MEK通路抑制剂对人胰腺癌细胞生长及细胞周期相关抑癌基因表达

吴小红

（宜兴市人民医院，江苏 宜兴 214200）

胰腺癌是临床常见恶性肿瘤病症，近年来随着国民生活方式的转变和生活节奏的加快，国内胰腺癌发病率呈不断升高趋势[1]。胰腺癌患者病情隐匿，缺乏典型症状，大多数病例在发病时病情已发展成晚期，生存率较低[2]。本文就细胞外信号调节激酶信号通路（MEK）抑制剂对人胰腺癌细胞生长及细胞周期相关抑癌基因表达的影响，旨在为胰腺癌的临床治疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

中科院上海细胞生物学研究所提供的人胰腺癌PANC1、CFPAC1细胞系；美国Sigma公司提供的MEK通路抑制剂PD98059、DMSO；BIOBASE酶标仪；赛默飞Attune NxT流式细胞仪；BiO-Rad公司提供的无血清RPMI1640培养基；BIO-RAD TC20自动细胞计数器。

1.2 方法

通过培养人胰腺癌PANC1、CFPAC1细胞系，用MEK通路抑制剂PD98059处理（加入浓度50 µmol/LPD98059）作为A组，用DMSO处理（加入浓度50 µmol/LDMSO）作为B组。培养后1/3/6 d随机取三孔，使用细胞计数器完成细胞数检测。取对数生长期细胞，使用培养基培养24 h以同步化，比较两组干预24 h后的细胞周期，收集两组细胞，制作为单细胞悬液，取2 ml悬液，固定处理后去乙醇后孵育，染色后使用流式细胞仪检测细胞周期，重复3次。取干预24 h的两组细胞，使用Trizol法完成细胞总RNA提取，逆转录为cDNA，使用实时荧光定量PCR测定p16INK4a、P21WAFl、P27K1PlmRNA表达。

1.3 统计学方法

将数据录至SPSS 23.0，以x2检验定性资料（%、n），以t检验定量资料±s，P小于0.05，提示有差异。

2 结 果

2.1 人胰腺癌细胞的生长抑制情况

根据检测结果可知两组使用的药物对人胰腺癌细胞的生长抑制效果，不同细胞系的细胞数如下，PANC1：1 d：A组为（17.37±3.83）×105/ml，B组为（16.42±3.17）×105/ml，t=1.351，P=0.090；3 d：A组为（1 8.4 7±2.3 8）×1 0 5/m l，B组为（25.53±2.29）×105/ml，t=15.115，P=0.000；6 d：A组为（1 9.3 6±2.2 9）×1 0 5/m l，B组为（63.16±6.13）×105/ml，t=47.329，P=0.000。CFPAC1：1 d：A组为（18.50±3.22）×105/ml，B组为（20.02±2.23）×105/ml，t=2.744，P=0.004；3 d：A组为（2 5.5 2±3.2 4）×1 0 5/m l，B组为（42.53±3.15）×105/ml，t=26.617，P=0.000；6 d：A组为（4 1.5 3±3.7 2）×1 0 5/m l，B组为（120.54±8.69）×105/ml，t=59.103，P=0.000。

2.2 胰腺癌细胞周期分布对比

不同细胞系的细胞周期分布如下：PANC1：G0/G1期：A组为（72.49±1.57）%，B组为（56.53±1.69）%，t=48.924，P=0.000；S期：A组为（5.14±1.10）%，B组为（14.32±1.31）%，t=37.947，P=0.000；G2/M期：A组为（24.83±3.38）%，B组为（25.16±1.42）%，t=0.636，P=0.263。CFPAC1：G0/G1期：A组为（80.25±1.63）%，B组为（68.22±1.74）%，t=35.678，P=0.000；S期：A组为（6.93±1.16）%，B组为（13.47±1.32）%，t=26.316，P=0.000；G2/M期：A组为（13.26±3.24）%，B组为（14.01±1.34）%，t=1.513，P=0.067。

2.3 A组经MEK通路抑制剂干预后抑癌基因mRNA表达变化

根据检测结果可知A组不同细胞系经MEK通路抑制剂干预后抑癌基因mRNA表达：PANC1：p16INK4amRNA表达为（5.3 2±0.4 3），P 2 1 WA F l m R N A表达为（3.12±0.34），P27K1PlmRNA表达为（4.21±0.29）；CFPAC1：p16INK4amRNA表达为（5.52±0.48），P21WAFlmRNA表达为（4.51±0.32），P27K1PlmRNA表达为（3.42±0.23）。

3 讨 论

胰腺癌中的RAS基因突变率较高，约为70～90%，可导致MEK转导异常，激活癌基因，造成抑癌基因失活。随着医学技术的不断发展，抑制MEK信号通路成为了抗肿瘤的靶点之一[3]。本次研究结果显示，用药1 d后，两组PANC1、CFPAC1细胞系的细胞数比较无明显差异，用药3 d、6 d后，A组上述细胞系的细胞数低于B组，说明A组采用的MEK通路抑制剂PD98059能够有效抑制人胰腺癌细胞生长、增殖。且A组PANC1、CFPAC1细胞系的G0/G1期细胞比例高于B组，S期细胞数比例低于B组，两组G2/M期细胞比例比较无明显差异，表明经过MEK通路抑制剂干预后，PANC1、CFPAC1细胞系的G0/G1期细胞比例明显上升，S其细胞数比例下降，可抑制细胞周期进展。分析后可知，PD98059作为一种MEK抑制剂，对人体ATP并无明显影响，抗肿瘤效果确切，可通过抑制人胰腺癌细胞系CFPAC1、PANC1生长，阻碍癌细胞由低分化期向高分化期转化，达到抑制胰腺癌细胞生长、增殖、控制病情进展的干预目标。结合本次研究结果发现，A组经PD98059干预后，CFPAC1、PANC1细胞P21WAFl、P27K1Pl、p16INK4amRNA表达水平显著上升，提示MEK通路抑制剂PD98059可能通过上调细胞周期相关抑癌基因表达水平，影响胰腺癌细胞生长、周期进展。

综上所述，与MEK通路抑制剂DMSO相比较，PD98059可能通过上调细胞周期相关抑癌基因表达水平，阻碍病情进展。