蛋黄油对小鼠消化性胃溃疡的促进愈合作用

华苗爽 侯雨佳 仝其根

（1 北京农学院食品科学与工程学院 北京 102206

2 食品质量与安全北京实验室 北京 102206

3 蛋品安全生产与加工北京市工程研究中心 北京 100094）

胃溃疡（Gastric ulcer，GU）是消化系统常见的溃疡性疾病，指在某种情况下胃酸聚集破坏胃黏膜而造成深达黏膜下层的黏膜缺损，以胃、十二指肠最为常见，其临床表现为胃痛、食欲不振等症状。有研究显示，大约有10%的人在其一生中患过此病[1]。目前，医学上还没有完全阐明消化性胃溃疡的发病机制，然而，一般研究认为可能是由于胃酸及胃蛋白酶自身消化而导致溃疡的形成[2]。

蛋黄油（Egg oil）为雉科动物家鸡鲜卵的卵黄提取物[3]，别名鸡子油、凤凰油。蛋黄油既可食用，又有药用价值。常见的蛋黄油药用价值有镇痛，促进创面愈合，缓解疮痈肿毒及溃疡等。药理研究较多的是蛋黄卵磷脂，认为卵磷脂可以修复线粒体，参与机体代谢，可抑制动脉粥样硬化的产生，改善动脉壁的组织结构[4]。蛋黄油含有大量的不饱和脂肪酸[5]，可被人体大量消化吸收，减少胃酸分泌，防止发生胃炎及十二指肠溃疡等疾病[6]。现有对蛋黄油治疗胃溃疡的研究很少，例如：关于卵黄油治疗皮肤溃疡及湿疹的介绍[7]。本研究将探讨蛋黄油对乙酸致慢性胃溃疡的促进愈合作用，为蛋黄油食品的研发提供一定的理论基础。

1 试验材料

1.1 蛋黄粉

本试验所用蛋黄粉，北京市禽蛋公司金健力蛋制品厂。

1.2 试剂

冰乙酸（级别：分析纯，批号：20080103，规格：500mL/瓶）、无水乙醇（分析纯，批号：20150709，规格：500mL/瓶），北京化工厂；75%乙醇、生理盐水、10%中性甲醛组织固定溶液（规格：500mL/瓶），上海威奥生物科技有限公司；羧甲基纤维素钠（CMC-Na，批号 C104984），上海阿拉丁生化科技股份有限公司；西咪替丁胶囊（批准文号：国药准字H44023010），广东台城制药股份有限公司。

1.3 仪器与设备

旋转蒸发仪，上海况胜实业发展有限公司；BS223S电子天平（精密度0.001 g），北京赛多利斯仪器系统有限公司；高压灭菌锅，山东博科科学仪器有限公司；-86℃冰箱，无锡冠亚恒温制冷技术有限公司；特马CD710游标卡尺，东莞市特马电子有限公司。

1.4 实验动物

雄性 CD-1（ICR）小鼠，6周龄 SPF 级，体重（35±2）g。动物、基础饲料、垫料，北京维通利华实验动物技术有限公司。动物合格证号：SCXK（京）2016-0011。实验期间保持自由饮水和进食，饲养环境温度（23±1）℃，湿度（55±5）%，昼夜 12 h 交替，适应性喂养7 d。

2 试验方法

2.1 蛋黄油制备

以蛋黄粉∶无水乙醇=1∶5的萃取比在50℃下恒温水浴萃取1 h，真空抽滤，滤出滤液，再在70℃下旋转蒸发，直至乙醇蒸发完全，析出蛋黄油，出油率为28.5%。

2.2 小鼠慢性胃溃疡模型建立

所有小鼠正常饲养7 d，灌胃前禁食12 h，灌胃后0.5 h后给食，再连续灌胃0.2mL 7.5%乙酸溶液3 d，0.2mL 6%乙酸溶液2 d，以完成造模。

2.3 动物分组与给药

小鼠适应饲养1周后随机分为5组，每组8只，分别为蛋黄油高剂量组（蛋黄油∶蒸馏水=3∶1）蛋黄油低剂量组（蛋黄油∶蒸馏水=3∶5）、阳性药组、正常对照组、模型组。

各给药组按10mL/kg剂量灌胃给药，蛋黄油密度为0.93 g/mL。正常对照组灌胃等体积的0.5%CMC-Na溶液。在造模结束后，阳性药组每天灌胃西咪替丁 1 次[8]（0.1 g/kg，0.5%CMC-Na 溶液配制），每天1次，连续5 d。模型组在造模结束后次日处死取胃观察。

表1 动物分组及给药情况（n=8）Table1 Animal grouping and drug administration（n=8）

2.4 取材

沿腹部剑突中间剪开，暴露出腹腔，结扎幽门及贲门并取出胃体，放入10%中性甲醛组织固定溶液中固定10min。沿胃大弯剪开胃壁，用生理盐水冲洗胃体并观察其形态学改变。

