复方中草药超微粉添加剂对草鱼生长和肌肉成分的作用

尚书凤 路宏朝 王 琦 颜文博 王杨科

(陕西理工大学生物科学与工程学院，陕西汉中723000)

将甘草、板蓝根、金银花、陈皮、肉桂和杜仲按一定比例配制成传统中草药添加剂和超微粉添加剂，研究其对草鱼生长的影响，为研究超微粉中草药添加饲料积累资料，为鱼类养殖的科学和可持续发展提供依据。超微粉碎技术是近年发展起来的一项新技术，是指利用机械或流体动力的方法使物料破碎，进而将直径超过3 mm 的物料颗粒粉碎至10～25 μm 的操作技术[1]。这种技术用于中成药，可以提高药物有效成分的溶出率，进而降低药材用量，也能够提高生产过程中的卫生质量。因此，超微粉中草药添加于饲料，能够充分保留生物活性成分，提高药物吸收率和生物利用率，增强药效，节省原料[2]。然而，有关超微粉中草药添加剂对鱼类生长、免疫的影响，报道不多。因此，本实验拟将不同质量百分比的超微粉碎复方中草药添加到基础饲料，并投食给草鱼，连续饲养，探讨对草鱼生长及其肌肉成分的影响。

1 材料与方法

1.1 中草药制剂及饲料

甘草、板蓝根、金银花、陈皮、肉桂和杜仲等中草药均购自汉中市第二药材公司。

传统中草药添加饲料制备：按质量等比例取6味中草药，水洗，加水浸泡30 min，第一次煎煮45 min，将药汁倒出，再加水煎煮30 min，将2次药汁合并、过滤、浓缩成1 ml药液相当于1 g中草药干物质的制剂，经高压灭菌后存放于冰箱（4 ℃）[3]。使用时将中草药药液按2%的比例反复喷洒于基础饲料上，随后搅匀晾干，装袋备用。

超微粉添加饲料制备：取烘干（55 ℃）的中草药于普通粉碎机粉碎成40 目左右粗粉，然后置于超微粉碎机（KC-701，北京开创同和科技发展有限公司）粉碎，过300目筛（约相当于48 μm），再将中药超微粉置于水中，加热煮沸，使超微粉末完全溶解于水中。待溶液冷却后，浓缩成1 ml相当于1g的生药干物质，经高压灭菌后存放于冰箱（4 ℃）。使用时将浓缩药液均匀喷洒于基础饲料，最终制成含中草药1%、2%、3%的饲料，晾干，装袋备用。

实验用基础饲料组成：鱼粉20%，豆粕28%，菜粕23%，面粉10%，麸皮14%，鱼油2%，磷酸二氢钙1.5%，微量矿质元素预混料0.5%，多种维生素预混料0.2%，氯化胆碱0.3%，黏合剂0.5%。购于陕西正大有限公司。

1.2 分组与饲养管理

实验鱼为草鱼，购置于汉中市城固某养殖场，实验前暂养7 d。实验开始时，选取健壮、活泼、大小基本一致、体重平均为（21.18±0.06) g的100尾草鱼作为实验鱼，随机分装在个5 个水族箱中，每箱放养10 尾实验草鱼，其中对照组设为C，对照组投喂基础饲料；实验组设为T1、T2、T3和T4，分别投喂含2%的传统中草药添加饲料和含1%、2%和3%超微粉中草药添加的饲料。每组设置2个平行实验。

玻璃水族箱规格为80 cm×50 cm×45 cm。实验用水为曝气48 h的自来水，每天上午8:00吸走剩余饲料和粪便，清理水族箱，同时换水1次，换水量约为1/3。实验期间利用充气泵充气增氧，水温控制在22～25 ℃，保持溶氧6.0 mg/l 以上，pH 值6.8～7.6。实验共进行56 d。每天8:30投饲1次，日投喂量为鱼总体重的3%。

1.3 生长指标及测定方法

增重率（%）=（实验末尾均重-实验初尾均重）×100/实验初尾均重

特定生长率（%/d）=（ln 实验末尾均重-ln 实验初尾均重）×100/养殖天数

成活率（%）=成活尾数×100/总尾数

1.4 肌肉成分分析方法

实验结束后，各处理组随机取3 尾鱼，解剖取其背部肌肉冻存于-20 ℃冰箱备测。肌肉成分分析包括肌肉粗蛋白、粗脂肪、水分和粗灰分。利用GB 5009.5—2016《食品安全国家标准食品中蛋白质的测定》检测粗蛋白含量；利用GB 5009.6—2016《食品安全国家标准食品中脂肪的测定》检测脂肪含量；利用GB 5009.3—2016《食品安全国家标准食品中水分的测定》检测水分含量；利用GB 5009.4—2016《食品安全国家标准食品中灰分的测定》检测灰分含量。

