血清内皮细胞特异性分子-1和血管内皮生长因子与HCV感染相关肝细胞癌相关性研究

唐先梅， 张 庆， 刘 杰， 刘彦斌， 曹平虎， 宋雪玲

汉中市中心医院感染科，陕西 汉中 723000

肝硬化是肝细胞癌(hepatocellular carcinoma, HCC)发展的主要危险因素[1]。诊断肝硬化的金标准是肝脏活组织检查和组织病理学检查。这种具有侵入性且检查价格昂贵的方法既有可能导致患者感染其他病原体，也有可能导致癌细胞沿着活检通道侵袭。因此，有必要寻找新的特异性的血清学标志物诊断或预测HCC预后。内皮细胞特异性分子-1(endothelial cell-specific molecule-1, Endocan)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)均在肿瘤形成、侵袭、复发过程中发挥重要作用[2-3]。本研究旨在评估HCV相关HCC患者血清Endocan和VEGF的水平，并探讨其诊断HCC及预测HCC死亡率的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2017年3月至2018年3月在我院住院的102例HCV感染相关HCC患者(HCC组)、88例HCV肝硬化患者(LC组)和 60名健康体检者(HC组)。纳入标准：丙型肝炎肝硬化、肝癌诊断标准符合中华医学会肝病学分会及传染病与寄生虫病学分会于2015年修订的《丙型肝炎防治指南》[4]；根据Child-Pugh评分系统进行肝硬化分级[5]；年龄>18岁。排除标准： HCV感染以外的肝细胞损伤(如血清乙型肝炎表面抗原阳性、慢性酒精中毒、中毒性肝炎或自身免疫性肝炎等)；器官移植；严重的心脏或肺合并症；免疫介导性疾病；其他恶性肿瘤；精神疾病；合并其他病毒感染者；妊娠期、哺乳期妇女。本研究经医院伦理委员会审核批准，患者及家属知情同意。

1.2 研究方法

1.2.1 临床资料收集及随访：收集研究对象临床资料，包括年龄、性别、白细胞计数(white blood cells, WBC)、血小板计数(platelets, PLT)、天冬氨酸转氨酶(aspartate transaminase, AST)、丙氨酸转氨酶(aspartate and alanine transaminase, ALT)、碱性磷酸酶(alkaline phospatase, ALP)、国际标准化比值(international normalized ratio, INR)、甲胎蛋白(alpha-fetoprotein, AFP)、肝脏活组织检查和病理诊断及分级等信息。另外，以门诊、电话等形式对研究对象进行随访。随访时间为纳入研究起至2019年3月。

1.2.2 观察指标：空腹采集静脉血5 ml，3 000 r/min(离心半径10 cm)，4 ℃离心10 min后收集血清，-80 ℃保存备用。采用酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)(上海拜力生物科技有限公司试剂盒)检测血清中Endocan和VEGF水平。操作严格按照产品说明书进行。所有检测均由经过技术培训及质量考核合格的同一名操作者完成。

2 结果

2.1 患者一般资料HCC组肿瘤大小(8.54±3.38)cm,肿瘤数量(1.08±0.45)个，血管癌栓38例，TNM分期Ⅰ期23例，Ⅱ期39例，Ⅲ期28例，Ⅳ期12例，HCC组与LC组总胆红素、直接胆红素、AFP、Child-Pugh分级比较，差异有统计学意义(P<0.05)(见表1)。

表1 两组临床参数比较

2.2 三组血清Endocan和VEGF表达水平比较三组血清Endocan和VEGF表达水平比较，差异有统计学意义(P<0.05)(见表2)。HCC组血清Endocan和VEGF分别显著高于HC组(Endocan：Z=41.424，P<0.001；VEGF：Z=13.843，P<0.001)。LC组血清Endocan显著高于HC组(Z=26.787，P<0.001)。HCC组血清Endocan(Z=22.079，P<0.001)和VEGF(Z=22.565，P<0.001)高于LC组。

表2 三组血清Endocan和VEGF表达水平比较

2.3 患者血清Endocan和VEGF表达与临床参数相关性HCC组血清Endocan与WBC、PLT、ALT、ALP、总胆红素、直接胆红素、白蛋白、AFP、Child-Pugh分级、肿瘤大小、肿瘤数量、血管癌栓、TNM分期有关(P<0.05)。LC组血清Endocan与ALT、AST、INR、总胆红素及Child-Pugh分级有关(P<0.05)(见表3)。HCC组血清VEGF与WBC、白蛋白、Child-Pugh分级及肿瘤数量有关(P<0.05)。LC组VEGF与这些临床参数均无相关性(P>0.05)(见表4)。

