不同等级宁夏枸杞对小鼠抗缺氧能力及其体内抗氧化活性的影响

王 莉

（宁夏医科大学临床学院 宁夏·银川 750004）

宁夏枸杞（Lycium barbarum L.）的干燥成熟果实，即为《中华人民共和国药典》中的枸杞子。国内外学者对枸杞的研究主要包括枸杞子的化学成分、结构及功能等方面。枸杞子的主要的功能成分有枸杞多糖、枸杞黄酮、类胡萝卜素和萜类化合物等，这些成分与其生物学功效密切相关，有研究认为，黄酮可以降低胆固醇、改善心脑血管疾病患者的症状、降低心脑血管疾病的发病率，提高小鼠的缺氧存活能力。龚涛等研究认为枸杞多糖有良好的抗氧化、抗衰老作用。李洋等研究了宁夏枸杞中的多糖、黄酮、类胡萝卜素和VC的抗氧化能力，认为黄酮的抗氧化能力决定着枸杞果实的体外抗氧化能力。从这些研究可知，枸杞果实中的功能成分有着良好的抗缺氧和抗氧化功效。对不同等级宁夏枸杞和不同产地枸杞果实的功能成分的比较已有相关报道，但不同等级枸杞子的抗缺氧能力及抗氧化活性的研究还较少见。本实验就不同等级枸杞子提取液对小鼠抗缺氧能力和小鼠肝中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）水平的影响开展研究，以比较不同等级宁夏枸杞的抗缺氧作用及抗氧化活性的差异，为相关研究、枸杞生产和销售提供参考意见。

1 材料与方法

1.1 试验材料

枸杞子：为市售的某品牌的特优、特级、甲级、乙级枸杞子。维生素C：上海现代哈森（商丘）药业有限公司产品。MDA、SOD测试盒：南京建成生物工程有限公司产品。KM小鼠（宁夏医科大学实验动物中心提供）：100只雌鼠，体质量（22±2.5）g。仪器：超声提取仪、电热恒温水浴锅、分光光度计等。

1.2 实验方法

1.2.1 枸杞子超声提取液的制备

按文献中的方法[7]，分别称取适量四种等级的宁夏枸杞粉末，加入温度为60℃的自来水超声提取40min。将提取液离心15min，然后取其上清液，备用。

1.2.2 动物分组

将100只KM小鼠随机分为10组，即特优高剂量组（A1）、特优低剂量组(A2)、特级高剂量组(B1)、特级低剂量组(B2)、甲级高剂量组(C1)、甲级低剂量组(C2)、乙级高剂量组(D1)、乙级低剂量组(D2)、阳性对照组（F1,即VC组）和对照组（F2,即自来水组），每组10只。

1.2.3 给药

各实验组小鼠分别给其饮服四个等级的宁夏枸杞提取液，低剂量组和高剂量组分别给予10mg/mL和20mg/mL的宁夏枸杞提取液，阳性对照组给予0.2mg/10g的维生素C，正常对照组让其饮服自来水，连续饮服4周，实验期间各组小鼠自由采食普通饲料。

1.2.4 测定不同等级的宁夏枸杞对小鼠抗缺氧能力的影响

每组各取5只小鼠分别放入5个内有10g钠石灰的1000mL的锥形瓶中，迅速塞上瓶塞，缝隙涂抹凡士林，并在瓶口以塑料薄膜扎紧密封。之后立即计时，直至小鼠呼吸停止。以小鼠在密闭瓶内存活时间为指标，比较其抗缺氧能力。

1.2.5 测定不同等级的宁夏枸杞对小鼠体内SOD和MDA的影响

将小鼠颈椎脱臼处死，立即取其肝脏，用冰冷生理盐水洗涤数次，并用滤纸吸干水分后称取0.4g，置于组织匀浆器中，加入预冷的生理盐水3.6mL，在冰水浴的环境下，制备成10%的肝组织匀浆液，3000r/min离心10min，取上清液备用。

用上述制备的肝组织匀浆液根据羟氨法测定小鼠肝组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力；硫代巴比妥酸法测定小鼠肝组织中丙二醛（MDA）水平，具体操作按试剂盒说明书进行。

1.3 数据处理

2 结果与分析

2.1 不同等级宁夏枸杞提取液对小鼠抗缺氧能力的影响

由表1可知，不同等级宁夏枸杞子提取液对小鼠缺氧存活时间的影响与空白对照组相比均有显著差异（P<0.05）；VC组与空白对照相比较有显著差异(P<0.05)。即在密闭缺氧的环境中，宁夏枸杞子超声提取液与维生素C均可延长小鼠的存活时间。此外，特优高剂量组、特优低剂量组、特级高剂量组、特级低剂量组之间无显著差异，但与甲级高剂量组、甲级低剂量组、乙级高剂量组、乙级低剂量组相比有显著差异(P<0.05)，即不同等级宁夏枸杞子提取液对小鼠缺氧存活时间的影响有差异，但高剂量与低剂量之间无显著性差异。

表1：不同等级枸杞提取液对小鼠缺氧存活时间的影响（±s，n=5）

表1：不同等级枸杞提取液对小鼠缺氧存活时间的影响（±s，n=5）

注：同列中小写字母相同,差异不显著，P>0.05；字母不同，差异显著，P<0.05；下同

组别 剂量 存活时间（min）空白对照组 ——28.80±1.72d维生素C组 0.2mg/10g 35.42±1.85ac枸杞提取液高剂量组特优 20mg/mL 36.26±2.14a特级 20mg/mL 35.81±3.12ac甲级 20mg/mL 32.36±2.63b乙级 20mg/mL 32.13±3.03be枸杞提取液低剂量组特优 10mg/mL 35.49±2.32ac特级 10mg/mL 34.60±1.85ac甲级 10mg/mL 31.83±2.79be乙级 10mg/mL 30.65±1.85be

