膀胱尿路上皮癌中CXCL 13的表达与临床病理及预后的关系

袁媛，陈庆丽，李鹏超，杨潇

南京医科大学第一附属医院泌尿外科(江苏南京 210009)

尿路上皮癌(urothelial carcinoma, UC)是膀胱癌组织学类型中最常见的类型。在男性中，它的癌症发病率为全球第7位，每年会有约429 000例新发病例，并导致165 000例患者死亡[1]。趋化因子可以选择性地吸引和激活不同的细胞类型[2-3]，趋化因子配体通过与七跨膜G蛋白偶联受体(G protein-coupled receptors, GPCR)相互作用介导它们的活性，从而形成趋化因子配体/受体轴[2]。然而，趋化因子信号传导过程被破坏可能引发许多不可预知的后果，比如影响肿瘤发生和进展[4-5]。已有报道指出在多种肿瘤中不同趋化因子配体和受体的表达升高[6-8]，并导致潜在的信号传导效应异常，这会影响癌症发展的许多过程[9-10]。趋化因子配体13(chemokine ligand 13, CXCL 13)便是这类趋化因子中的一个典型代表，它是一种稳态趋化因子，由次级淋巴组织(例如脾、淋巴结和扁桃体)B细胞区中的基质细胞分泌[11]。CXCL 13在辅助次级淋巴器官内调控不同区域的细胞迁移中起关键作用，它可以强烈吸引B淋巴细胞，同时促进少量T细胞和巨噬细胞的迁移[12]。之前的研究表明，CXCL 13及其受体水平升高可引起潜在信号传导因子的过度活化，从而导致肿瘤发生、癌细胞生长和转移[13-14]。在本研究中，我们通过免疫组化技术检测了CXCL 13在膀胱尿路上皮癌及癌旁组织中的表达，并探讨了CXCL 13表达与患者临床病理特征和患者预后之间的关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2011年2月至2014年2月在我院泌尿外科手术切除且经病理证实为膀胱尿路上皮癌的标本77例和36例癌旁组织(均为病理科保存的石蜡标本)。此外，所有患者术前均未接受任何抗肿瘤治疗且未合并其他恶性肿瘤。患者年龄41～85岁，平均(62.14±12.83)岁。组织病理分级按照WHO 2004标准分为G1、G2和G3，其中G1、G2为低分化组，G3为高分化组，肿瘤分期采用国际抗癌联盟 (UICC) 2009 TNM分期法。

1.2 免疫组化试剂 CXCL13多克隆抗体购自Abcam公司，工作浓度：1∶250。二抗及DAB显色试剂盒购自福州迈新公司。

1.3 实验方法 取病理科保存的术后石蜡包埋组织切片标本，采用免疫组织化学染色法对膀胱尿路上皮癌及癌旁组织中的CXCL13表达进行检测，检测方法严格按照操作说明书进行。

1.4 结果判断标准 免疫组化结果由2位资深病理医师以双盲法观察确定，每张切片选取5个高倍镜视野(×400)，分别计数每个视野中阳性细胞占总数细胞的百分数及着色程度,平均5个视野结果,按以下标准进行判定[15]。阳性细胞所占比例: 0、≤1%、2%～10%、11%～33%、34%～67%和>67%分别为0分、1分、2分、3分、4分和5分。染色强度：无着色、轻度着色、中度着色和重度着色分别为0分、1分、2分和3分。以上两项评分相加，可将蛋白表达分为4级：阴性是0～1分，弱表达是2～3分，中等表达是4～5分，强表达是6～8分，弱表达、中等表达和强表达为阳性。

1.5 临床数据收集 记录患者的性别、年龄、肿瘤组织大小、病理分级以及是否发生淋巴结转移。患者术后每3～6个月复诊1次，记录患者的随访和预后情况。

1.6 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件，癌和癌旁组织CXCL 13的表达及其与临床各病理参数的相关性采用2检验，膀胱尿路上皮癌中CXCL 13表达与患者预后的关系采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验，单因素生存分析采用Cox回归模型，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 膀胱尿路上皮癌与癌旁组织的表达情况 77例膀胱尿路上皮癌患者的标本中CXCL 13阳性53例，阳性率为68.8%，其中弱表达和中等表达数分别为20和23例；36例癌旁组织标本中CXCL 13阳性10例，阳性率为27.8%，其中弱表达和中等表达数分别为6和4例，CXCL13在膀胱尿路上皮癌标本中的表达要显著强于癌旁上皮组织，差异有统计学意义(P<0.01)，见表1。

