轮钟花果实化学成分的研究

王建霞郭洪伟田云刚李 明毕绍文魏 华

（1.吉首大学生物资源与环境科学学院，湖南吉首 416000； 2.湖南省土家医药研究中心，湖南吉首 416000； 3.曲靖市沾益区万远中药材种植农民专业合作社，云南曲靖 655000）

轮钟花Cyclocodon lancifolius（Roxburgh） Kurz，别名野灵果、肉算盘等，系桔梗科轮钟花属多年生草本植物［1］。1983 年版《中国植物志》 记载其为金钱豹属植物长叶轮钟草［2］，主要分布于云南（东南部）、贵州、湖南和东南亚等，根可入药，无毒，甘而微苦，有益气补虚、祛瘀止痛之效［1］。《中华本草》 记载其有“治疗劳倦气虚乏力、跌打损伤、肠绞痛”等效用［3］。它为湘西苗族、贵州民间常用药植物，肉质根，胡萝卜状，当地人民经常以其根代替人参作为大病初愈后的滋补品，有“南方人参”之称，果实呈浆果球状，营养丰富，富含原花青素、果胶和多糖，具有较强的抗氧化作用［4-5］，但对其成分的研究仅限于初探，主要含有糖类、生物碱、黄酮、酚类、甾体、蒽醌、三萜［6］。为了更好地开发利用该植物资源，本实验对轮钟花果实70%乙醇提取物化学成分进行研究，从中分离得到8 个化合物，均为首次从轮钟花属植物中发现。

1 材料

AVANCE Ⅲ-600 型核磁共振仪（瑞士Bruker公司）；LTQ-Obitrap XL 液质联用仪（美国赛默飞世尔公司）；LC-20AT 高效液相色谱仪（日本岛津公司）；Rotavapor R-210 旋转蒸发仪（瑞士Buchi公司）；LE204E 电子分析天平［梅特勒-托利多仪器（上海） 有限公司］；WFH-203B 三用紫外分析仪、BSZ-160F 自动馏分收集器（上海精密科学仪器有限公司）。

柱色谱用硅胶、薄层色谱用硅胶GF254、柱色谱用硅胶 （青岛海洋化工有限公司）；Sephadex LH-20 凝胶（瑞士Pharmacia 公司）；HW-40C 凝胶（日本Toyopearl 公司）。二氯甲烷、三氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、甲醇（分析纯，成都金山化学试剂有限公司）；甲醇（色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司）；水为怡宝水［华润怡宝饮料（中国） 有限公司］。

轮钟花果实于2018 年12 月采自云南省曲靖市沾益区炎方乡小古山村，由毕邵文先生提供，经吉首大学张代贵教授鉴定为桔梗科轮钟花属植物轮钟花Cyclocodon lancifolius（Roxburgh） Kurz 的果实，凭证标本（JIU.WU20181201） 保存于湖南省土家医药研究中心。

2 提取与分离

轮钟花果实（鲜重35 kg） 捣碎后，加70%乙醇40 L，于70 ℃提取4 次（每次2.5 h），合并提取液，减压回收溶剂，浓缩后得总浸膏3 668 g。硅胶拌样粗分，经硅胶柱色谱层析，石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮梯度洗脱，减压浓缩后得乙酸乙酯部位浸膏48.9 g、丙酮部位浸膏46.5 g。

