接种乙肝疫苗表面抗原低滴度阳性婴幼儿病毒DNA定量检测临床分析

安和兵，杨敬芳，马媛媛，张俊婷，王书旺

(1.河北北方学院附属第二医院，河北 张家口 075100；2.张家口宣钢医院，河北 张家口 075100)

乙型肝炎是严重危害人体健康的传染病之一[1]，乙肝病毒(HBV)是一种经皮肤黏膜和性传播的DNA病毒[2],对该病的快速诊断和治疗已成为全球性公共卫生问题[3]。HBV低水平携带者低抗原量造成的漏检尤其值得重视，HBV-DNA定量检测是最直接最客观的病毒复制指标，其含量与患者的传染性成正比[4]。我们选取了注射乙肝疫苗后乙肝表面抗原低滴度阳性婴幼儿进行乙肝病毒DNA定量(HBV-DNA定量)检测，探讨HBsAg阳性和疫苗接种的相关性及其临床意义，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

采用化学发光微粒子法对河北北方学院附属第二医院2016—2019年间儿科病房和免疫门诊接种乙肝疫苗2周内的婴幼儿进行HBsAg检测，检出低滴度HBsAg阳性婴幼儿200例为研究组；选取200例接种乙肝疫苗后HBsAg阴性的婴幼儿作为对照组。分别采用ELISA法和化学发光微粒子法进行HBsAg检测，每种方法选用同一台仪器。对2组婴幼儿分别进行HBV-DNA定量检测。

1.2 仪器与试剂

HBV-DNA定量检测采用ABI7300实时荧光定量PCR分析仪，试剂由中山大学达安基因股份有限公司提供；化学发光微粒子法采用i2000SR化学发光仪(雅培公司生产)，试剂为仪器配套进口试剂；ELISA法采用安图PHOMO酶免仪(郑州安图公司生产)，试剂由北京万泰生物药业股份有限公司提供。

1.3 方法

所有研究对象按要求禁食8～12 h，早晨空腹抽取静脉血，分离血清进行检测。HBsAg检测标准：化学发光法定量分析>0.05 IU·mL-1为阳性，ELISA定性分析>cut off值为阳性，HBV-DNA定量检测以HBV-DNA>500 IU·mL-1为阳性。严格按照实验标准操作规程(SOP文件)进行操作。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 ELISA法和化学发光微粒子法检测结果

研究组200例婴幼儿中有4例化学发光微粒子法检测结果为11.30、4.5、9.20、5.10 IU·mL-1，其余196例介于0.05～0.30 IU·mL-1，表现为弱阳性；ELISA法检测结果有12例表现为弱阳性。研究组ELISA法对低滴度阳性HBsAg灵敏度很低，阳性率仅为6%，而化学发光微粒子法阳性检出率为100%(P<0.05)

对照组200例婴幼儿化学发光微粒子法、ELISA法检测结果全部为阴性。

2.2 研究组和对照组乙肝病毒DNA定量检测结果

研究组200例HBsAg阳性婴幼儿中HBV-DNA定量检测阳性者4例，阳性率为2%，其中3例婴幼儿的母亲是HBsAg携带者，可能是新生儿分娩过程中发生母婴传播，成为HBV携带者；1例婴幼儿阳性原因不明，父母HBsAg均为阴性，可能为婴幼儿后期感染HBV所致；研究组中其余196例婴幼儿HBV-DNA定量结果全部为阴性。对照组中200例婴幼儿HBV-DNA定量结果全部为阴性。

HBsAg低滴度阳性和婴幼儿接种疫苗可能相关，尚需积累资料对相关性作进一步研究。

3 讨 论

目前关于HBsAg低滴度阳性患者研究较少[5]，我们对河北北方学院附属第二医院儿科病房和免疫门诊近3年乙肝疫苗免疫接种病例资料进行回顾性分析，分析了2 000名接种乙肝疫苗婴幼儿2周内化学发光微粒子法检测乙肝五项的结果，筛选出200例HBsAg弱阳性婴幼儿，阳性率约为10%，有研究报道定量阳性率为18%[6]。20世纪90年代国外陆续报道过新生儿接种乙肝疫苗后出现短暂HBsAg阳性的情况[7-9]。ELISA法检测HBsAg只能进行定性检测，检测灵敏度不高，对一些临界阳性易漏检，HBsAg血清标志物定量检测能较为准确地反映感染者体内HBV含量[10]。本研究中，我们采用化学发光微粒子法定量检测HBsAg血清标志物，使用直径约2μm顺磁颗粒固相载体，表面积大、吸附效率高，固相抗原或抗体量增加；增强发光试剂可以使发光时间延长、强度增加，检测灵敏度显著提高[11]。本研究结果表明，化学发光微粒子法检测临界阳性标本灵敏度远高于ELISA法，差异有统计学意义(P<0.05)。

研究组HBV-DNA定量检测结果表明，接种乙肝疫苗后短期内出现HBsAg低滴度阳性为假阳性，不存在HBV大量复制，可能因注射疫苗后疫苗在体内稀释并激活了免疫系统，产生免疫应答，可能存在HBV低水平复制，高灵敏度化学发光微粒子法可检测出弱阳性，但这种复制水平HBV-DNA定量检测达不到阳性参考水平。

综上，HBV-DNA定量检测能够直接反映HBV复制水平，可作为诊断HBV感染的重要依据。化学发光微粒子法可降低ELISA漏检HBsAg阳性的风险[12]。接种乙肝疫苗婴幼儿化学发光微粒子法检测出现HBsAg高阳性率可能与疫苗接种相关，并非乙肝病毒感染所致，但部分阳性患者确系感染乙肝病毒所致，建议对已接种乙肝疫苗的婴幼儿进行HBsAg检测最好在接种2～3周以后，可有效降低HBsAg的假阳性率，HBsAg结果弱阳性婴幼儿需进行HBV-DNA定量检测以确诊。