抗-Ec合并抗-M抗体致疑难配血实验分析

陈敏洁，曹锁春，许 飞，邹 昕，虞 茜，杨红梅

江苏省常州市中心血站，江苏常州 213004

不规则抗体是指ABO血型抗体以外的血型抗体，而有临床意义的不规则抗体会导致机体发生溶血性输血反应[1]。不规则抗体的出现是引起ABO血型鉴定困难和配血困难的主要原因，而其中最常见的是与Rh血型系统相关的不规则抗体，该系统不规则抗体可单独存在，也可以联合其他抗体共同存在。本课题组在工作中发现1例由抗-Ec合并抗-M抗体引起的正反定型不符及交叉配血不合，现将试验分析过程报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 患者夏某，女，65岁，因“肺癌2年余，呕血600 mL”入院，临床诊断肺癌，既往有输血史，抗体筛查阳性，需特配悬浮红细胞，遂送本站中心血输血研究室进行相关检测。

1.2试剂与仪器 试剂：抗-A/B单克隆抗体(上海血液生物，批号：20180303)；抗-D(IgM)单克隆抗体(上海血液生物，批号：20171811)；抗-C抗体(上海血液生物，批号：20183001)；抗-c抗体(上海血液生物，批号：20183101)；抗-E抗体(上海血液生物，批号：20183201)；抗-e抗体(上海血液生物，批号：201833 01)；ABO血型反定型红细胞(Ac、Bc、Oc)(北京金豪，批号：20181101028)；抗体筛选细胞(上海血液生物，批号：20187040)；国产谱细胞(上海血液生物，批号：20181123)；抗球蛋白试剂(上海血液生物，批号：20175001)、抗IgG(上海血液生物，批号：20175102)、抗C3d(批号：20185201)、抗M(上海血液生物，批号：20180420)、抗N(上海血液生物，批号：20170515)、2-Me(上海血液生物，批号:20177701),酸放散试剂(上海申型医学科技公司，批号：20180422)。聚凝胺(Poly)试剂由中国台湾贝索企业有限公司提供。仪器：久保田KA-2200血清学专用离心机；37 ℃恒温水浴箱；卢湘仪TD4低速自动平衡离心机；OrthoBioVue system。

1.3方法 采用试管法进行ABO正反定型、抗人球蛋白试验(Coombs试验)、抗体鉴定及交叉配血及微柱法进行抗体特异性鉴定及交叉配血。所有试验均严格按照文献[2]的方法和试剂操作说明书进行。

2 结 果

2.1血型鉴定(试管法)ABO正定型结果 生理盐水条件下，抗-A抗体阴性，抗-B抗体阴性；反定型结果：Ac 4+，Bc 4+，Oc阴性，自身细胞阴性。血型鉴定结果为O型。

2.2抗体筛选(试管法) 医院送检单显示筛选试验阳性，提示有不规则抗体存在，本实验室进一步做不规则抗体筛查发现筛选Ⅱ、Ⅲ细胞在室温生理盐水介质中有凝集，37 ℃下3 min凝集消失；筛选Ⅰ、Ⅲ细胞在Poly和抗人球蛋白介质中均为阳性结果，见表1。其中在Poly介质下的凝集强度达到2+，提示该抗体对Poly介质敏感。

表1 患者血清与筛选细胞反应格局及结果(批号：20187038)

注：IS表示室温，IAT表示盐水间接抗球蛋白试验,0表示阴性，+表示阳性。

2.3鉴定抗体其特异性(试管法——抗人球蛋白和Poly介质) 从筛选细胞格局中初步推测血清中存在抗-M和抗-Ec抗体。抗体特异性则通过谱细胞鉴定(由于抗筛实验在37℃下3 min凝集消失，说明盐水抗体对抗人球介质没有干扰，故试验过程中没有使用2-Me破坏)。国产谱细胞在盐水介质中出现3、6、9号阴性，符合抗-M抗体格局，在抗人球蛋白和聚凝胺介质中1、4、10号呈阴性，符合抗-Ec抗体格局，试验结果见表2。于是进一步做MNSs、Rh系统抗原分型试验进一步确定抗体特异性，见表3。该患者Rh系统分型为CCDee，MNSs系统分型为NN，与血清中相应抗体吻合。