丙酮部位粗浸膏（46.5 g） 用硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇（40∶1～2∶1） 梯度洗脱，经TLC检测合并，得到4 个部分FrA.1～4。FrA.1 经硅胶柱色谱层析，二氯甲烷-甲醇（35∶1～2∶1） 梯度洗脱，经TLC 检测合并得到6 个流分 FrA.1-1～1-6，FrA.1-4 经硅胶柱层析，乙酸乙酯-甲醇（50∶1～20∶1） 梯度洗脱，得到3 个流分FrA.1-4-1～1-4-3；FrA.1-4-2 经Sephadex LH-20 （甲醇）洗脱，得到化合物1 （585.1 mg）。FrA.2 经硅胶柱色谱层析，二氯甲烷-甲醇（25∶1～2∶1） 梯度洗脱，经TLC 检测合并得到6 个流分FrA.2-1～2-6，FrA.2-1-1 经硅胶柱层析和HW-40C 柱（甲醇） 洗脱，得化合物2 （9.4 mg）。FrA.3 经硅胶柱色谱层析，二氯甲烷-甲醇（20∶1～1∶1） 梯度洗脱，经TLC 检测合并得到5 个流分FrA.3-1～3-5，FrA.3-1-3 经硅胶柱层析、HW-40C 柱 （甲醇）、HPLC（甲醇-水＝13∶ 87），得到化合物3 （6.8 mg）、4（4.4 mg）、5 （20.1 mg）。Fr.4 经硅胶柱层析，乙酸乙酯-甲醇（30∶1～10∶1） 梯度洗脱，经TLC检测合并，得到4 个流分FrA.4-1～4-4，FrA.4-1-3经硅胶柱层析、Sephadex LH-20 柱（甲醇） 洗脱，得到化合物6 （4.8 mg），FrA.4-1-4 经硅胶柱层析、Sephadex LH-20 柱 （甲醇）、HPLC （甲醇-水＝40∶60），得到化合物7 （144.1 mg）。乙酸乙酯部位粗浸膏（48.9 g） 经硅胶柱层析，二氯甲烷-乙酸乙酯（15∶1～2∶1） ／二氯甲烷-甲醇（15∶1～8∶1） 梯度洗脱，TLC 检测合并得到5 个部分FrB.1～5，FrB.2 经反复硅胶柱色谱层析、HPLC（甲醇-水＝43∶57），得化合物8 （3.7 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：黄色粉末。ESI-MSm／z：309［M＋Na］＋，分子式C15H10O6。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：7.34 （1H，dd，J＝1.8，8.4 Hz，H-6′），7.33 （1H，s，H-2′），6.85 （1H，d，J＝8.4 Hz，H-5′），6.49（1H，s，H-3），6.39 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-8），6.15 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-6）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：93.6 （C-8），98.7 （C-6），102.4（C-3），103.9 （C-10），112.7 （C-6′），115.4 （C-5′），118.9 （C-2′），122.3 （C-1′），145.7 （C-3′），149.6 （C-4′），158.0 （C-9），161.8 （C-5），164.7（C-7），164.9 （C-2），182.5 （C-4）。以上数据与文献［7］基本一致，故鉴定为木犀草素。

化合物2：淡黄色粉末。ESI-MSm／z：149［M＋Na］＋，分子式C6H6O3。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：9.50 （1H，s，-CHO），7.35 （1H，d，J＝3.0 Hz，H-3），6.55 （1H，d，J＝3.0 Hz，H-4），4.57 （2H，s，H-α）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：56.0 （C-α），107.5 （C-3），109.5 （C-4），152.5（C-2），161.8 （C-5），178.0 （-CHO）。以上数据与文献［8］基本一致，故鉴定为5-羟甲基糠醛。

化合物3：白色粉末。ESI-MSm／z：231 ［M＋Na］＋，分子式C8H16O6。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：4.21 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），3.81～3.83 （1H，m，H-1a），3.60～3.63 （1H，m，H-1b），1.19 （3H，t，J＝7.2 Hz，H-2）；13C-NMR（150 MHz，CD3OD）δ：14.1 （C-2），61.4 （C-6′），63.0 （C-1），70.2 （C-4′），73.7 （C-2′），76.5 （C-3′），76.7 （C-5′），102.7 （C-1′）。以上数据与文献［9］基本一致，故鉴定为乙基β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4：白色粉末。ESI-MSm／z：266 ［M＋Na］＋，分子式C9H13N3O5。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：7.98 （1H，d，J＝8.4 Hz，H-6），5.86（1H，d，J＝4.8 Hz，H-1′），5.65 （1H，d，J＝8.4 Hz，H-5），4.13 （1H，t，J＝4.8 Hz，H-2′），4.10（1H，t，J＝4.8 Hz，H-3′），3.97～3.95 （1H，m，H-4′），3.79 （1H，dd，J＝3.0，12.0 Hz，H-5′ a），3.70 （1H，dd，J＝3.0，12.0 Hz，H-5′ b）；13CNMR （150 MHz，CD3OD）δ：60.9 （C-5′），69.9（C-2′），74.3 （C-3′），84.9 （C-4′），89.2 （C-1′），101.2 （C-5），141.3 （C-6），151.1 （C-2），164.8（C-4）。以上数据与文献［10］基本一致，故鉴定为胞苷。