1.5 数据处理

实验结果以“平均值±标准差（M±SD）”表示。采用SPSS19.0软件进行单因素方差分析，用Duncan's多重比较法分析实验组间的差异，差异显著水平为P＜0.05。

2 结果

2.1 复方中草药添加剂对草鱼生长的影响(见表1)

从表1可知，添加不同比例的中草药均可提高草鱼的增重率，提高特定生长率，而且除T3和T4之间差异不显著外（P＞0.05），其余各组之间差异均显著（P＜0.05）。添加超微粉的饲料，其增重率和特定生长率较添加传统方法制备的饲料的效果好，T1和T3（剂量相同2%）之间比较，T3比T1的特定生长率高38.18%，增重率高40.20%。添加超微粉复方中草药饲料的各组，其增重率和特定生长率随中草药含量的升高而提高。此结果说明，中草药添加剂对草鱼的生长有促进作用，并且超微粉中草药添加组的效果好于传统中草药添加组。

2.2 复方中草药添加剂对草鱼肌肉基本成分的影响(见表2)

表1 复方中草药超微粉对草鱼生长的影响

表2 复方中草药超微粉对草鱼肌肉成分的影响

由表2可知，饲料添加复方中草药对草鱼肌肉水分、灰分和粗脂肪含量无明显影响（P＞0.05），但对粗蛋白含量有显著影响，并且随着中草药含量的增加，鱼肌肉粗蛋白含量也在升高。与C（对照组）比较，T1肌肉粗蛋白含量提高了5.16%，T2肌肉粗蛋白含量提高了7.81%，T3肌肉粗蛋白含量提高了12.97%，T4肌肉粗蛋白含量提高了14.74%。经方差分析和多重比较，对照组（C）与所有实验组差异显著（P＜0.05），T1与T2差异不显著（P＞0.05），但T1与T3、T4差异显著（P＜0.05），T3与T4差异不显著（P＞0.05）。可见，饲料中添加复方中草药能明显增加草鱼肌肉蛋白质含量，并且超微粉中草药添加组的效果优于传统中草药添加组。

3 讨论

3.1 复方中草药添加剂促草鱼生长的作用

根据中医理论，所选6 味草药，多味甘、温性，具有和中缓急、理气调中、健脾、开胃的功效，对消化系统的功能具有很好的调理作用，能够提高消化功能，促进营养物质的吸收，增强机体代谢，促进生长，这点也被现代实验研究所佐证。例如，石英等[4]实验发现，杜仲叶提取物可显著提高异育银鲫肠道蛋白酶活性和干物质消化率、粗蛋白消化率，从而改善鱼体生长性能。而且，杜仲含有多种有机酸和芳香油成分，能促进动物消化液的分泌，其中的绿原酸还具有类似肾上腺素的功效，可提高中枢神经系统的兴奋性，促进消化道括约肌的收缩，这些功能活动促进了动物对营养物质的吸收和利用[5]。蔡东森等[6]实验结果表明，饲料添加0.15%甘草次酸，将团头鲂幼鱼肠道蛋白酶活性由82.36 U/mg 提高到103.75 U/mg，二者差异显著（P＜0.05）。彭小玉等[7]将2%蒲公英水提物添加于饲料中饲喂鲫鱼，结果发现，蒲公英水提物显著提高了鲫鱼淀粉酶和蛋白酶的活性(P＜0.05)，促进营养物质的消化吸收，进而促进动物的生长发育。亦有研究显示，饲料中添加肉桂能够增强大鼠的糖类代谢，促进糖类转化为脂肪和蛋白质[8]，肉桂或许在鱼类的代谢中也具有类似的效应。

实验所用6味草药，含有多种营养成分及多种生物活性物质，如蛋白质、氨基酸、多糖、维生素等，这些营养物质和生物活性物质具有促进动物的机体代谢和蛋白质（包括酶）的合成，增加营养，促进草鱼的生长[9]。例如，姜光丽[10]用甘草和蒲公英等中草药提取的含黄酮、多糖和甘草酸等有效成分的实验发现，这些提取物可促进黄颡鱼生长和提高免疫功能[10]。此外，6味草药还含有桂皮醛、橙皮苷等挥发油，具有诱食的效应，能够促进动物的摄食，加强营养，促进生长[11]。杜仲叶提取物能增强多个器官的代谢功能，抗氧化、抗胃溃疡作用，促进胶原合成，加速肉芽肿形成等药理作用[12-13]。因此，中草药可以通过多种方式和机制提高动物的食欲，增加摄食量，提高营养物质的吸收与利用，促进新陈代谢和蛋白质积累，促进动物生长。

