大落新妇根中三萜类成分的研究

2020-01-17伍天苔范琳琳申琳燕

中成药 2020年7期

何康，伍天苔，范琳琳，申琳燕，徐宏，邹娟

（贵州中医药大学，贵州贵阳 550025）

虎耳草科落新妇属植物在全世界约有18 种，我国产7 种，大部分地区均有分布［1］。贵州黔东南一带苗族地区以落新妇和大落新妇最常用，主要治疗跌打损伤，骨疼痛、关节疼痛、风湿病、腰腿痛等，在抗炎、消肿、止痛、活血化瘀方面功效显著。

现代研究表明，落新妇属植物中主要化学成分为三萜、香豆素、黄酮，在镇痛消炎、抗肿瘤、镇咳平喘、抗菌、抗病毒、治疗烧烫伤等方面有广泛的生物活性［2-12］。其所含三萜是一种少见的羧基从C17位迁移到C14位的乌苏烷型和齐墩果烷型，在抗肿瘤、抗真菌、平喘等方面有很好的作用［3，13］。

目前，尚未见对大落新妇化学成分的研究。基于大落新妇的丰富资源、广泛使用和显著疗效，以及具有潜在生物活性的特征三萜类，本实验对其根进行研究，从中分离得到9 个化合物，均为首次从该植物中发现。

1 材料

Q-TOF 质谱仪（德国布鲁克公司）；Inova-400 MHz 核磁共振仪（美国瓦里安公司）；R215 实验室规模旋转蒸发仪（瑞士步琪公司）；FZ102 微型植物粉碎机（上海书培实验设备有限公司）；电子天平（瑞士Metter-Toledo 公司）；Sephadex LH-20（美国通用电气医疗集团）；GF254制备薄层板及200～300 目柱色谱用硅胶（青岛海洋化工有限公司）。所用试剂均为分析纯。

药材于2013 年8 月采自六盘水市钟山区石龙村，经贵州中医药大学赵俊华教授鉴定为虎耳草科落新妇属植物大落新妇Astilbe grandisStapf ex Wils.，标本存放于贵州中医药大学苗医药重点实验室，标本号为20130814201。

