T-SPOT.TB与分枝杆菌改良罗氏固体培养法在肺结核诊断中的价值比较

杨丰

(新蔡县人民医院 检验科，河南 驻马店 463500)

肺结核是一种严重危害人类健康的慢性传染性疾病，若不及时治疗，可导致胸膜塌陷或纵隔移位，甚至造成患者死亡[1]。若及时治疗，多数肺结核患者可痊愈。常用于诊断肺结核的方式包括组织病理检查、抗结核抗体检测、病原学检查、结核菌素试验等，但不同方式的诊断结果存在一定差异[2]。基于此，本研究比较结核感染T淋巴细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)与分枝杆菌改良罗氏固体培养法在肺结核诊断中的价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2017年1月至2018年1月于新蔡县人民医院就诊的80例疑似肺结核患者为研究对象。其中男52例，女28例；年龄18～79岁，平均(55.24±8.24)岁；体质量指数18.2～25.3 kg·m-2，平均(21.25±1.21)kg·m-2。

1.2 入选标准纳入标准：(1)符合《肺结核诊断和治疗指南》[3]中的诊断标准；(2)伴有咯血、血痰、咳痰、咳嗽等症状；(3)经肺部X线检查显示存在阴影或占位性病变。排除标准：(1)生命体征不稳定；(2)存在严重心脑血管系统、免疫系统疾病；(3)存在恶性肿瘤；(4)精神障碍。

1.3 检查方法

1.3.1T-SPOT.TB 应用T-SPOT.TB试剂(英国Oxford ImmunotecLtd)与核细胞分离管(BD公司)进行操作。采集4 mL外周静脉血，进行肝素抗凝，对外周血单个核细胞进行分离，并将其浓度调整为2×106mL-1左右。首先在96孔板(已包被抗γ-干扰素)上分别加入50 μL对照物，其次分别加入10 kD培养滤过蛋白(CFP-10)肽段库刺激原与50 μL结核特异性抗原6 kD早期分泌靶向抗原(ESAT-6)，最后加入外周血单个核细胞悬液至每孔，置于体积分数为5%的CO2培养箱(37 ℃)进行温育16～20 h。进行磷酸缓冲盐溶液洗脱处理，并加入碱性磷酸酶标记的γ-干扰素抗体，进行2～8 ℃温育处理2 h，加入显色底物BCIP/NBTPLUS并静置7 min。待磷酸缓冲盐溶液终止反应，阅读及统计斑点。阴性对照孔斑点数大于6个且检测孔斑点数大于阴性对照孔斑点数的2倍或者阴性对照孔斑点数小于5个且检测孔斑点数减去阴性对照孔斑点数大于6个时判定为阳性，否则为阴性。

1.3.2分枝杆菌改良罗氏固体培养法 应用酸性改良罗氏培养基(珠海贝索公司)进行操作。将0.1 mL经过消化处理的痰液接种在酸性改良罗氏培养基斜面，温育。记录菌落的生长和污染状况。出现生长菌落者，经抗酸染色证实可报告快速生长抗酸杆菌。若8周内无生长菌落出现，则报告阴性结果。对培养为阳性者应用对硝基苯甲酸固体培养法进行菌种初步鉴定，确定为结核复合群。

1.4 统计学方法采用SPSS 23.0统计软件处理数据。定性资料以率(%)表示，组间比较采用χ2检验；以分枝杆菌改良罗氏固体培养法为金标准，采用Kappa一致性检验分析T-SPOT.TB检查结果与金标准的一致性，Kappa≥0.74提示一致性好，0.40～<0.74一致性一般，<0.40一致性差。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 分枝杆菌改良罗氏固体培养法诊断结果80例疑似肺结核患者中，分枝杆菌改良罗氏固体培养法检测活动性结核病显示41例为阳性，39例为阴性。

2.2 T-SPOT.TB诊断结果80例疑似肺结核患者中，T-SPOT.TB检测结核分枝杆菌感染显示46例为阳性，34例为阴性。

2.3 一致性T-SPOT.TB与分枝杆菌改良罗氏固体培养法的一致性Kappa值为0.763，一致性良好。

3 讨论

肺结核是由结核分枝杆菌感染导致的慢性传染病。肺结核患者症状和体征不具有典型性且部分患者无明显症状。目前，临床诊断肺结核的主要手段为细菌学实验室检查，并将临床表现、胸部影像学等作为辅助手段进行综合性诊断。细菌学实验室检查包括固体培养实验与涂片镜检。因涂片镜检的检出率较低，固体培养实验耗时较长，无法得到早期准确报告，造成肺结核诊断较多依赖影像学检查，导致结核病初诊患者中有病原学依据的比例降低[4]。T-SPOT.TB应用结核分枝杆菌特异性抗原技术，在肺结核诊断中不受其他非结核分枝杆菌感染的影响[5]。T-SPOT.TB是γ干扰素释放试验的一种方法，以酶联免疫斑点技术等为基础，通过存在结核效应的T淋巴细胞进行判断。由于抗凝血标本容易获得，因此T-SPOT.TB检测速度较快。本研究结果显示：分枝杆菌改良罗氏固体培养法检测活动性结核病显示41例为阳性，39例为阴性；T-SPOT.TB检测结核分枝杆菌感染显示46例为阳性，34例为阴性。T-SPOT.TB与分枝杆菌改良罗氏固体培养法的一致性Kappa值为0.763，一致性良好。这提示T-SPOT.TB有助于检测结核分枝杆菌感染。分析其原因可能为：T-SPOT.TB可有效检测结核分枝杆菌感染，但人体感染结核分枝杆菌后并非绝对患病，而分枝杆菌改良罗氏固体培养法可通过培养阳性与菌型鉴定诊断肺结核，因而T-SPOT.TB检测阳性率高于分枝杆菌改良罗氏固体培养法。王新宁等[6]研究显示，以临床确诊肺结核为金标准，改良罗氏固体培养与T-SPOT.TB在肺结核诊断中的阳性检出率均为85.5%，无明显差异。

综上所述，T-SPOT.TB有助于检测结核分枝杆菌感染，从而辅助指导肺结核的诊断。