候选的6 种中草药具有抗炎、抗氧化、抗病毒等作用。金银花及其活性成分提取物具有降血脂、解热、保肝、细胞保护、抗菌、抗氧化、抗病毒、抗炎等作用[14]。甘草提取物（2.5、5、10 μg/ml）具有对四氯化碳诱导鲤鱼肝细胞损伤的保护作用及抗氧化作用[15]。陈皮中3，5，6，7，8，3′，4′-七甲氧基黄酮具有抗过敏活性[16]。从水、乙醇和超临界流体条件下提取的板蓝根具有抗氧化作用[17]。桂皮中含有一些对急性炎症有抑制作用的活性成分[18]。因此，这6 种中草药能提高免疫力，减少疾病，从而有利于促进生长。

3.2 复方中草药添加剂对草鱼肌肉蛋白质含量的影响

饲料中添加复方中草药提高了草鱼肌肉中蛋白质含量，可能与中草药能够提高草鱼消化道蛋白酶的活性，促进水产动物机体代谢和蛋白质的合成有关[19]。邱小琮等[20]报道，在饲料中分别添加0.5%、1%、2%复方中草药，结果发现，异育银鲫的蛋白质消化率极显著地高于对照组(P＜0.01)；石英等[4]试验结果显示，0.15%的杜仲叶提取物提高了异育银鲫蛋白质效率11.6%、粗蛋白消化率4.0%，这些实验研究说明，饲料添加中草药都可提高营养物质消化率，促进消化道蛋白质的消化吸收，促进机体蛋白质的积累。

3.3 超微粉复方中草药添加剂的作用

本实验结果显示，饲料中添加超微粉中草药，不论是对草鱼的生长，还是对草鱼肌肉营养成分的积累，都表现出比传统中草药制剂添加具有更好的效应。

超微粉碎技术是指利用冲击、碰撞、剪切、研磨、分散等方法使物料破碎，直径达到10～25 μm 的操作技术[1]。中草药经超微粉碎后破坏了大部分细胞的细胞壁，有效成分就很容易释放出来，可明显提高药物成分的释放速率和释放量，因此小剂量超微粉药材的药效就可达到或超过大剂量普通粉碎药材的药效。黄一帆等[21]比较了超微粉碎黄连解毒汤和普通粉碎黄连解毒汤中黄芩苷的溶出量，结果显示，在没有改变黄连解毒汤原有药效学成分的同时，超微粉碎黄连解毒汤增加了黄芩苷的溶出量，开水冲搅条件下，超微细粉黄连解毒汤黄芩苷含量比普通粉碎提高51.23%。张明等[22]比较了超微粉碎与普通粉碎大黄蒽醌浸出率，结果显示，超微粉碎大黄蒽醌的浸出率显著高于普通粉碎大黄蒽醌浸出率。

超细微粉技术制成的糖泰胶囊，其降低正常小鼠血糖、链脉霉素造模糖尿病小鼠血糖、四氧嘧啶造模糖尿病大鼠血糖的效应均显著大于传统粉碎技术制成的糖泰胶囊的降血糖效应（P＜0.05）[23]。本实验的结果也表明，1%超微粉复方中草药添加的效果优于2%传统复方制备的中草药添加的效果。

可见超微粉处理中草药，提高溶出量，有利于药物的释放和吸收，增强了药效，减少使用量。药物经超微粉碎后可不再经过浸提、煎煮等处理，减少了中间环节和有效成分的损失，最大限度地利用了原材料，提高生产效率，降低生产成本[24-25]。

本实验说明，甘草、板蓝根、金银花、陈皮、肉桂、杜仲等6味中草药饲料添加剂能够促进草鱼生长，增加肌肉蛋白质积累；超微粉中草药添加饲料的效果优于传统复方制备的中草药添加的效果。但是，由于时间和条件所限，研究尚不够深入，有关超微粉添加饲料的作用机制以及对机体其他功能的影响还需要作进一步的探讨。

4 结论

中草药添加剂对草鱼的生长有促进作用，并且超微粉中草药添加组的效果好于传统中草药添加组。饲料中添加复方中草药能明显增加草鱼肌肉蛋白质含量，并且超微粉中草药添加组的效果优于传统中草药添加组。