2 提取与分离

将自然风干的14 kg 大落新妇根粉碎，加甲醇冷浸提取4 次，每次3 d，过滤提取液，减压回收甲醇后得浸膏1.1 kg，蒸馏水溶解后经D101 大孔树脂柱，分别用水、50% 乙醇、90% 乙醇梯度洗脱，得到90%乙醇部分（518 g），进行硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（100∶1～8∶2）梯度洗脱，得到3 个组分Fr.A～C。Fr.B 经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯（100∶1～1∶1）梯度洗脱，得到5个组分Fr.B1～Fr.B5。Fr.B2 经硅胶柱层析，二氯甲烷-乙酸乙酯（100∶1～8∶2）反复柱层析，Sephadex LH-20 纯化，得到化合物3 （26 mg）、4（6 mg）、7 （101 mg）；Fr.B3 经硅胶柱层析，二氯甲烷-乙酸乙酯（8∶2）系统洗脱，析出白色粉末，过滤得到化合物8 （900 mg），母液部分再经硅胶柱层析，石油醚-乙酸乙酯（8∶2）反复柱层析，Sephadex LH-20 纯化，得到化合物1 （6 mg）、2（11 mg）；Fr.B4 经硅胶柱层析，二氯甲烷-甲醇（100∶1～9∶1）反复柱层析，Sephadex LH-20 纯化，得到化合物5 （20 mg）、6 （38 mg）、9 （20 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末；易溶于二甲基亚砜，5% 硫酸-乙醇溶液显色为紫红色。ESI-MSm／z：479.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，DMSO-d6）δ：5.51 （1H，t，J＝4.5 Hz，H-12），3.17 （1H，dd，J＝14.0，4.9 Hz，H-3），0.94 （3H，s，H-26），0.88（3H，s，H-23），0.86 （3H，s，H-25），0.82 （3H，s，H-28），0.81 （3H，s，H-30），0.80 （3H，s，H-29），0.66 （3H，s，H-24）；13C-NMR （100 MHz，DMSO-d6）δ：178.8 （C-27），137.3 （C-13），125.8（C-12），78.3 （C-3），55.1 （C-14），55.1 （C-5），48.7 （C-18），46.5 （C-9），43.5 （C-19），39.1 （C-8），38.9 （C-4），38.5 （C-1），38.4 （C-10），36.4（C-21），36.2 （C-7），34.1 （C-22），33.1 （C-29），32.3 （C-17），31.0 （C-20），28.1 （C-28），28.0（C-23），27.6 （C-2），27.4 （C-16），24.0 （C-30），23.5 （C-11），22.4 （C-15），18.1 （C-6），18.0 （C-26），16.3 （C-25），16.0 （C-24）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为3β-hydroxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物2：白色粉末；易溶于氯仿，5%硫酸-乙醇溶液显色为紫红色。ESI-MSm／z：479.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：5.70 （1H，t，J＝4.5 Hz，H-12），3.44 （1H，brs，H-3），1.05（3H，s，H-26），1.02 （3H，s，H-23），1.00 （3H，s，H-25），1.00 （3H，s，H-24），0.98 （3H，s，H-28），0.94 （3H，s，H-29），0.82 （3H，s，H-30）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：178.2 （C-27），138.2 （C-13），126.5 （C-12），76.4 （C-3），56.2（C-14），49.1 （C-5），48.8 （C-9），47.5 （C-18），44.5 （C-19），40.1 （C-4），37.5 （C-8），37.3 （C-1），36.8 （C-10），36.2 （C-22），34.5 （C-29），33.4 （C-21），33.3 （C-7），33.0 （C-17），31.3 （C-20），29.8 （C-28），28.4 （C-16），27.8 （C-23），27.7 （C-2），23.8 （C-11），23.1 （C-30），22.4 （C-15），22.3 （C-24），18.3 （C-26），18.1 （C-6），16.2 （C-25）。以上数据与文献［14］基本一致，故鉴定为3α-hydroxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物3：白色粉末；易溶于氯仿，5%硫酸-乙醇溶液显色为紫红色。ESI-MSm／z：521.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：5.71 （1H，dd，J＝11.2，2.5 Hz，H-12），4.59 （1H，brs，H-3），2.03 （3H，s，H-1′），1.03 （3H，s，H-26），0.97 （3H，s，H-25），0.87 （3H，s，H-23），0.85（3H，s，H-24），0.83 （3H，s，H-28），0.82 （3H，s，H-30），0.79 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：182.2 （C-27），170.7 （C-2′），137.6 （C-13），126.4 （C-12），78.2 （C-3），55.9（C-14），49.9 （C-5），49.3 （C-9），46.8 （C-18），44.2 （C-19），40.4 （C-4），36.9 （C-1），36.6 （C-8），36.5 （C-22），36.4 （C-10），34.3 （C-21），33.8 （C-29），33.3 （C-7），32.9 （C-17），31.1 （C-20），28.3 （C-28），27.8 （C-23），27.5 （C-2），23.6 （C-16），23.3 （C-11），22.6 （C-30），22.0（C-24），21.7 （C-15），21.1 （C-1′），18.2 （C-26），18.2 （C-6），16.2 （C-25）。以上数据与文献［15］基本一致，故鉴定为3α-acetoxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物4：白色粉末；易溶于乙酸乙酯、氯仿，5% 硫酸-乙醇溶液显色为紫红色。ESI-MSm／z：521.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：5.67 （1H，dd，J＝11.2，2.5 Hz，H-12），4.50（1H，dd，J＝14.2，5.5 Hz，H-3），2.07 （3H，s，H-1′），1.05 （3H，s，H-26），1.00 （3H，s，H-25），0.86 （3H，s，H-23），0.86 （3H，s，H-24），0.84（3H，s，H-28），0.84 （3H，s，H-30），0.83 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：180.9（C-27），171.3 （C-2′），137.4 （C-13），126.1 （C-12），80.8 （C-3），55.8 （C-14），55.1 （C-5），49.2（C-18），46.9 （C-9），43.8 （C-19），39.1 （C-8），38.1 （C-1），37.7 （C-4），37.0 （C-10），36.6 （C-22），36.4 （C-7），34.3 （C-21），33.4 （C-29），32.9 （C-17），31.1 （C-20），28.3 （C-28），28.2（C-23），27.6 （C-16），23.6 （C-30），23.6 （C-2），22.7 （C-11），22.3 （C-15），21.4 （C-1′），18.2（C-6），18.1 （C-26），16.8 （C-25），16.5 （C-24）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为3βacetoxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物5：白色粉末；易溶于乙酸乙酯、甲醇，5% 硫酸-乙醇溶液显色为紫红色。ESI-MSm／z：495.4 ［M ＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CH3OD）δ：5.59 （1H，t，J＝2.7 Hz，H-12），4.07，3.39 （1H，d，J＝11.1 Hz，H-24），3.28（1H，dd，J＝11.5，4.5 Hz，H-3），2.18 （1H，dd，J＝11.2，5.7 Hz，H-9），1.16 （3H，s，H-23），1.02 （3H，s，H-26），0.97 （3H，s，H-28），0.87（3H，s，H-25），0.86 （3H，s，H-30），0.84 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CH3OD）δ：179.9（C-27），138.9 （C-13），126.7 （C-12），81.1 （C-3），65.3 （C-24），57.2 （C-14），57.1 （C-5），50.7（C-18），48.8 （C-9），45.4 （C-19），43.5 （C-4），40.7 （C-8），39.8 （C-1），38.2 （C-7），37.9 （C-10），37.8 （C-22），35.6 （C-21），34.0 （C-29），33.9 （C-17），32.0 （C-20），28.9 （C-28），28.9（C-2），28.4 （C-16），24.1 （C-30），24.1 （C-11），23.4 （C-23），23.2 （C-15），19.8 （C-6），18.6 （C-26），17.2 （C-25）。以上数据与文献［16］基本一致，故鉴定为3β，24-dihydroxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物6：白色粉末；易溶于氯仿，5%硫酸-乙醇溶液显色为紫红色。ESI-MSm／z：495.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：5.65 （1H，brs，H-12），3.86 （1H，brs，H-3），3.71，3.50（1H，d，J＝11.2 Hz，H-24），2.12 （1H，dd，J＝11.4，5.1 Hz，H-9），1.06 （3H，s，H-26），0.99（3H，s，H-25），0.93 （3H，s，H-28），0.84 （3H，s，H-29），0.84 （3H，s，H-30），0.84 （3H，s，H-23）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：178.3 （C-27），138.1 （C-13），126.1 （C-12），70.9 （C-3），66.7 （C-24），56.1 （C-14），49.6 （C-5），49.2 （C-18），47.6 （C-9），44.4 （C-4），42.9 （C-19），40.0（C-10），37.0 （C-22），36.8 （C-1），36.7 （C-8），34.5 （C-21），33.7 （C-20），33.4 （C-29），33.0（C-7），31.3 （C-17），28.4 （C-28），27.7 （C-2），25.1 （C-16），23.8 （C-23），23.2 （C-30），22.3（C-11），22.0 （C-15），18.6 （C-26），18.0 （C-6），16.9 （C-25）。以上数据与文献［17］基本一致，故鉴定为3α，24-dihydroxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物7：白色粉末；易溶于氯仿，5%硫酸-乙醇溶液显色为紫红色。ESI-MSm／z：513.4 ［M＋H］＋。1H-NMR （400 MHz，CDCl3）δ：5.68 （1H，dd，J＝11.1，2.6 Hz，H-12），4.48 （1H，brs，H-3），3.48 （3H，s，-OCH3），2.04 （3H，s，H-1′），1.02 （3H，s，H-26），0.98 （3H，s，H-25），0.87（3H，s，H-23），0.85 （3H，s，H-24），0.84 （3H，s，H-28），0.82 （3H，s，H-30），0.80 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：178.4 （C-27），171.1 （C-2′），138.1 （C-13），126.4 （C-12），78.9 （C-3），56.1 （C-14），51.6 （-OCH3），51.0（C-5），49.2 （C-9），47.4 （C-18），44.2 （C-19），40.0 （C-4），37.8 （C-1），37.2 （C-10），36.7 （C-22），36.4 （C-8），34.4 （C-21），33.4 （C-29），33.0 （C-7），31.3 （C-17），29.8 （C-20），28.4 （C-28），28.2 （C-2），27.6 （C-23），23.8 （C-16），23.7 （C-30），23.0 （C-11），22.4 （C-15），22.4（C-24），21.5 （C-1′），18.2 （C-6），18.1 （C-26），16.4 （C-25）。以上数据与文献［15］基本一致，故鉴定为methyl 3α-acetoxyolean-12-en-27-oate。

