[14]，本研究中BoBs检测出的4例染色体微缺失/微重复综合征，染色体核型分析结果显示未见异常。

BoBs 技术较为简单，仪器成本低，通量高，每个反应可检测92份标本。BoBs技术与核型分析比较，BoBs 技术比核型分析能更快速获得结果，是较为理想的产前诊断补充工具。对于新发展的产前诊断实验室，开展 BoBs技术的成本效益较高。