妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体表达及对妊娠结局的影响

崔佳 郭莹 高伟 王霞 王娜 帖彦清

河北省人民医院1检验科，3护理部抽血室，4老年病二科（石家庄050051）；2河北省秦皇岛市妇幼保健院生殖医学科（河北秦皇岛066000）

目前对于妊娠不良结局的引发机制尚不明确，认为妊娠不良结局的发生与多种因素相关，且对于不良妊娠结局的认识主要集中于血栓形成而导致的子宫胎盘堵塞病理生理原因研究中[1]。目前随着生殖免疫学的发展，人们逐渐发现免疫因素可导致妊娠不良结局的产生，且发生不良妊娠结局的产妇大多伴随着自身免疫失调[2]。研究[3-4]认为由自身免疫反应所引发的妊娠不良结局与抗磷脂抗体具有一定的相关性，目前抗磷脂抗体已经成为自身免疫反应研究的热点。有学者认为，妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子的表达与妊娠合并疾病相关，但并无研究认为其与妊娠不良结局有关，在本文研究中分析妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体表达对妊娠结局的影响，以证实妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子、抗磷脂抗体与妊娠结局的关系，为临床上妊娠不良结局进行预防和控制提供支持。

1 对象与方法

1.1 研究对象收集2014年1月至2017年12月河北省人民医院就诊的产妇作为研究对象，采用酶联免疫吸附法对全部入组产妇测定血清抗心磷脂抗体IgA/G/M和抗β2糖蛋白I抗体IgA/G/M，将血清抗心磷脂抗体IgA/G/M阳性产妇作为对照组，共85例，将血清抗心磷脂抗体IgA/G/M和抗β2糖蛋白I（β2-GP1）抗体IgA/G/M同时阳性作为研究组，共86例。对照组所有产妇均为初产妇，年龄22～44岁，平均（32.12±10.32）岁，孕周6～16周，平均（11.22±5.01）周；观察组所有产妇也均为初产妇，年龄22～43岁，平均（31.11±9.92）岁，孕周6～15周，平均（11.20±5.33）周，所有入组产妇年龄、孕期等一般资料比较差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。排除标准：排除生殖道畸形的产妇；排除患有内分泌疾病的产妇；排除患有遗传性疾病的产妇；排除患有精神障碍、沟通障碍的产妇。本次研究所有产妇及其家属均知情，均签署了知情同意书，且经过我院伦理委员会批准[伦理审批号：（2018）科研伦理审批第（107）号]。

1.2 方法

1.2.1 Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子相对表达量检测取两组产妇产前静脉血3 mL将血浆分离出后在-80℃的环境下保存，使用Ficoll分离液将外周血单核细胞分离出，加入1 mL Trizol，在-80℃的环境下保存，提取RNA，之后对RNA纯度、含量进行检测，使用Takara逆转录试剂盒行逆转录处理后获得cDNA，之后使用Primer 5.0软件对引物序列进行设计，使用RT-PCR方法检测产妇IL-33、ST2、GATA3 mRNA表达量，采用2-△△Ct方法计算出需要检测的IL-33、ST2、GATA3 mRNA表达量。IL-33引物序列：上游：5′-TGACGGTGTTGATGGTAAGATG-3′，下游：5′-ACAGACTGTTCCTTGTTGTTGG-3′；ST2 引物序列：上游：5′-AGATGAGTCACTGGCATACG-3′，下游：5′-GAGAGGCTGGATGTTGTATT-3′；GATA3 引物序列：上游：5′-TTGTGGTGGTCTGTACAGTTC-3′，下游：5′-AGTACAGCTCCGGACTCTTC-3′；β-actin 引物序列：上游：5′-TGGCACCCAGCACAATGAA-3′，下 游 ：5′-CTAAGTTCATAGTCCGCCTAGAAGCA-3′。