表2 患者血清与谱反应格局及结果(批号：20181123)

注：IS表示室温，IAT表示盐水间接抗球蛋白试验，/表示没有进行此抗原筛查，0表示阴性，+表示阳性。

表3 患者Rh抗原分型结果

表4 吸收放散试验结果(国谱3号+6号)

注：w为弱阳性；s为强阳性，0表示阴性，+表示阳性。

2.4吸收放散试验 由于不同血型系统抗体在谱细胞实验中可能会有干扰而影响反应格局，为进一步确定抗体特异性，后对患者标本进行了吸收放散试验，挑选E和c抗原阳性M抗原阴性的细胞(国谱3号和6号混合液)与患者血清采用热吸收酸放散(37 ℃条件下30 min),将放散液与吸收后的血清进一步进行谱细胞试验。见表4。结果表明患者血清中确实存在抗Ec抗体和抗-M抗体。

2.5抗体效价测定

2.5.1抗-M效价测定 采用试管法对血清倍比稀释，每管均为50 μL。效价所用细胞为Ⅱ、Ⅲ筛选细胞混合液，各管中加入量为50 μL，整个体系为100 μL，分别做4 ℃、室温(IS)、37 ℃ 3种温度下抗-M抗体效价，结果显示室温为8，4 ℃为16，37 ℃<1(本研究以出现“±”的最高稀释倍数为最终效价)。见表5。

2.5.2抗-Ec效价测定 破坏与否对比试验：取180 μL血清加20 μL质控液和200 μL 2-Me，充分混合后于37 ℃水浴箱中破坏10 min，去除IgM型抗体的干扰。测定效价试验前，先试管法加4滴破坏液和1滴混合细胞，离心观察结果为阴性，说明破坏完全。采用倍比稀释法测定IgG抗体效价，第1排为破坏后血清，第2排为非破坏血清，第2排试管所使用的细胞均为筛选细胞Ⅰ号与国谱2号混合液。结果表明37 ℃盐水介质中凝集消失，2-Me破坏与否不影响效价结果，说明IgM型抗体不存在干扰，见表6。

表5 抗-M抗体效价测定

注：w为弱阳性；s为强阳性，0表示阴性，+表示阳性。

2.6交叉配血试验 根据疑难配血申请单筛选1袋献血者条码为900181815346100，O型，RhD阳性，其他血型为“CCee且NN”血样做主次侧交叉配血试验，在盐水、Poly、抗人球蛋白3种介质中均无凝集、无溶血，可输注上述悬浮红细胞2单位。1周后追踪该患者，输血效果良好。

表6 抗-Ec抗体效价测定(筛选细胞Ⅰ号+国谱2号)

注：w为弱阳性；s为强阳性，0表示阴性，+表示阳性。

3 讨 论

临床上交叉配血不合的原因众多，在进行血液筛查的每个环节都可能导致配血不合。在输血前的血液检测中，不规则抗体筛选阳性时导致不合属常见现象。Rh血型系统在输血工作中的重要性仅次于ABO血型系统[3-4]。Rh血型系统抗体产生的原因大多是妊娠和输血，抗-E抗体是D阳性人群最容易产生的抗体，而抗-c抗体往往会伴随着抗-E抗体一起出现。该患者Rh基因型为CCDee，缺乏c和E抗原，多次输血过程中，由于带有c和E抗原的红细胞被输入患者体内，导致其自身产生了免疫性抗-E和抗-c抗体，当再次输血时就会出现交叉配血不合。抗-M抗体多为天然产生，不需要红细胞的刺激，大多为IgM性质，少数为IgG性质，在4 ℃时活性最强，抗-M抗体只有在37 ℃或抗球蛋白阳性时才具有临床意义[3]。但是考虑在低温麻醉情况下，且红细胞保存温度为2～6 ℃，输入的红细胞易与高效价抗-M抗体结合并吸附补体，从而引起抗-M抗体溶血。不规则抗体阳性的患者一旦输注含有相应抗原的红细胞，抗原抗体在补体的参与下发生免疫反应，导致输注的红细胞溶解破坏，严重时甚至危及生命。因此输血前应尽可能了解患者输血史、妊娠史、用药史，及时发现有临床意义的抗体，以选择对应抗原阴性的血液，保证输血安全有效[5-8]。