化合物5：白色粉末。ESI-MSm／z：395 ［M＋Na］＋，分子式C17H24O9。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：6.71 （2H，s，H-2，6），6.51 （1H，d，J＝15.6 Hz，H-7），6.29 （1H，dt，J＝15.6，6.0 Hz，H-8），4.83 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），4.18（1H，dd，J＝6.0，1.8 Hz，H-9），3.82 （6H，s，3，5-OCH3），3.74 （1H，dd，J＝2.4，12.0 Hz，H-2′），3.62 （1H，dd，J＝7.2，12.0 Hz，H-3′），3.42～3.45 （1H，m，H-4′），3.36～3.38 （1H，m，H-5′a），3.15～3.18 （1H，m，H-5′ b）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：55.6 （3，5-OCH3），61.1 （C-6′），62.2 （C-9），69.9 （C-4′），74.3 （C-2′），76.4（C-5′），77.0 （C-3′），103.9 （C-1′），104.0 （C-2，6），128.6 （C-8），129.9 （C-1，7），133.9 （C-4），153.0 （C-3，5）。以上数据与文献［11］基本一致，故鉴定为紫丁香苷。

化合物6：淡黄色油状物。ESI-MSm／z：148［M＋Na］＋，分子式C6H7NO2。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：7.96 （1H，d，J＝3.0 Hz，H-2），7.32（1H，d，J＝9.0 Hz，H-5），7.19 （1H，dd，J＝9.0，3.0 Hz，H-4），4.54 （2H，s，H-7）；13C-NMR （150 MHz，CD3OD）δ：63.8 （C-7），121.9 （C-4），123.7（C-5），135.9 （C-2），150.9 （C-6），153.5 （C-3）。以上数据与文献［12］基本一致，故鉴定为5-羟基-2-羟甲基吡啶。

化合物7：淡黄色粉末。ESI-MSm／z：419［M＋Na］＋，分子式C20H28O8。1H-NMR （600 MHz，CD3OD）δ：6.30 （1H，dq，J＝15.6，6.6 Hz，H-2），5.88 （1H，dt，J＝15.6，7.2 Hz，H-11），5.55（1H，d，J＝15.6 Hz，H-3），5.43 （1H，dd，J＝15.6，8.4 Hz，H-10），4.40 （1H，d，J＝6.6 Hz，H-8），4.29 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），4.24 （1H，dd，J＝8.4，6.6 Hz，H-9），3.55 （2H，t，J＝6.6 Hz，H-14），2.16 （1H，td，J＝14.4，7.2 Hz，H-12），1.78 （3H，dd，J＝6.6，1.8 Hz，H-1），1.60-1.65 （1H，m，H-13），3.82 （1H，dd，J＝12.0，1.8 Hz，H-2′），3.62 （1H，dd，J＝12.0，6.0 Hz，H-3′），3.27～3.30 （1H，m，H-4′），3.23～3.26（1H，m，H-6′ a），3.16 （1H，m，H-5′ b）；13CNMR （150 MHz，CD3OD）δ：17.6 （C-1），28.4 （C-12），31.5 （C-13），60.9 （C-14），61.3 （C-6′），65.1 （C-8），69.9 （C-7），70.2 （C-4′），71.1 （C-6），73.4 （C-2′），76.5 （C-3′），76.6 （C-5′），76.8（C-5），79.8 （C-9），80.4 （C-4），99.3 （C-1′），109.1 （C-3），125.1 （C-10），137.6 （C-11），144.1（C-2）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为党参炔苷。

化合物8：白色粉末。ESI-MSm／z：169 ［M＋Na］＋，分子式C9H6O2。1H-NMR （600 MHz，CDCl3）δ：7.72 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-4），7.54 （1H，t，J＝7.8 Hz，H-7），7.49 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-5），7.34 （1H，d，J＝7.8 Hz，H-6），7.28 （1H，t，J＝7.8 Hz，H-8），6.43 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-3）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：116.7 （C-3），117.0 （C-8），118.9 （C-10），124.5 （C-6），127.9（C-5），131.9 （C-7），143.5 （C-4），154.1 （C-9），160.9 （C-2）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为香豆素。

4 讨论

本研究从轮钟花果实70% 乙醇提取物中分离得到8 个化合物，均为首次从该属植物中发现，涉及黄酮类、聚乙炔醇类、苯丙素类等。其中，黄酮类木犀草素和聚乙炔醇类党参炔苷分离出的量相对较多，可能是主要成分。

文献报道，天然来源的木犀草素具有抗肿瘤、抗氧化、保护神经系统等多种药理活性［15］；紫丁香苷具有明显的抗炎镇痛、免疫调节［16-17］作用；5-羟甲基糠醛具有抗氧化、抗心肌缺血、抗肿瘤细胞增殖等多种生物活性［18］；党参炔苷对醇、酸等所致胃黏膜损伤有一定的保护作用，呈现较好的抗溃疡活性［19］。本研究丰富了轮钟花物质基础，可为其进一步开发利用提供参考。