RP-HPLC法测定植物油中苯并(a)芘残留量

2020-01-13邹沫君

食品工业 2019年12期

邹沫君

乐山市食品药品检验检测中心（乐山 614000）

苯并(a)芘是一种常见的高活性间接致癌物和突变原，必须经细胞微粒体中的混合功能氧化酶激活才具有致癌性[1]。食品中苯并芘化合物主要来源于：熏烤或高温烹调时使食品污染苯并芘；食品加工过程中被污染，如沥青污染、包转材料污染、环境污染等[2]。可通过改进食品加工方法，如熏制和烘烤食品时，改进燃烧过程，避免食品直接接触炭火，改进熏烟工艺等措施降低污染[3]。试验采用简单二元流动相，以等度洗脱提高分离效能，试样经正己烷提取，Cleanert BAP净化，浓缩至干后经乙腈复溶，反相液相色谱分离，荧光检测器检测，建立了测定植物油中苯并芘的品质控制分析方法，并对市面上20个不同厂家植物油中苯并芘残留量进行比较，旨在更好地控制植物油的内在品质，保证食用植物油的安全、优质。

1 仪器与材料

1.1 仪器与设备

DGU-20A 3R高效液相色谱仪（带RF-20A荧光检测器，日本岛津公司）；FA124电子天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TG-16医用离心机（四川蜀科仪器有限公司）；XH-D旋涡混合器（上海皓庄仪器有限公司）；JHD-002干式氮吹仪（上海极恒实业有限公司）；KQ-700型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Cleanert BAP（500 mg/6 mL 30/pkg，Agela Technologies）。

1.2 材料与试剂

20批试样（市售，包括10批次压榨工艺植物油、10批次浸出工艺植物油，每批试样均来自不同的生产厂家）；苯并(a)芘标准品（100 μ g/mL in Acetonitrile，98.8%，1 mL，Lot. 170317，0～8 ℃ and dark，BePure）；乙腈、二氯甲烷、正己烷、甲醇、无水乙醇均为色谱纯（北京百灵威科技有限公司）；超纯水（电阻率=18.2 MΩ·cm）。

2 方法与结果

2.1 色谱分离系统的确定

2.1.1 对照品储备液的制备

精密吸取0.05 mL苯并(a)芘标准品，用乙腈定容到250 mL，避光保存在0～5 ℃的冰箱中，保存期1个月。

2.1.2 供试品溶液的制备

称取0.4 g（精确到0.001 g）各厂家试样，加入5 mL正己烷，漩涡混合0.5 min，在40 ℃下超声提取10 min，以4 000 r/min离心5 min，转移出上清液。加入5 mL正己烷重复提取1次。合并上清液，待净化。将待净化液转移进Cleanert BAP（依次用5 mL二氯甲烷及5 mL正己烷活化柱子），待液面降至柱床时，用6 mL正己烷淋洗柱子，弃去流出液。用6 mL二氯甲烷洗脱并收集净化液到试管中。将净化液在40 ℃下氮气吹干，准确吸取2 mL乙腈，涡旋复溶0.5 min，过微孔滤膜后供液相色谱测定。同时做试样空白试验。

2.1.3 色谱条件和系统适应性试验

采用Thermo AcclaimTM120 C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5.0 μm）；流动相，乙腈-水（90︰10，V/V）；荧光检测器：激发波长384 nm，发射波长406 nm；流速1.0 mL/min；柱温35 ℃；进样量20 μ L。

取2.1.1的对照品溶液，在2.1.3的色谱条件下进行分析。苯并(a)芘拖尾因子为0.96，理论塔板数（USP）为19 692。

2.1.4 方法专属性试验

苯并(a)芘标准溶液、阴性试样溶液及典型阳性试样溶液色谱图见图1～图3。结果表明，方法专属性好，选择性高。

2.2 分析方法验证

2.2.1 线性关系、检出限和定量限考察

分别精密吸取0，0.10，0.50，1.00，2.00，5.00，10.00和20.00 μL 2.1.1的对照品溶液，注入液相色谱仪，在2.1.3的条件下测定，得到峰面积与质量浓度的线性关系，拟合回归方程式，确定相关系数、最低检出限（S/N=3）和定量限（S/N=10），详见表1。结果表明，苯并(a)芘在0～19.76 ng/mL范围内线性关系良好，完全能满足植物油中其残留量的测定。

2.2.2 精密度考察

取2.2.1的苯并(a)芘线性第4点对照品溶液，按2.1.3的色谱条件重复进样6次，记录色谱图。以峰面积计算RSD（n=6），为0.22%，表明仪器精密度良好。

2.2.3 方法重复性考察

取编号为1-1植物油试样，按2.1.2的方法制备6份供试品溶液进行色谱分析，计算残留量。苯并(a)芘残留量RSD值为0.37%，表明该方法重复性良好。

2.2.4 溶液稳定性考察

取制备好的编号为1-1植物油供试品溶液，按2.1.3的仪器条件分别于0，4，8，12，16和24 h进样测定，记录色谱峰面积，计算苯并(a)芘RSD（n=6），为0.41%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.2.5 耐用性考察

取2.2.1的线性第4点对照品溶液，分别考察采用不同柱温（34，35和36 ℃），以及不同流速（0.9，1.0和1.1 mL/min）进行测定时仪器色谱行为的变化。以峰面积计，不同柱温条件下苯并(a)芘RSD（n=3）为0.58%；不同流速条件下苯并(a)芘RSD（n=3）为0.71%。表明在实际应用过程中色谱条件有微小变化时，植物油中苯并(a)芘残留量测定条件较宽，测定结果不受影响，系统具有较好的耐用性。

2.2.6 回收率考察

精密称取已测定含量的试样（编号1-1），平行9份，置于50 mL离心管中，加入适量苯并(a)芘对照品储备液，后按2.1.2和2.1.3的条件操作，结果见表2。苯并(a)芘的平均回收率为100.25%，RSD为0.62%，表明该方法具有良好回收率，准确度符合要求。

图1 苯并(a)芘标准色谱图

图2 阴性试样色谱图

图3 典型阳性试样色谱图

表1 回归方程、相关系数、最低检出限、定量限

表2 回收率试验结果

2.3 样品含量测定

取20批不同厂家的植物油试样，各3份，按2.1.2的方法制备供试品溶液，在2.1.3的色谱条件下测定，采用外标法以峰面积计算含量，结果见表3。

表3 试样含量测定结果（n=3）

3 讨论

3.1 提取溶剂的选择

参考文献[4-6]苯并(a)芘残留量测定方法中供试品溶液的制备方法，考察正己烷、乙腈、甲醇、无水乙醇对苯并(a)芘提取能力的影响，发现分2次用正己烷超声处理10 min，可将样品提取完全。

3.2 流动相的选择

经查阅参考文献[7-9]，最终选择乙腈-水溶液（90+10）等度洗脱，可有效缩短分析时间，保证峰形良好，适用于苯并(a)芘的大批量检测和应急检测。

3.3 含量分析

测定了20个不同生产厂家的试样，苯并(a)芘含量为0.214 7～2.883 6 μg/kg，测定结果均符合GB 2762—2017《食品安全国家标准食品中污染物限量》[10]。通过比较各组分含量测定结果，发现不同厂家间存在明显差异，其原因可能与原辅料的选取和生产工艺的控制有关。因此，食品生产者应严把原辅料进厂关，全面规范并提高生产工艺关键控制点及品质标准，杜绝勾兑现象，确保食品的安全、健康，从而更好地维护消费者舌尖上的安全。