HPLC 法测定奥美沙坦酯中间体Ⅱ的含量
2020-02-23杨昌华尹诗怡李树华
杨昌华，尹诗怡，李树华
（湖南师范大学医学院，长沙 410013）
奥美沙坦酯（Olmesartan Medoxomi）是一种选择性阻断血管紧张素Ⅱ与血管平滑肌AT1受体的结合，从而达到阻断血管紧张素Ⅱ收缩血管作用的高血压药物，对各型高血压均具有好的疗效［1-3］。奥美沙坦酯中间体Ⅱ（结构见图1）是合成奥美沙坦酯的一种重要中间体［4-7］，测定奥美沙坦酯中间体Ⅱ的含量，对有效的控制奥美沙坦酯质量具有积极的意义，本文拟选用高效液相色谱法［8-11］测定。
1 仪器与试药
图1 奥美沙坦酯中间体II
1.1 梅特勒MS/S 分析天平 雷磁PHS-3CpH 计；岛津 UV-2501PC 紫外分光光度计；Agilent1260 高效液相色谱仪（安捷伦OpenLAB ChemStation）。色谱纯乙腈（上海斯百全公司）；自制超纯水；奥美沙坦酯对照品，批号100864-201302，含量99.0%，中检院；奥美沙坦酯中间体Ⅱ对照品：自制，批号AMSTZ-Ⅰ-140321，含量98.7%。
1.2 方法与结果
1.2.1 色谱条件 色谱柱为ZORBAX-SB C18（150mm ×4.6 mm，5μm），磷酸二氢钾缓冲液（取磷酸二氢钾2g溶于800mL 水中，用磷酸调节pH 值至3.4，再加水稀释成1000mL）-乙腈（25：75）为流动相，流速为1.0mL/min，柱温40℃，检测波长205nm，进样10μL。
1.2.2 HPLC 方法评价
1.2.2.1 专属性 取空白溶剂10μL，注入液相色谱仪测定，无色谱峰。
1.2.2.2 准确度 精密称定奥美沙坦酯中间体Ⅱ对照品和含量已知的奥美沙坦酯中间体Ⅱ约16mg，置200mL 量瓶中，乙腈溶解并稀释至刻度，得100%水平的供试液，另制备二份；同法制备80%、120%水平的供试液，外标法以峰面积计算，加样回收率99.7%（RSD 0.36%，n=9）。
1.2.2.3 线性和范围 精密称取奥美沙坦酯中间体Ⅱ对照品40.80mg（含量98.7%），置100mL 量瓶，乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀。分取3.2mL、3.6mL、3.8mL、4.0mL、4.4mL、4.8mL 置10mL 量瓶，乙腈稀释至刻度，摇匀，测定。得到峰面积A 与浓度C（μg/mL）的回归方程为：A =64.2253×C+367.8445，r =0.9998，浓度范围129.12μg/mL～193.67μg/mL。
1.2.2.4 定量限与检测限 取“1.2.2.3”溶液进行稀释，S/N 为3：1 时的进样量为检测限，即0.20ng；S/N 为10：1 时的进样量为定量限，0.40ng。
1.2.2.5 精密度（重复性与中间精密度） 取“1.2.2.3”溶液进样6 次，峰面积RSD 为0.42%（n=6）；不同操作人员，不同液相色谱仪测定，峰面积RSD 0.45%（n=12）。
1.2.2.6 样品溶液稳定性 取“1.2.2.3”溶液，常温下放置，分别于0 小时、1 小时、2 小时、4 小时、8 小时、12小时精密量取10μL，注入色谱仪，测定峰面积，RSD 为0.08%，即12 小时内稳定。
1.2.2.7 耐用性 取“1.2.2.3”溶液，更换色谱柱Kromasil 100-5 C18（150mm×4.6 mm，5μm）、Xcharge C18（250mm×4.6mm，5μm）、ZORBAX-SB C18（150mm ×4.6 mm，5μm）测量，峰面积（下同）RSD 为0.40%（n=6）；调整柱温，RSD 为0.56%（n=6）；调整流动相比例，RSD0.35%（n=6）；调整流动相流速，RSD 为0.33%（n=6）；调整流动相缓冲溶液的pH 值，RSD 为0.41%（n=6）。
1.2.3 系统适用性实验 取“1.2.2.3”溶液，连续进样6 次，峰面积RSD1.33%（n=6），理论塔板数均大于10，000，拖尾因子小于1.5，分离度大于1.5。
1.2.4 样品测定 精密称取奥美沙坦酯中间体Ⅱ约16mg 六份，置100mL 量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，得样品溶液；另取奥美沙坦酯中间体Ⅱ对照品适量，精密称定，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液。分别进样10μL 测定，外标法以峰面积计算，结果如下。
图2. 4奥美沙坦酯中间体ⅡHPLC测定图谱（ZORBAX-SB C18（150mm×4.6 mm，5μm））
奥美沙坦酯中间体Ⅱ重复性试验
2 结果
以ZORBAX-SB C18（150mm ×4.6 mm，5μm）色谱柱为固定相，磷酸二氢钾（取磷酸二氢钾2g 溶于800mL 水中，用磷酸调节pH 值至3.4，再加水稀释成1000mL）-乙腈（25：75）为流动相，柱温40℃，流速1.0mL·min-1，进样10μL，205nm 检测，能简便快速、准确可靠的测定奥美沙坦酯中间体Ⅱ的含量。
3 讨论
奥美沙坦酯中间体Ⅱ与奥美沙坦酯中间体I［11］均显酸性，为了有利于高效液相色谱的分离，应选择酸性流动相，通过比较pH3.2、3.4、3.6 等不同pH 流动相时的液相分离结果，选定pH 3.4 作为测定用流动相的酸度。C18与C8两类键合相硅胶固定相应用较广，硅胶类固定相不适宜酸性环境，通过比较Kromasil 100-5 C18、ZORBAX-SB C18、Xcharge C18三种色谱柱的色谱分离结果，选择ZORBAX-SB C18（150 mm×4.6mm，5μm）为本次测定用固定相。