2.5 小鼠体重的记录

每次禁食前称量小鼠体重并记录。

2.6 胃窦大体观察

处死并解剖小鼠，分离出小鼠胃体，沿胃大弯剪开胃壁，观察小鼠胃窦情况。

2.7 溃疡面积、溃疡指数及溃疡抑制率的计算

用游标卡尺测量溃疡长径和短径，计算溃疡面积，溃疡面积计算公式S=d1×d2×π/4，式中，π——圆周率；d1——通过溃疡中心的最大纵径，mm；d2——通过溃疡中心的最大横径，mm[9]。试验数据以±s表示。

溃疡评分标准如下：正常胃，0；红色，0.5；点状溃疡，1.0；出血条痕，1.5；深度溃疡，2.0；穿孔，3.0；溃疡指数（Ulcer index，UI） 计算如下：UI=（UN+US+UP）×10-1，式中，UN，US，UP——每只小鼠平均溃疡数目、严重溃疡得分的平均数和胃溃疡小鼠百分比[10]。计算胃溃疡抑制率=（模型组胃溃疡面积-其余组胃溃疡面积）/模型组胃溃疡面积×100%[11]。

2.8 血清及胃组织生化指标检测

造模结束后次日，模型组小鼠摘眼球取血并脱颈处死。其余组在实验结束后，摘除小鼠眼球取血，血液静置 0.5 h，3 000 r/min离心 10min（4℃）取上清液，-86℃冰箱保存备用，同时称取胃组织并剪碎，加入预冷的生理盐水，冰浴中进行组织匀浆。匀浆后以3 000 r/min离心10min（4℃）取上清液，放入-86℃保存备用，送至北京艾普希隆生物科技有限公司检测。

2.9 组织病理学评价

剪取包括溃疡部分的胃组织约（1.0±0.5）cm，置于中性福尔马林中固定24 h后，送至北京艾普希隆生物科技有限公司检测。

2.10 统计学结果

统计分析采用SPSS16.0统计软件，组间比较采用单因素方差分析的方法。P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果与分析

利用2.3节试验设计，以小鼠体重、胃窦表面观察、溃疡面积及溃疡指数、SOD及MDA、胃窦黏膜腺体状态为评价指标，结果如下。

3.1 小鼠体重变化

小鼠在灌胃前5 d，即造模期间，各组体重逐渐下降。从灌胃第6天开始，即开始给予西咪替丁、蛋黄油。随着时间延长，蛋黄油高剂量组的体重增加最快（图1）。

3.2 胃窦大体观察

正常小鼠胃体，颜色呈嫩粉色且褶皱清晰（图2a）。模型组小鼠在造模结束后，取胃观察，胃体可见黏膜糜烂、出血，有清晰溃疡部分，一般呈左右对称（图2b）。阳性药组及蛋黄油高、低剂量阻，小鼠胃体未见溃疡及出血部分，褶皱消失，颜色偏暗，胃体组织较完整（见图2c、2d、2e）。

图2 各组小鼠胃部解剖图Fig.2 Cutaway views of stomach of mice

3.3 溃疡面积及溃疡指数

由表2可见，与模型组相比，阳性药组以及蛋黄油高、低剂量组的溃疡面积、溃疡指数均有极显著性差异。蛋黄油低剂量组溃疡面积与阳性药组相比差异显著，并且蛋黄油低剂量组溃疡面积最大。

3.4 血清及胃组织生化指标检测

与正常对照组相比，除模型组的组织SOD及MDA有显著性差异，其余组与其相比均无显著性差异。与模型组比，除蛋黄油低剂量组的组织SOD与其无显著性差异，其余均有差异。与阳性药组相比，仅蛋黄油低剂量阻与其有显著性差异。结果见表3。

表2 各组小鼠溃疡面积及指数的比较（±s）Table2 Comparison of ulcer area and index in each group（±s）

表2 各组小鼠溃疡面积及指数的比较（±s）Table2 Comparison of ulcer area and index in each group（±s）

注：与模型组比较 *.P＜0.05，**.P＜0.01；与阳性药组比较 # .P＜0.05，## .P＜0.01。

组别 剂量/mL 溃疡面积/mm2 溃疡指数 溃疡抑制率/%正常对照组 0.4 0 0 0乙酸模型组 0.2 19.22±2.19 4 /阳性药组 0.4 1.40±0** 0.75** 92.71蛋黄油高剂量组 0.4 2.27±0.34** 1** 88.18蛋黄油低剂量组 0.4 4.7±0.05**# 1** 75.54

表3 各组小鼠组织SOD及MDA的比较（±s）Table3 Comparison of tissue SOD and MDA in groups of mice（±s）

表3 各组小鼠组织SOD及MDA的比较（±s）Table3 Comparison of tissue SOD and MDA in groups of mice（±s）

注：a.与正常对照组比；b.与模型组比；c.与阳性药组比；d.与蛋黄油高剂量组比。

组别组织SOD/U·mg-1 组织MDA/nmol·mg-1 正常对照组 10.75±0.90 0.43±0.08模型组 9.02±0.78a 0.58±0.05a 阳性药组 11.63±1.31b 0.37±0.05b 蛋黄油高剂量组 10.99±1.50b 0.42±0.04b 蛋黄油低剂量组 9.69±0.49cd 0.49±0.04bcd