化合物8：白色粉末；易溶于氯仿，5%硫酸-乙醇溶液显色为紫红色。ESI-MSm／z：495.4 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CH3OD）δ：5.62 （1H，dd，J＝4.8，2.4 Hz，H-12），3.05 （1H，dd，J＝13.8，4.5 Hz，H-3），1.34 （3H，s，H-24），1.28（3H，s，H-25），1.14 （3H，s，H-26），1.01 （3H，s，H-23），0.88 （3H，s，H-28），0.87 （3H，s，H-30），0.85 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CH3OD）δ：178.6 （C-27），138.4 （C-13），127.1（C-12），80.0 （C-3），68.3 （C-6），57.5 （C-14），56.8 （C-5），50.7 （C-18），49.6 （C-9），45.4 （C-7），45.0 （C-19），42.1 （C-1），40.6 （C-4），40.0（C-8），37.8 （C-10），37.8 （C-22），35.6 （C-21），34.0 （C-17），33.9 （C-29），32.0 （C-20），29.0（C-23），28.9 （C-2），28.4 （C-16），28.1 （C-28），24.1 （C-30），24.0 （C-11），23.4 （C-15），20.2（C-26），17.9 （C-24），17.5 （C-25）。以上数据与文献［13］基本一致，故鉴定为3β，6β-dihydroxyolean-12-en-27-oic acid。

