免疫胶体金诊断技术在兽医临床上的应用

王明利 张 浩

北京农业职业学院畜牧兽医系，北京102442

免疫胶体金诊断技术与ELISA 检测方法比较类似，起初在血清和尿液检测中运用。样品检测整个过程需要5～10 min。胶体金技术是国外医学研究人员在酶标免疫法的基础上，用胶体金替代酶作标志物，抗原抗体结合的免疫学检测方法，并利用此项技术成功研制了检测人类艾滋病（AIDS）病毒抗体的试剂盒[1]，为人类有效检测艾滋病（AIDS）病毒做出巨大贡献。随着医学技术的深入发展，免疫胶体金技术的应用领域更加广泛，如妊娠试验、各种传染病检测。目前这项技术在兽医临床诊断上应用也比较广泛。

1 免疫胶体金诊断技术的基本原理

免疫胶体金技术（GICT）以胶体金为示踪标志物应用于抗原抗体的一项标记技术，为免疫学领域的新技术[2]。随着纳米技术的不断发展，人们发现了胶体金，并广泛应用于医学、分子学、生物学和免疫学等各个学科。胶体金指在维生素C、鞣酸等还原剂的作用下，将氯金酸（HAuCl4）聚合成特定大小的颗粒，这些颗粒在静电作用下形成稳定的胶体状物质。胶体金技术基本原理：把微孔滤膜作为载体，包被已知的抗原或抗体，滴入的待测样品经微孔膜的渗滤作用或毛细管虹吸作用，样品中的抗原或抗体与微孔滤膜包被的抗体或抗原结合，再通过胶体金标记物反应形成红色的线或点[3]，呈阳性，无此现象为阴性。

2 免疫胶体金诊断技术的优点

1）免疫胶体金诊断技术操作简单，检测只需要试剂盒或试纸条，无需其他设备和试剂，样品前处理简单或无需做前处理，样品多样化，血清、组织液、粪便和尿液等均可。

2）免疫胶体金诊断技术方便快捷，反应一般只需5～10 min 出结果，而其他方法，如ELISSA 需要1～2 h，PCR 需要时间最长。因方便快速且不受场地约束，该技术适合基层和现场。快速特异但不影响灵敏度，试验证明灵敏度可达到1 ng/mL 或更低水平[4]。

3）免疫胶体金诊断技术使用成本低，检测不需要特殊设备和试剂。结果判定直观，阴性、阳性结果显色明显，通过肉眼很容易判断。

4）免疫胶体金诊断技术具有特异性；应用范围广阔，在不同的检测条件下仍可运用；可以同时检测多个项目内容，提高样品的利用率，尤其样品难以获得的情况下，优势更加显著。

5）胶体金标记物理化性质稳定，试剂盒或试纸条保存时间长，在4 ℃的冷藏条件下可以存放2年以上，无信号衰减现象。

6）由于胶体金为红色，不需要添加着色试剂，省去酶标致癌底物，降低对试验人员的危害及工作环境污染，安全环保，符合构建环保型社会的要求。

3 免疫胶体金技术在兽医临床上的应用

由于免疫胶体金技术具有以上诸多优点，因此被广泛应用在兽医临床疾病诊断中，主要包括2 个方面的内容：一是用于抗体的检测，二是用于病原的检测。

3.1 应用免疫胶体金技术检测抗体

在抗体检测过程中，免疫胶体金诊断的基本原理为相应的抗原包被在硝酸纤维素膜（NC 膜）上，用胶体金标记相应抗原，如果检测样品为阳性，那么样品中的抗体与NC 膜上的抗原或金标抗原结合发生反应，出现红色线条或点，如样品为阴性，则没有上述现象出现。

大量研究证明，在动物诸多疾病的抗体检测中，应用免疫胶体金技术符合率、灵敏度和特异性都比较好。刘志科等[5]选择了195 份鸡血清，采用胶体金试纸条进行鸡白痢沙门氏菌的检测，结果为28份阳性样品，再用平板凝集试验做相应的检测，检测到阳性样品27 份，两者的阳性符合率为96.43%；同时把利用试纸条检出的44 份鸡白痢阴性样品，用平板凝集试验做了检测，结果均为阴性，符合率达到100%。郭健等[6]报道，采用该方法筛查动物布鲁菌病和结核病，对采集的387 份鹿血清和206 份牛血清进行检测，与平板凝集试验方法相比，鹿血清阳性符合率94%，阴性符合率为97%，总符合率为96%；牛血清阳性符合率100%，阴性符合率为96%，总符合率为96%，得出两种方法符合较好的结论。李耀磊等[7]采用胶体金技术对肉豆蔻等19种药材进行黄曲霉毒素B1测定，与液相色谱法比较整体符合率为83.7%，结论一致。可见，胶体金诊断技术在动物疾病诊断中，具有较高的符合率、灵敏度和特异性，该技术在兽医临床诊断上具有重要的应用价值。

3.2 应用免疫胶体金技术检测病原

在病原检测过程中，免疫胶体金诊断技术基本原理为硝酸纤维素膜（NC 膜）和胶体金分别包被抗特定病原的2 种抗体，若被检样品为阳性，样品中的抗原与NC 膜上的抗体和金标抗体结合发生反应，在NC 膜上形成可见红色的线或点，如果样品为阴性，没有上述现象。

大量研究证明，采用胶体金标诊断技术进行动物病原检测，检出率较高。宁官保等[8]建立鸡毒支原体病毒的胶体金免疫层析法，对山西太谷某鸡场35 只病鸡95 份咽分泌物的培养物进行了检测，测出阳性32 份，平板凝集试验测出阳性33 份。用胶体金技术和平板凝集试验2 种方法对已经确诊的60 份阴性样口进行检测，结果全部为阴性，未检出阳性。阳性符合率为91.43%，总符合率为96.84%。王中立等[9]研究建立犬细小病毒胶体金免疫层析法，采集犬粪便为待测样品，数量120 份，检测结果与血凝试验结果比较，如果效价在1∶40 以上，试纸条检测均为阳性，并与犬传染性肝炎病毒（ICHV）和犬瘟热病毒（CDV）没有交叉反应。试纸条存放6 个月，检测结果的重复率为100%。王爱华等[10]利用鸡减蛋综合症病毒胶体金免疫法检出浓度约为1.35 g/mL 纯化的鸡减蛋综合征病毒。程安春等[11]利用胶体金探针法检测鸡减蛋综合征病毒抗原，检出最小量为0.117 2 g/mL；采用胶体金探针法对人工感染的50 只鸡进行测定，其中从咽喉部、卵巢和输卵管峡部采集到的样品，阳性率均为100%，粪便样品的阳性率为92%。试验结果显示，检出率较高且具备良好的特异性，在兽医临床上具有较高的应用价值。

4 结 语

综上所述，免疫胶体金诊断技术具有操作简单、方便快捷、检测成本低、样品利用率高、结果易于研判、检出率高、稳定性和特异性强等优点，特别适合于基层、现场、大批量检测和大面积普查等，在兽医临床诊断中具有广阔的应用前景。