表3 两组血清Endocan表达与临床参数相关性分析(r值/P值)

表4 两组血清VEGF表达与临床参数相关性分析(r值/P值)

2.4 患者血清Endocan和VEGF对HCC的诊断价值ROC分析血清Endocan、VEGF、AFP对HCC的诊断价值(见表5、图1)。血清Endocan对HCC的诊断价值与AFP接近(Z=1.464，P=0.1433)，并优于VEGF(Z=5.137，P<0.001)。血清VEGF对HCC的诊断价值与AFP比较较差(Z=4.227，P<0.001)。

2.5 影响HCC死亡相关风险因素分析随访1年，HCC组21例(20.6%)和LC组11例(12.5%)死亡。Logistic分析影响HCC死亡相关因素发现，AFP(>98 ng/ml)、Endocan(>3 210 pg/ml)、肿瘤大小(>3 cm)是HCC死亡相关风险因素(见表6)。

表5 ROC分析血清Endocan、VEGF和AFP对HCC的诊断价值

图1 ROC分析血清Endocan、VEGF和AFP对HCC的诊断价值

表6 影响HCC死亡相关风险因素的Logistic多因素分析

3 讨论

血管生成是HCC发展的重要机制之一。Endocan和VEGF均在肿瘤血管生成过程中发挥重要作用。研究发现，Endocan和VEGF在多种肿瘤如肺癌、肾癌、胃癌中均高表达，可作为这些肿瘤生物标志物运用于临床[6-7]。研究表明，Endocan和VEGF也可用于HCC早期诊断[8]。本研究发现，HCV感染的HCC患者和仅肝硬化非HCC患者血清Endocan均显著高于健康对照组，提示Endocan可能在肝硬化形成及发展过程中也发挥作用，但具体机制尚不清楚。

本研究结果表明，HCC组和LC组血清Endocan均与Child-Pugh分级具有显著相关性。TOSHIKUNI等[9]研究发现，血清Endocan可能是肝硬化患者的生存预测因子，而且肝硬化患者血清高Endocan水平和高Child-Pugh分级预示肝硬化患者低生存率。这些结果进一步说明血清Endocan与肝硬化有关。此外，HCC组血清Endocan更多与肿瘤大小、肿瘤数量等病灶有关，进一步提示Endocan可能与肿瘤形成及侵袭有关。本研究中血清Endocan与血清VEGF无相关性，但有研究表明，Endocan在肿瘤中过表达且受VEGF的调控，而且在肝癌患者中发现Endocan与微血管密度、血管和静脉侵袭浸润及VEGF表达呈正相关[10]。这可能与肝癌的种类及研究对象种族有关。

除了肝组织活检金标准外，临床上常用AFP作为诊断HCC的生物标志物，但因常出现假阳性或假阴性的AFP结果，使得仅用AFP筛查HCC的结果不可靠。本研究中HCC组AFP显著高于LC组。与本研究结果一致，研究表明HCC与肝硬化患者之间AFP确实具有显著差异[11]。本研究ROC分析发现，血清Endocan对肝硬化、HCC患者的诊断AUC高于AFPAUC，但两组比较差异无统计学意义，这提示血清Endocan对肝硬化HCC患者的诊断价值与AFP一样也较高。研究发现，与肝炎、肝硬化患者及正常对照比较，肝癌患者血清Endocan水平显著升高，但血清Endocan对肝癌的诊断准确度优于AFP[12]。这种结果的差异可能与选择的研究对象及免疫遗传因素有关。本研究中血清VEGF诊断肝硬化、HCC的价值显著低于血清Endocan和AFP。但有研究表明，慢性终末期肝病和HCC患者接受肝移植前血浆VEGF水平可能是是否发生肿瘤血管侵犯及肝移植后存活率的预测因子[13]。这些结果说明血液里VEGF水平对不同种类HCC患者的预测价值不同。

本研究存在局限性。本研究尚未观察到联合Endocan、VEGF、AFP能提升对肝硬化、HCC的诊断价值，这可能受其他因素的干扰。另外，本研究纳入的研究对象较少，今后研究需要纳入更多的研究对象，以增加结果的准确性。

总之，血清Endocan可能也可作为诊断HCC的良好生物标志物，较高血清Endocan水平可作为HCC患者死亡率的可能预测指标。