呼吸道分泌物真菌涂片检查的临床准确性分析

张立群

（辽宁省抚顺市矿务局总医院检验科，辽宁 抚顺 113008）

近些年，随着抗生素的滥用，导致菌群失调的情况越来越严重，真菌感染的病例逐渐增多，尤以肺部感染、呼吸道感染最为常见。真菌感染患者缺乏特异性临床表现，因此诊断起来十分困难。当前关于真菌感染的病原学诊断主要采用呼吸道分泌物直接涂片法和真菌半定量培养法进行检查。笔者旨在探讨呼吸道分泌物真菌涂片检查的临床准确性，以期为真菌的检出提供指导参考依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象：选择2013年1月至2017年12月本院收治的644例非呼吸道感染患者作为研究对象。

1.2 方法：采集研究对象的呼吸道分泌物（口咽拭子、痰液）标本分别进行真菌直接涂片法和真菌半定量培养法检查。（1）真菌直接涂片法：根据《全国临床检验操作规程》的相关规定对标本质量进行判定，根据“7级法”对涂片片检验结果进行记录和报告：①真菌菌丝孢子全片未见计为（-）；②100个视野＜3个计为极少量；③100个视野3～9个计为少量；④10个视野1～9个计为（+）；⑤每视野1～9个计为（++）；⑥每视野10～99个计为（+++）；⑦每视野≥100个计为（++++）。（2）真菌半定量培养法：选取源于病灶的新鲜的脓血性块状胶冻状呼吸道分泌物，分区划线接种于TTC沙保罗平板、巧克力平板和血平板各1个，并直接涂片1张。将巧克力平板置于烛缸内，其他平板置于其他普通孵箱内，在35 ℃孵育48 h，然后观察各菌落的形态，挑取各菌落于第一区进行混合涂片，涂片后进行革兰染色，在油镜辅助下检查。根据“12级法”对细菌培养结果进行记录和报告：三个平板均未见细菌菌落生长计为（-）；细菌仅于血琼脂、巧克力、TTC沙保罗三种平板中的一种生长，或非计数区内可见但计数区内不可见，或计算各种菌落共计100个视野中某种细菌菌落仅出现1～4个计为少量（＜0.1）；100个视野中某种细菌菌落5～14个计为0.1；100个视野中某种细菌菌落15～24个计为0.2；100个视野中某种细菌菌落25～34个计为0.3；余者类推；纯培养计为1.0。

2 结果

真菌直接涂片法和真菌半定量培养法的真菌检出率分别为0.31%（2/644）、4.66%（30/644），真菌检出率比较，P＜0.05。

3 讨论

大多学者认为[1]，除新型隐球菌外，存在于呼吸道的酵母菌一般均可看作是正常菌群，认为需连续3次或3次以上发现同一酵母菌，方可诊断为真菌感染。笔者认为，这种诊断方式虽具有一定的可靠性，但不利于真菌感染的早期诊断，且会造成检查费用的浪费，增加了患者的经济负担。同时也有学者认为[2]，仅需涂片或培养结果发现真菌即可确诊，但笔者认为这种诊断方式存在一定的缺陷，有很多文献报道，健康人群亦可携带真菌，有研究显示[3]，正常人群口腔酵母菌携带率约为2%～37%。本研究结果显示，真菌直接涂片法和真菌半定量培养法的真菌检出率分别为0.31%（2/644）、4.66%（30/644），结果显示，不管是真菌直接涂片法还是真菌半定量培养法，其真菌检出率均较低，与文献中将真菌认为是“正常菌群”的“过路菌”的观点是一致的。笔者认为，机体在正常状态下，呼吸道处于无菌状态，但自然咳吐出来的痰液标本会在一定程度上受到口咽部分泌物的污染，若在标本采集过程中能做达到A级、B级质量标准，而痰液标本行涂阳或真菌培阳检查结果显示阳性时，在排除误判前提下，不应仅仅看作为正常携带，而应看作是亚临床或临床真菌隐性感染。

笔者体会，对于存在呼吸道感染体征及临床症状的患者，应及早采集呼吸道分泌物行细菌直接涂片法和半定量培养法检查；同时，应尽量确保采集标本的新鲜及不受污染，若首次涂片检出真菌量≥少量或培养检出真菌≥0.1，应诊断为真菌感染；若首次涂片检出真菌极少量或培养检出真菌少量，应高度怀疑为真菌感染，并注意密切观察，并定期重复行细菌学检验，若复检结果显示真菌数量有所增加或仍为阳性则可确诊；若首次涂片和培养结果结果均表现为阴性，可暂不考虑真菌感染。需要注意的是，为确保采集标本的质量，应不断探索避免从下呼吸道采集标本污染的标本采集方法；对于“自然咳出”痰液标本的采集时，注意应由医务人员当面指导以正确的方法进行采集，从而有效确保标本的质量。

综上所述，呼吸道分泌物真菌直接涂片法的真菌检出率低于真菌半定量培养法，在临床实践中，应同时进行真菌直接涂片法和真菌半定量培养法检查，以提高诊断准确性。