免疫组化检测P16和Ki-67水平在宫颈上皮内病变诊断中的应用价值分析

李 菲 河南省开封市妇幼保健院病理科 475000

宫颈癌是目前世界上较常见的女性恶性肿瘤，每年新发病人数达50万，死亡人数也在逐年增加，是女性癌症死亡的主要原因[1]。在我国，宫颈癌发病率每年逐渐上升，并有年轻化发展的趋势，严重影响女性的身心健康[2]。宫颈癌发生的主要危险因素是HPV感染，特别是高危型HPV感染如HPV16型和HPV18型，而其他型别感染主要引起宫颈上皮内病变和下生殖道湿疣[3]。宫颈癌患者往往在疾病早期会出现宫颈上皮内病变。因此对于宫颈上皮病变的诊断评估十分重要。本次文便采用免疫组化检测P16和Ki-67的阳性表达情况对宫颈上皮内病变诊断进行评估，探讨其临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选取2016年1月—2017年10月在我院进行宫颈活检的120例标本，根据宫颈上皮内瘤变分级标准分级及病理活检确诊，其中低级别宫颈上皮内瘤变(LSIL),即CIN Ⅰ期48例，中重度宫颈上皮内瘤变(HSIL),包括CINⅡ期32例，CIN Ⅲ期40例。纳入标准：(1)病理诊断按照WHO标准确诊。(2)所有患者均行TCT、HPV型别检测并经阴道镜下行宫颈组织活检且病理诊断；(3)既往无宫颈癌和CIN病史；(4)既往无阴道镜活检史及宫颈物理、化学治疗或手术史；(5)非妊娠期妇女；(6)无自身免疫性疾病、肝肾慢性疾病及其他慢性疾病；(7)所有患者均签署“知情同意书”，同意随访。

1.2 方法 标本常规石蜡包埋后切片，每个病例取3张石蜡切片。上述病理切片均经病理主任医师认定。随后进行HE染色及免疫组化SP检测，免疫组化使用：即用型Ki-67抗原兔抗人单克隆抗体，购自福建迈新生物技术开发有限公司(克隆号：SP6)；鼠抗P16蛋白抗体，购自福建迈新生物技术开发有限公司。

1.3 判定标准 根据已有的阳性标本及磷酸缓冲液代替一抗分别作为阳性及阴性标准，P16染色定位于细胞核和细胞质，P16染色结果根据阳性细胞在垂直平面上的定量评判：染色阳性细胞小于10%为阴性，10%～30%为(1+)，30%～50%为(2+)，大于50%为(3+)，并计算其阳性符合率。Ki-67染色定位于细胞核。Ki-67染色结果判读依阳性细胞数判定：阳性细胞仅位于基底层判为阴性，基底层以上则为阳性，阳性细胞数占11%～30%为(1+)，31%～50%为(2+)，大于50%为(3+)。

1.4 统计学方法 患者数据资料均用Excel进行统计整理，所有数据均采用SPSS19.0软件分析。分类变量数据用χ2检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 P16和Ki-67在各期患者中的阳性表达情况 P16在CIN各期的阳性率分别为50.0%，81.3%，100%，Ki-67在各期2+及以上的阳性率分别为31.2%，43.8%，80%。P16及Ki-67阳性率均随着CIN等级增高而增加，组间差异具有统计学意义(P<0.05),见表1。

2.2 P16阳性表达与CIN分级符合率 P16与CIN分级符合率分别为87.5%，87.5%，95.0%，组间无统计学差异(P>0.05)。见表2。

3 讨论

作为生殖系统的一大恶性肿瘤，宫颈癌已经严重危害到女性的健康问题。其发病原因主要是高危型人乳头瘤病毒所导致的宫颈鳞状上皮异常增生[4]。疾病早期可无特异性的临床表现，不易被发现。做好疾病的早期筛查，及早发现并准确的诊断宫颈上皮病变,及时治疗高级别病变是预防宫颈癌最有效的措施[5]。所以，寻找更好的方法预测宫颈上皮病变的结局和判断早期宫颈癌的预后十分重要。为了更准确地诊断宫颈上皮病变及分级,一些辅助诊断的指标也开始应用在临床中。P16便是一种新抗癌基因，直接参与细胞周期的调控，负调节细胞增殖及分裂，可以反馈机体细胞的异常增生情况[6]，研究发现宫颈癌和CIN中P16的高表达与HPV感染有关[7]，可将P16作为宫颈癌癌前筛查的指标，其在中重度宫颈上皮内瘤变的诊断中更具有临床意义[8]。而Ki-67发现较P16更早，是一种增殖细胞相关的核抗与有丝分裂密切相关，但确切机制尚不清楚，检测Ki67可作为细胞增殖的依据，阳性说明癌细胞增殖活跃[9]。在宫颈疾病中有研究显示，Ki-67的表达在不同组织中存在显著的差异，从CINⅠ到 CINⅢ组织中Ki-67阳性率逐渐增高。

表1 P16和Ki-67在不同组织中的阳性表达情况[n(%)]

表2 P16与CIN分级符合率

本文中P16在CIN不同组织中均表达为阳性，且存在明显的等级相关性，组间有明显差异(P<0.05), 且各组分级符合率接近于90%，说明P16有助于我们判断组织病理诊断的一致性。而Ki-67同样与CIN存在等级相关性，其阳性程度随等级升高而增大，但其特异程度不如P16，故Ki-67对于临床CIN的分级有辅助诊断作用。

综上所述，免疫组化检测P16和Ki-67水平在宫颈上皮内病变诊断中有着重要的临床应用价值，可提高CIN分级的准确性，作为宫颈癌癌前病变的早期筛查手段。