关于氨基糖苷类抗菌药物分析方法的思考

祝晓凤

（阿克苏地区药品检验所，新疆 阿克苏 843000）

与其他抗菌物质有所不同的是，在临床上氨基糖苷类抗菌药物有着较为严重的肾毒性和耳毒性，这和药物中的杂质，特别是药物中的有毒杂质密切相关。因此，需要建立有效的药物分析方法，从而控制药物中有毒杂质的含量，从而不断的提升药品的综合质量，此事已然迫在眉睫[1]。本文综述了近年来氨基糖苷类抗生素的分析方法，为氨基糖苷类抗生素分析方法的发展提供了思路。

1 介绍氨基糖苷类抗菌药物分析方法

1.1 微生物检定法

抗生素微生物检定法是我国常用的、低成本、易推广的微生物检测方法，但微生物法是多组分药物的总效价，不能充分反映药物的内在质量，另外，该方法受多种因素的影响，并且操作比较耗时。

1.2 高效液相色谱-蒸发光散射检测

蒸发光散射探测器是一种通用的探测器，其原理是，当样品以流动相进入检测器时，雾化器蒸发流动相的溶剂，在进入加热管以后溶剂便立刻挥发，被分析物质的粒子被激光散射，散射光为光，收集并响应倍增管，其反应不取决于物质的光学特性，而是取决于被分析物质的粒子数量和大小，任何比流动相波动性小的物质都能被检测出来。在2015版《中国药典》中，以十八烷基硅烷键合硅胶为填料（pH范围0.8～8.0）和0.2 mol L-1三氟乙酸溶液甲醇（84:16）为流动相，用HPLC-ELSD法测定了硫酸依替米星的有关物质[2]。妥布霉素、硫酸庆大霉素、硫酸小诺霉素等氨基糖苷类抗菌物质的测定规定了采用高效液相色谱ELSD法。

1.3 高效液相色谱-脉冲安培电化学

近几年以来，脉冲电流检测器（PAD）在欧美等国家检测氨基糖苷类抗生素的应用日益增多，其的药典已在许多品种中使用，在中国，高效液相色谱-脉冲安培电化学法已逐渐成为氨基糖苷类抗生素分析的热点。高效液相色谱-脉冲安培电化学法有着高效、选择性好、高灵敏度、响应范围广等优点，但是此方法也存在着无法解决的问题[3]。

2 高效液相色谱柱后衍生

2.1 衍生化方法

衍生化方法分为两种：柱前衍生和柱后衍生。在色谱图分析之前，柱前衍生参照与感应体的试剂的反应，然后在色谱图系统中的分离和检测之前将反应导体。这种方法大多数情况下都是在离线进行，麻烦的操作和派生很多副产品。柱后衍生是分析化学中常用的在线处理技术，这意味着在所选择的色度图形条件下将多列混合物的色度图列分离，当各成分从列中流出时，在某种反应条件下与导体试剂发生反应，然后导体生成物相互依赖，检测二次条目检测器，柱后衍生具有优势，其优点在于：不改变分离成分的色度图行为、移动相选择限制少、单纯性及迅速性、准确可靠性高的结果、良好的再现性及仪器价格适中[4]。

2.2 高效液相色谱柱后衍生技术在氨基糖苷分析中的应用

为了检测氨基葡萄类抗生素，柱后衍生化技术使用活性基，在氨基、诱导体化试剂等氨基葡萄类抗生素的结构上通过紫外吸收或荧光形成诱导体。电离机的检测界限为0.57 ng，是hlc-elsd法的200倍以上，这个方法操作简单，分离能力高，高灵敏度，高精度。但是，这个方法有几个缺点。据报道，双醛、2、4-二氧化碳（fdnb）、氨基葡糖类抗菌剂等诱导体试剂均为氨基基，如果目标不包括初级氨基，因为其不能派生，所以不会被检测。（2）柱后衍生化具有几种提取效果，在色度图峰值之间的分辨率降低。

2.3 三种方法的比较

与HPLC-ELSD法相比，柱后衍生化法和HPCPAD法具有分离效果、灵敏度高的优点。与HPLCPAD方法相比，两种方法分离能力和灵敏度大致相同。在经济适用性方面，后期专栏衍生产品是适度的价格，容易普及，但电气化学器具更昂贵，在中国不怎么普及。