一例病毒性腹泻的诊断与防治

李 凡，赵坤坤，刘守川

（洛阳中科基因检测诊断中心有限公司，河南 洛阳 471000）

猪流行性腹泻（Porcine epidemic dianthea,PED）是由PEDV引起的一种急性、高度接触性肠道传染病[1]，以腹泻和脱水为典型症状。一年四季均可发病，冬、春季节多发。不同日龄、性别和品种的猪均可感染，其中哺乳仔猪的发病率和死亡率最高，成年猪症状较轻。临床上引起仔猪腹泻的原因有很多，病毒病、细菌病、寄生虫病、营养性以及中毒等因素均可导致猪腹泻的发生[2]，其中病毒病的病原主要包括猪流行性腹泻病毒（PEDV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪轮状病毒（PoRV）和δ冠状病毒（PDCoV）。由于PEDV的临床症状与其它病毒性腹泻类似，临床和病理变化诊断不能有效地区分，因此需要借助实验室诊断技术进行确诊，以进行针对性地治疗和防控。

1 发病情况

2018年3月初，河南省安阳市林州市某规模化猪场（存栏母猪120头左右）部分栏舍暴发仔猪腹泻，7日龄仔猪出现呕吐、水样腹泻和脱水症状，排出腥臭味灰色或黄色带有气泡的粪便，夹有大量未消化的凝乳块，精神沉郁，且死亡率高于80%。养殖户使用抗生素进行治疗，未见好转。该猪场保育猪和肥育猪等猪群未出现明显临床症状，表明该猪场未发生猪繁殖与呼吸综合征、猪伪狂犬病和猪圆环病毒病等繁殖障碍性传染病。

2 临床症状与病理变化

2.1 临床症状

经过临床观察，腹泻猪为仔猪，临床表现为：病猪消瘦，精神沉郁，眼窝下陷，拉灰色或黄色水便，腥臭；腹泻前后呕吐，呕吐物为未消化的凝乳块。病猪腹泻3～4 d后死亡，严重时整窝死亡。

2.2 病理变化

对死亡和濒死的仔猪进行剖检，表现为卡他性胃肠炎。胃腺区黏膜出血，胃内充满黄色或灰色液体，含有泡沫和未消化的凝乳块。小肠膨胀，肠壁变薄，呈半透明状，肠壁充血。肠系膜充血，肠系膜淋巴结水肿。其它实质性器官无明显病变。

鉴于猪群的发病特点、临床症状与病理变化，笔者初步判断该猪场的腹泻可能是由猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪轮状病毒等腹泻性病毒引起的。笔者将腹泻样品送至洛阳中科基因检测诊断中心有限公司进行病原诊断，以确诊发病原因。

3 实验室诊断

将3头发病仔猪进行无菌剖检，取病变小肠剪碎后放入无菌试管内，加适量无菌水充分研磨，4℃3 000 r/min离心3 min，取上清液按照全自动核酸提取仪说明书进行核酸提取，采用RT-PCR技术分别检测PEDV、TGEV、PoRV和PDCoV，结果样品编号为180366的3份样品均为PEDV阳性（图1，A），TGEV、PoRV和PDCoV均为阴性。

将180366-1的小肠样品进行免疫组化试验，结果为小肠的细胞胞质内呈棕黄色着染（图2），为PEDV阳性，TGEV和PoRV均为阴性。该结果进一步证明了是PEDV导致的仔猪腹泻。

笔者将编号180366-1的S基因部分序列进行扩增和测序，并对测序结果进行序列核苷酸同源性分析和遗传进化分析，以确定PEDV毒株是否为流行株。结果表明，该样品在532 bp处有特异性扩增条带（图1，B），与预期相符。该毒株与参考毒株序列（表1）的同源性为82.7%～98.2%（图3），与XX的同源性最高，为98.2%；与CV777的同源性仅为82.7%。根据S基因构建的进化树分为2个基因群，第一个基因群又分为3个基因亚群，第二个基因群又分为2个基因亚群（图4）。180366-1属于第1个基因群的第2亚群，为流行株，与HeN-NY-2016最相似。

表1 PEDV参考毒株信息

4 治疗与防控

4.1 隔离、消毒

将患病猪群与其它健康猪群隔离，专人饲养，并对病猪进行治疗，若无法治愈，则进行猪群扑杀并无害化处理。在全场范围内用消毒剂进行消毒和卫生清理，并且定期更换不同机制消毒剂，对地面、圈舍、用具、车辆等物品进行消毒。

4.2 紧急注射疫苗

该猪场免疫的是TGEV-PEDV二联疫苗，其中PEDV疫苗株为CV777毒株，而该猪场暴发的是流行株，二联疫苗对猪群不能提供有效的保护，若猪群继发其它疾病，则会使得免疫效果更差。另外，猪群在后期有可能还会再次发生PEDV引起的腹泻。所以，我们选用武汉科前生物股份有限公司的产品—“科泻宁”对猪群进行紧急疫苗接种，它是猪传染性胃肠炎和猪流行腹泻二联苗，PEDV疫苗株来源为AJ1102株，是基于PEDV流行株研发的疫苗，对PEDV流行株具有较好的防控效果。

4.3 防控措施

做好猪场的生物安全防控，严格控制人员进出[3]。改善猪场卫生，保持地面干燥，定期进行通风换气，及时做好仔猪的保温等工作。饲料和饮水要确认无PEDV污染后才能进行饲喂，饮水中可适量添加电解质多维，保证饲料营养丰富，提高生猪免疫力和抵抗力。

通过以上免疫和防控措施，9 d后，猪场内的腹泻疫情得到了有效控制，仔猪的发病率和死亡率明显降低。保育猪有少量发病且无死亡，其它猪群并未发病。

5 小结

腹泻是养猪生产中常见的疾病之一，可造成哺乳仔猪大量死亡，各日龄猪均可发病。临床上有多种原因可引起猪腹泻，而猪流行性腹泻等病毒病是引起腹泻的重要病原之一。自2010年底，PED在我国大规模暴发，一直未能得到有效控制，给我国养猪业造成了严重的危害[4-5]。PEDV病毒株，通常可分为疫苗株、经典株和流行株，虽然猪场大多已经免疫了TGEV-PEDV（CV777源）二联疫苗，但猪场仍会暴发PEDV引起的腹泻，并多为流行株引起的，说明二联疫苗不能为现有的流行毒株提供有效的保护，原因是流行株与CV777疫苗株相比，发生了大量的基因突变[6]，同源性较低，免疫后不能产生保护性的抗体。所以，猪场可以选择基于PEDV流行株研发的灭活苗或弱毒苗进行免疫，定期对水样和饲料等样品进行病原监测，在发生腹泻等症状后，需及时将病料送至实验室进行检测和诊断，确定造成腹泻的原因，并对症治疗，防止继发感染。