1.2.2 妊娠不良结局统计对两组产妇妊娠不良结局发生率进行统计，包括习惯性流产、早产、死胎、胎盘早剥等。

1.2.3 抗磷脂抗体滴度值检测取两组产妇产前静脉血3 mL，在室温环境下静置30 min，之后使用离心，3 000 r/min离心15 min，分离上层血清，在温度为-70℃的环境下保存。使用酶联免疫吸附法检测产妇ACA-IgA、ACA-IgG、ACA-IgM、β2-GP1-IgA、β2-GP1-IgA、β2-GP1-IgM抗体，使用全自动酶标仪定量检测ACA-IgA、ACA-IgG、ACA-IgM、β2-GP1-IgA、β2-GP1-IgG、β2-GP1-IgM抗体滴度值，操作及结果判断均按照试剂盒说明书进行，ACA阳性标准为＞12 RU/mL，抗β2-GP1阳性标准为20 RU/mL。

1.3 统计学方法采用SPSS 20.0统计软件进行分析处理。计量资料采用均数±标准差描述，两组间比较采用独立样本t检验；计数资料比较采用百分率描述，两组间比较采用χ2检验；相关性采用Pearson相关性分析，P＜0.05为具有统计学意义。

2 结果

2.1 两组产妇Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子表达比较如表1所示，研究组产妇Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子IL-33 mRNA、ST2 mRNA、GATA3 mRNA相对表达量均低于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表1 两组产妇Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子相对表达量比较Tab.1 Relative expression of type II intrinsic lymphocyterelated molecules in two groups of parturients ±s

表1 两组产妇Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子相对表达量比较Tab.1 Relative expression of type II intrinsic lymphocyterelated molecules in two groups of parturients ±s

例数85 86组别对照组研究组t值P值IL-33 mRNA 1.03±0.16 0.78±0.01 14.460 0.001 ST2 mRNA 1.02±0.15 0.86±0.03 6.698 0.001 GATA3 mRNA 0.76±0.12 0.35±0.06 28.310 0.001

2.2 两组产妇妊娠结局比较如表2所示，研究组产妇总不良妊娠结局发生率显著高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表2 两组产妇妊娠结局比较Tab.2 Comparison of pregnancy outcomes between two groups 例（%）

2.3 妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体表达与不良妊娠结局的相关性分析妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体表达与不良妊娠结局的相关性采用Pearson相关性分析，结果如表3所示，IL-33与习惯性流产正相关，与早产、死胎、胎盘早剥无关；ST2与习惯性流产、死胎呈正相关，与早产、胎盘早剥无关；GATA3与习惯性流产、早产、死胎、胎盘早剥均呈正相关；ACA-IgA、ACA-IgG、ACA-IgM与习惯性流产、早产、胎盘早剥均呈现为正相关；β2-GP1-IgA、β2-GP1-IgG、β2-GP1-IgM抗体与习惯性流产、早产、死胎、胎盘早剥均呈现为正相关。

3 讨论

从生殖免疫学的观点来看，妊娠的过程为一种特殊的机体免疫状态，而妊娠不良结局的发生与机体免疫异常相关。

目前研究发现，在妊娠不良结局发生后，母体带负电荷的蛋白质和血液中的蛋白质复合后通过免疫机制产生抗磷脂抗体，在正常的情况下机体处于磷脂细胞膜的脂质双层保护中，母婴界面处的磷脂不会被机体的免疫系统所识别[5-6]。目前临床上已经有病理学证据证实，抗心磷脂抗体在不良妊娠过程的发生中，会对前列环素的合成产生抑制作用，进而增加胎盘微血栓形成的几率；抗心磷脂抗体抑制抗凝血蛋白、抗凝血酶Ⅲ，进而对凝血机制产生较为严重的破坏[7-8]。研究[9-11]认为，抗磷脂抗体的实质为与抗磷脂抗体相关一组抗体，其临床表现为动静脉血栓形成，进而成为血栓形成特征的抗体综合征。抗磷脂抗体属于自身免疫性抗体组合，包括抗β2糖蛋白I抗体、抗心磷脂抗体、狼疮样抗凝物[12]。当人体内的抗磷脂抗体呈现为阳性后会发生动静脉血栓，且此类动静脉血栓的种类较多，包括视网膜血栓、深静脉血栓、胎盘血栓、肺栓塞等[13-14]。另外WANG等[15]研究显示，抗磷脂抗体会累及产妇子宫胎盘进而导致胎儿宫内生长受限、子痫前期、流产以及胎盘早剥的发生。基于上述研究，在本文研究中，分析血清抗心磷脂抗体IgA/G/M和抗β2糖蛋白I抗体IgA/G/M阳性和血清抗心磷脂抗体IgA/G/M和抗β2糖蛋白I（β2-GP1）抗体IgA/G/M同时阳性产妇妊娠不良结局，结果显示，抗心磷脂抗体IgA/G/M和抗β2糖蛋白I（β2-GP1）抗体IgA/G/M同时阳性产妇妊娠不良结局发生率较好，此结果说明抗磷脂抗体与产妇妊娠结局相关，与上述WANG等[15]研究结果保持一致。