与正常对照组比，蛋黄油高、低剂量组血液SOD及MDA均无显著性差异。与阳性药组相比，蛋黄油高、低剂量组血液SOD均有显著性差异。蛋黄油高、低剂量组血液SOD之间相比，有显著性差异，高剂量组远高于低剂量组。结果见表4。

表4 各组小鼠血液SOD及MDA的比较（±s）Table4 Comparison of blood SOD and MDA in groups of mice（±s）

表4 各组小鼠血液SOD及MDA的比较（±s）Table4 Comparison of blood SOD and MDA in groups of mice（±s）

注：a.与正常对照组比；b.与模型组比；c.与阳性药组比；d.与蛋黄油高剂量组比。

组别 血液SOD/U·mg-1 血液MDA/nmol·mg-1 正常对照组 77.98±6.68 4.11±1.09模型组 68.54±5.37a 7.20±1.69a 阳性药组 89.68±5.05ab 2.72±0.75b 蛋黄油高剂量组 83.23±4.55bc 3.31±1.02b 蛋黄油低剂量组 74.5±4.13bcd 3.78±1.79b

与正常对照组相比，蛋黄油高剂量组的组织ET-1及组织TNF-α无显著性差异，蛋黄油高剂量组的组织NO有显著性差异，低于正常组；蛋黄油低剂量组的组织NO与正常对照组无显著性差异。与模型组比，除蛋黄油低剂量组的组织ET-1无显著性差异，其余组均有显著性差异。与蛋黄油高剂量组比，蛋黄油低剂量组的组织ET-1及TNF-α有显著性差异。结果见表5。

表5 各组小鼠组织ET-1、NO及TNF-α的比较（±s）Table5 Comparison of tissue ET-1，NO and TNF-α in groups of mice（±s）

表5 各组小鼠组织ET-1、NO及TNF-α的比较（±s）Table5 Comparison of tissue ET-1，NO and TNF-α in groups of mice（±s）

注：a.与正常对照组比；b.与模型组比；c.与阳性药组比；d.与蛋黄油高剂量组比。

组别组织 ET-1/pg·mg-1 组织 NO/μmol·g-1 组织 TNF-α/pg·mg-1 正常对照组 7.76±0.74 5.20±0.81 4.64±0.72模型组 10.60±0.62a 3.14±0.60a 9.88±0.99a 阳性药组 6.43±1.41ab 4.99±1.14b 3.31±0.39ab 蛋黄油高剂量组 7.44±1.52b 6.83±1.57abc 4.98±0.87bc 蛋黄油低剂量组 10.25±1.06acd 6.20±0.85bc 8.65±1.04abcd

3.5 组织病理学评价

图3a为正常胃组织，胃窦黏膜腺体结构完整，未见炎性细胞浸润。模型组胃窦黏膜腺体结构不完整，并可见大量炎性细胞聚集（见图3b）。阳性药组及蛋黄油高剂量组胃窦黏膜腺形态较规则，结构较完整，未见炎性细胞聚集（见图3c、3d）。蛋黄油低剂量组粘膜较规则，有少量炎性细胞出现（见图3e）。

图3 各组小鼠胃组织病理形态的影响（HE，×100）Fig.3 Effects of gastric tissue histopathology of mice（HE，×100）

4 讨论与结论

MDA是氧自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸后所形成的脂质过氧化物，MDA可引起蛋白质变性，损害细胞及细胞膜，直接反映细胞损伤程度[12-13]。SOD是生物体内氧自由基清除系统的重要防线，有修复细胞功能的作用[14]。SOD含量水平的高低反映了机体清除自由基能力的大小，酶活性越低，炎症越趋于严重[15]。内源性NO能够改善微循环血液量，使胃肠道血管扩张，加强胃黏膜屏障，促进黏液分泌，从而有效保护胃黏膜[16]。血管内皮功能的调节对胃黏膜功能的改进有积极作用，其中NO和ET-1两者的舒血管作用及缩血管作用共同构成了胃黏膜局部血流动力学的动态平衡[17]。TNF-α可促进白细胞尤其是中性粒细胞的活化、趋化和黏附，在机体中起到抗肿瘤及免疫调节作用，同时参与炎症演变和疾病发生发展的过程[18]。

综上所述，黄油高、中剂量组对小鼠消化性胃溃疡有促进愈合的作用，且高剂量组优于低剂量组。蛋黄油能够显著减少乙酸性胃溃疡的溃疡面积、溃疡评分以及TNF-α含量，增加血液及胃组织中SOD活性，降低MDA含量；增加NO含量，降低ET-1含量，维持SOD-MDA、NO-ET-1动态平衡，减轻胃黏膜损伤，增强胃黏膜的防御功能，从多方面、多角度预防溃疡形成。