化合物9：白色粉末；易溶于甲醇，5%硫酸-乙醇溶液显色为紫红色。ESI-MSm／z：511.3 ［M＋Na］＋。1H-NMR （400 MHz，CH3OD）δ：5.65 （1H，brs，H-12），3.51，4.13 （2H，d，J＝11.2 Hz，H-24），3.15 （1H，dd，J＝11.8，4.4 Hz，H-3），1.38（3H，s，H-25），1.31 （3H，s，H-26），1.17 （3H，s，H-23），0.91 （3H，s，H-28），0.90 （3H，s，H-30），0.85 （3H，s，H-29）；13C-NMR （100 MHz，CH3OD）δ：180.1 （C-27），138.3 （C-13），127.1（C-12），80.0 （C-3），68.3 （C-6），64.3 （C-24），57.5 （C-5），56.8 （C-14），50.7 （C-18），50.7 （C-9），45.4 （C-4），45.0 （C-19），42.1 （C-7），41.9（C-1），40.2 （C-8），37.8 （C-22），37.8 （C-10），35.6 （C-21），34.0 （C-17），33.9 （C-29），32.0（C-20），29.0 （C-16），29.0 （C-28），28.4 （C-2），24.1 （C-30），24.0 （C-11），23.4 （C-15），22.5（C-23），20.2 （C-26），17.9 （C-25）。以上数据与文献［18］基本一致，故鉴定为3β，6β，24-trihydroxyolean-12-en-27-oic acid。