表3 妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体表达与不良妊娠结局的相关性分析Tab.3 Analysis of the relationship between expression of type II intrinsic lymphocyte-related molecules and anti-phospholipid antibody and adverse pregnancy outcomes±s

表3 妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体表达与不良妊娠结局的相关性分析Tab.3 Analysis of the relationship between expression of type II intrinsic lymphocyte-related molecules and anti-phospholipid antibody and adverse pregnancy outcomes±s

相对表达量 早产 死胎IL-33 mRNA 0.67±0.12 ST2 mRNA 0.68±0.13 GATA3 mRNA 0.51±0.14 ACA-IgA 6.25±0.23 ACA-IgG 3.45±0.36 ACA-IgM 2.96±0.28 β2-GP1-IgA 23.98±3.86 β2-GP1-IgG 19.23±2.25 β2-GP1-IgM 20.12±3.15习惯性流产r=0.312 P=0.006 r=0.202 P=0.003 r=0.358 P=0.012 r=0.215 P=0.009 r=0.369 P=0.006 r=0.458 P=0.002 r=0.256 P=0.001 r=0.415 P=0.000 r=0.316 P=0.002 r=0.042 P=0.086 r=0.025 P=0.076 r=0.236 P=0.001 r=0.582 P=0.030 r=0.435 P=0.041 r=0.526 P=0.020 r=0.247 P=0.006 r=0.316 P=0.001 r=0.225 P=0.004 r=0.425 P=0.254 r=0.326 P=0.003 r=0.427 P=0.000 r=0.215 P=0.001 r=0.162 P=0.008 r=0.036 P=0.003 r=0.321 P=0.032 r=0.215 P=0.005 r=0.123 P=0.002胎盘早剥r=0.135 P=0.068 r=0.268 P=0.968 r=0.315 P=0.003 r=0.128 P=0.016 r=0.425 P=0.008 r=0.216 P=0.023 r=0.124 P=0.024 r=0.248 P=0.009 r=0.414 P=0.000

Ⅱ型固有淋巴细胞在Th2所介导的免疫应答中具有重要的意义[16]。有研究[17]发现，Ⅱ型固有淋巴细胞相关因子GATA3与子痫前期有关，GATA3是一种在1991年HolC等所报道的转录因子，对Th2细胞分化具有转录调节作用，属于一种Th分化所必需的转录因子，且其表达尽在Th2细胞中。IL-33属于IL-1家族中较为重要的成员之一，可介导机体炎症的发生[18]。目前临床上有研究认为，IL-33、ST2参与多种不良妊娠结局的发生，而ST2属于IL-33的特异性受体[19]。在本文研究中，发现与单纯抗心磷脂抗体IgA/G/M呈现为阳性的产妇相比，抗心磷脂抗体IgA/G/M和抗β2糖蛋白I抗体IgA/G/M同时呈现为阳性的产妇Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子IL-33 mRNA、ST2 mRNA、GATA3 mRNA相对表达量显著降低，此结果说明，Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与妊娠不良结局相关，与费倩倩等[20]研究中认为IL-33与复发性流产的发生有关的结果保持一致。在本文研究中对Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子、抗磷脂抗体的表达与不良妊娠结局的相关性进行分析，结果显示，Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子IL-33、ST2、GATA3、ACA-IgA/G/M、β2-GP1-IgA/G/M与不良妊娠结局的发生有关。

综上所述，妊娠期Ⅱ型固有淋巴细胞相关分子与抗磷脂抗体表达与妊娠不良结局具有一定的相关性，早期检测IL-33、ST2、GATA3、ACA-IgA/G/M、β2-GP1-IgA/G/M可对妊娠不良结局进行预防和控制。