2.2 不同等级宁夏枸杞提取液对小鼠肝组织中丙二醛(MDA)的影响

由表2可知，饮服不同等级宁夏枸杞子提取液的实验小鼠，其肝组织中MDA水平与空白对照组相比均有显著差异（P<0.05）；VC组与空白对照相比较有显著差异(P<0.05)，即宁夏枸杞子提取液与维生素C均可降低小鼠肝组织中MDA的水平。此外，特优高剂量组、特优低剂量组、特级高剂量组、特级低剂量组、甲级高剂量组之间无显著差异，但与甲级低剂量组、乙级高剂量组、乙级低剂量组相比有显著差异(P<0.05)，即不同等级宁夏枸杞子提取液对小鼠肝组织中MDA水平的影响有差异。

表2：不同等级宁夏枸杞提取液对小鼠肝组织中MDA的影响（±s，n=5）

表2：不同等级宁夏枸杞提取液对小鼠肝组织中MDA的影响（±s，n=5）

组别 剂量 小鼠肝组织中MDA/(nmol·mgprot-1)空白对照组 ——维生素C组 0.2mg/14.04±0.68d 10g 11.30±1.75ac 20mg/mL 10.71±2.02a 20mg/mL 11.45±1.42ac 20mg/mL 11.89±1.92ac 20mg/mL 12.72±2.69be 10mg/mL 11.02±1.39ac 10mg/mL 11.93±1.52ac 10mg/mL 12.43±0.85b 10mg/mL 13.34±0.94be枸杞提取液高剂量组特优特级甲级乙级枸杞提取液低剂量组特优特级甲级乙级

2.3 不同等级宁夏枸杞提取液对小鼠肝组织中超氧化物歧化酶(SOD)的影响

表3：不同等级宁夏枸杞提取液对小鼠肝组织中SOD的影响（±s，n=5）

表3：不同等级宁夏枸杞提取液对小鼠肝组织中SOD的影响（±s，n=5）

组别 剂量 小鼠肝组织中MDA/(nmol·mgprot-1)空白对照组 ——维生素C组 0.2mg/10g枸杞提取液高剂量组特优 20mg/mL特级 20mg/mL甲级 20mg/mL乙级 20mg/mL枸杞提取液低剂量组特优 10mg/mL特级 10mg/mL甲级 10mg/mL乙级 10mg/mL 225.48±4.71d 259.53±9.72ac 266.12±6.33a 263.67±8.45ac 248.82±3.92b 239.46±5.69be 261.24±5.55ac 260.45±6.59ac 246.81±7.82be 240.28±9.94be

由表3可知，饮服不同等级宁夏枸杞子提取液的实验小鼠，其肝组织中 SOD活力与空白对照组相比均有显著差异（P<0.05）；VC组与空白对照相比较有显著差异（P<0.05），即宁夏枸杞子提取液与维生素均可提高小鼠肝组织中 SOD的活力。此外，特优高剂量组、特优低剂量组、特级高剂量组、特级低剂量组之间无显著差异，但与甲级高剂量组、甲级低剂量组、乙级高剂量组、乙级低剂量组相比有显著差异（P<0.05），即不同等级宁夏枸杞提取液对小鼠肝组织中 SOD活力的影响有差异，但高剂量与低剂量之间无显著性差异。

3 分析与讨论

常压抗缺氧实验是将小鼠置于在密闭缺氧空间中，致使心、脑等器官缺氧，以小鼠在密闭缺氧环境中的存活时间作为指标，可以测定某种药物的抗缺氧能力。枸杞表现其药理功效的主要成分有多糖、维生素、牛磺酸、黄酮等多种成分。有报道认为，枸杞汁、枸杞多糖均可提高小鼠的抗缺氧和抗疲劳能力。本研究所用宁夏枸杞超声提取液对小鼠进行的密闭缺氧实验显示，不同等级宁夏枸杞均能显著提高小鼠的抗缺氧能力，这个结论与上述研究一致；且不同等级宁夏枸杞对小鼠抗缺氧能力的影响有差异，特优和特级宁夏枸杞对小鼠抗缺氧能力的影响高于甲级和乙级。

机体中过多的自由基会破坏细胞结构，干扰正常代谢，加速机体衰老。SOD可清除体内自由基，其活力高低可反映出机体清除自由基能力的强弱。MDA是脂质过氧化的中间代谢产物，其水平的高低往往可以间接反映机体产生自由基的水平和细胞膜的氧化损伤程度。因此，通过检测机体内SOD的活力和MDA水平的变化，可以较好的反应机体的抗氧化能力。本实验结果表明，饮服不同等级的宁夏枸杞子提取液可显著降低小鼠肝组织中MDA水平，提高小鼠肝组织中SOD活力。说明不同等级的宁夏枸杞子提取液能有效提高小鼠的抗氧化能力，这与目前已有研究报道一致；且不同等级的宁夏枸杞对小鼠体内抗氧化活性的影响有差异，特优和特级宁夏枸杞对小鼠体内抗氧化活性好于甲级和乙级。

枸杞多糖是枸杞子中最重要的活性成分，其含量高低与枸杞生物学功效密切相关。有报道认为，枸杞的抗氧化能力与维生素C类似，可能与其所含多糖有关。不同等级宁夏枸杞的多糖含量测定显示，特优级为12.84%，特级为11.32%，甲级为10.79%，乙级为9.68%，目前相关文献中对不同等级枸杞中其他成分含量的相关研究报道较少。在本实验中，枸杞子超声提取液对小鼠的抗缺氧能力及其体内抗氧化活性的影响有差异，可能是为枸杞中各种成分综合作用的结果。具体如何，有待进一步研究。