一株西藏绵羊链球菌的分离与鉴定

达娃卓玛

（西藏自治区拉萨市堆龙德庆区兽医站，西藏 拉萨 851400）

羊链球菌病（Streptococcusovis）又称为羊败血性链球菌病，是危害绵羊、山羊的严重疫病，广泛分布于我国多个省市[1]。但由于不同地区流行的血清型不同，各血清之间相互免疫能力不强等特点[2],羊链球菌时有发生。

2018年4月，西藏某村绵羊出现发热，精神沉郁，后期出现了食欲废绝，呼吸困难，下颌淋巴结、最终死亡。

1 材料与方法

1.1 病料

2018年4月，西藏某村采集疑似羊链球菌病料：肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结，保存至-20℃，待检。

1.2 主要试剂

氨苄西林、青霉素、头孢氨苄、氧氟沙星、环丙沙星、诺氟沙星、头孢唑啉、新霉素、多西环素、庆大霉素、卡那霉素等 11 种抗菌药物均购自杭州微生物试剂有限公司。

1.3 细菌的分离培养及纯培养

将肺脏、肝脏、脾脏和淋巴结接种于血平板上，置37 ℃培养箱中培养18 h；挑取疑似的单个菌落进行细菌纯培养。

1.4 染色镜检

将纯培养后的单个菌落涂在干净的载玻片上进行干燥固定后细菌革兰氏染色，镜检。

1.5 生化试验

挑取菌落接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、果糖、山梨醇、甘露醇），精氨酸、七叶苷、V-P、还原硝酸盐等生化培养基上进行细菌鉴定。

1.6 药敏试验

用灭菌涂棒将培养的菌液均匀涂布于血平板上，药敏纸片贴压于血平板上，37 ℃培养24 h，观察结果。

2 结果与分析

2.1 细菌的分离培养

从肝脏中分离出1株大小一致透明、淡灰色圆形小菌落。

2.2 染色镜检

对纯化后的菌落进行革兰染色，镜检，分离菌株呈蓝紫色，为 圆形或卵圆形，排列成长链状或成对排列（见图 1）。

图1 细菌染色结果

2.3 生化试验结果

与相关教材进行比对，其生化特性与牛摩拉菌的生化特性基本一致（见表1），初步确定该菌为牛摩拉菌。

表1 生化特性

2.4 药敏试验

选用 11种兽医临床中常用的抗菌药物，采用K-B纸片法进行耐药检测。结果显示，分离菌株对所选用的抗菌药物有不同程度的耐药现象（见表2）。

表2 药敏试验判定标准

3 讨论

羊链球菌病在西藏地区已经有相关报道[3-4]，本试验从西藏地区某村病死绵羊体内分离到一株革兰氏阳性球菌，经临床症状及实验室诊断为羊链球菌。

本次分离的菌株对常用抗菌药物存在一定的耐药性现象。其中头孢氨苄、头孢唑啉、青霉素、新霉素和多西环素产生耐药，对氨苄西林、庆大霉素、卡那霉素中介，对氧氟沙星、环丙沙星和诺氟沙星敏感。可见西藏绵羊链球菌耐药性较为严重，可能该地区饲养绵羊过程中存在抗生素使用不当的现象，因此，需要大力宣传抗生素耐药相关专业知识，让农户掌握合理使用抗菌药物方法，大幅提升知晓率。