表1 CXCL 13在膀胱尿路上皮癌组织及癌旁正常组织中的表达情况

2.2 CXCL 13与膀胱尿路上皮癌临床病理参数的关系 CXCL 13蛋白的表达与膀胱尿路上皮癌患者的淋巴结转移情况和临床分期相关，有淋巴结转移患者的CXCL 13阳性表达率高于无淋巴结转移患者(P<0.05)；Ta～T1期患者的 CXCL 13阳性表达率低于T2～T4期患者(P<0.05)；与患者的性别、年龄和肿瘤大小无关(P>0.05)。见表2。

表2 CXCL 13在膀胱尿路上皮癌组织中的表达与各临床病理参数的关系 例

2.3 膀胱尿路上皮癌中CXCL 13的表达与患者预后的关系 77例膀胱尿路上皮癌患者全部获得随访数据，经Log-rank检验分析结果显示CXCL 13阳性表达患者和阴性表达患者的5年生存率分别为62.5%和35.8%，阳性患者5年生存率低于阴性表达患者(2=5.423,P=0.020)。见图1。COX回归模型分析显示CXCL 13是影响患者预后的独立因素(Wald= 4.923,HR=2.301, 95%CI:1.102～4.803,P=0.026)。

图1 CXCL 13表达阳性和阴性患者的生存曲线

3 讨论

膀胱尿路上皮癌是尿路疾病发病和死亡的主要原因之一，它的一个特征是分期较早的肿瘤表现出良好的预后，很少对患者生命造成严重威胁，但晚期肿瘤预后相当差，病程进展迅速，表现出很高的致死率。人们已经研究了很多种尿路上皮癌的特征，试图预测各种肿瘤进程，其中肿瘤的准确分期和分级对于治疗决策是最重要的，大多数能够预测膀胱尿路上皮癌预后的参数取决于术后病理结果，这导致临床医生治疗前的风险评估面临挑战[1]。最近，出现许多证据表明CXCL 13是一种与患者癌症进展相关的因素，与各种恶性肿瘤的预后显著相关，可以作为癌症患者诊断和治疗的突破点[16]。

随着近年与膀胱癌有关研究不断进展，大量的分子标志物被证实可用于BUC的筛查诊断和预后判断，但仍然没有找到一个非常理想的标志物。Zheng等[17]报道了CXCL 13过表达与肾透明细胞癌晚期分期和不良预后有关，并且发现CXCL 13与其受体CXCR 5在肾透明细胞癌组织中显著相关，其中CXCL 13和CXCR 5同时过表达组的患者预后最差，此外，在功能和机制研究表明CXCL 13首先结合CXCR 5，然后活化PI3K/AKT/mTOR信号通路进而促进肾透明细胞癌细胞的增殖和迁移，所以，他们认为CXCL13/CXCR5轴在肾透明细胞癌的发生发展中起了重要作用。考虑到其在泌尿生殖肿瘤中存在过表达，并且参与了肾透明细胞癌细胞的增殖和迁移，我们想进一步探索它与膀胱上皮细胞癌的关系。

目前CXCL 13与膀胱尿路上皮癌的关系研究甚少，且具体作用机制尚不明确。我们的研究结果表明，CXCL 13在膀胱尿路上皮癌中的阳性表达(68.8%)显著高于癌旁上皮组织(27.8%)(P<0.01)。我们还探究了CXCL 13表达与膀胱尿路上皮癌患者各临床病理特征的相关性，结果发现在18例有淋巴结转移患者中有17例CXCL 13阳性表达, 阳性表达率达到94.4%，显著高于无淋巴结转移的患者，且差异有统计学意义(P<0.05)，我们还发现T2～T4期患者CXCL 13蛋白表达比Ta～T1期患者显著增强,差异有统计学意义(P<0.05)，但CXCL 13的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小无显著相关性。此外，我们还收集了患者的生存资料，并通过相关统计学方法分析了膀胱尿路上皮癌患者的总生存率与CXCL 13表达的关系，资料表明CXCL 13阳性表达高的膀胱尿路上皮癌患者5年总生存率低于CXCL 13阳性表达低的患者(P=0.020)。关于CXCL 13调控肿瘤进展的研究很多，最新的研究表明在RelA过表达条件下，Nrf 2低表达和CXCR 5启动子DNA甲基化缺失促使乳腺癌中CXCL13-CXCR5的共表达，从而驱动疾病进展和转移[18]。我们的实验结果也表明CXCL 13可能是促进肿瘤进展的一个因素，这与之前的研究结果是一致的[16]。

总之，我们的研究表明CXCL 13在膀胱尿路上皮癌患者中呈现过表达，并且它的过表达与膀胱尿路上皮癌的淋巴结转移以及临床分期显著相关，此外CXCL 13过表达增高可能是膀胱尿路上皮癌患者的不良预后的独立危险因素。这为膀胱尿路上皮癌的诊断和治疗提供了潜在的靶点，但仍需要我们更深入的研究阐明CXCL 13在膀胱尿路上皮癌中发挥的生物学作用及其内在机制。