重庆地区山羊化脓隐秘杆菌肺炎感染的调查研究

张素辉，沈克飞，许国洋，徐登峰，张成刚，付利芝

（重庆市畜牧科学院，重庆 荣昌 402460）

近年来，重庆地区山羊产业发展迅速，已成为助推农民脱贫致富的重要产业之一。然而，由于地方山羊养殖规模与技术水平参差不齐，山羊相关疫病对产业的影响日益明显，其中以山羊化脓性感染尤其严重，几乎遍布于所有羊场。山羊化脓性感染是由化脓菌（Pyogenic bacteria）感染羊受损的皮肤或黏膜而引起的一种传染性疾病，常为多种病原菌混合感染[1]，表现为体表脓肿和脏器脓肿。其中，尤以化脓隐秘杆菌引起的山羊化脓性肺炎对山羊产业的危害严重。

鉴于化脓隐秘杆菌肺炎的广泛流行[2]，本研究运用实验室现有的分子诊断方法[3]和血清学诊断方法[4]对山羊化脓隐秘杆菌病的流行情况进行调查，并分析发病原因，为有效控制该病提供技术参考。

1 材料与方法

1.1 病料的采集 2019年1～10月间，为解决大足、武隆、长寿3个区县3家山羊养殖场因呼吸道疾病导致羔羊存活率低下的问题，研究人员固定跟踪3家养殖场的羊群，针对病死羔羊进行解剖，快速采集胸腔内整个肺脏组织，冷藏保存，直接送往实验室进行后续处理。

1.2 细菌的分离培养 将采集的肺脏组织在邻近病变部位处直接划开，无菌条件下划线接种在含10%小牛血清的TSA琼脂培养基上，37 ℃培养48～72 h后，进行细菌的纯化培养、染色镜检[5]。

1.3 细菌的PCR检测 挑取分离菌纯培养物的单个菌落接种至含10%小牛血清的TSB 肉汤培养基中，37 ℃120 r/min振荡培养24～48 h。采用OMEGA Bacterial DNA Kit试剂盒提取细菌基因组，运用针对化脓隐秘杆菌PLO毒力基因设计的引物（上游引物为5′-TTGATAACGGTCCACCACGG-3′，下游引物为5′-CACTGCCACGACCTACAAGT-3′）进行PCR检测。

1.4 感染性抗体的检测 参考本实验室2018年申请的专利“一种山羊化脓隐秘杆菌感染检测试剂盒及其检测方法”[4]进行化脓隐秘杆菌感染性抗体的检测。

2 结果

2.1 感染情况统计结果 2019年1～10月期间，共采集肺炎病羊20 份肺脏组织进行了化脓隐秘杆菌病原感染的诊断分析，结果见表1。

表1 3家羊场化脓隐秘杆菌肺炎的感染情况

从表1 可见，3 家羊场的羊群感染化脓隐秘杆菌的情况均较严重，尤以长寿区的羊场最为严重，化脓隐秘杆菌分离率达42.9%。

2.2 细菌分离鉴定结果 通过对病料直接触片染色镜检和常规细菌分离培养，结果共分离到6株化脓隐秘杆菌，分离率为30%。

图1 化脓隐秘杆菌PLO毒力基因PCR检测结果

使用化脓隐秘杆菌PLO 特异性引物对分离菌株进行PCR扩增，均能扩增出264 bp的目的片段（图1），测序后在GenBank上进行比对，与化脓隐秘杆菌CP012649的相似性大于99%。

2.3 感染性抗体检测结果 对长寿区确诊为化脓隐秘杆菌感染的某羊场进行抽样检测，共采集血清100份，经间接ELISA方法检测，得到血清化脓隐秘杆菌抗体阳性样本31份，说明该场山羊化脓隐秘杆菌的阳性感染率达31%。

3 讨论

3.1 山羊化脓隐秘杆菌的危害 化脓隐秘杆菌属于一种条件致病菌，主要寄生在动物上呼吸道、消化道、生殖道等黏膜上，常导致牛、羊、猪等多种动物的化脓性肺炎、肝脓肿、乳腺炎、子宫内膜炎、流产和死胎等疾病[6-8]。本次从有呼吸道症状的病死山羊的肺脏（图2）、炎性淋巴结（图3）、脓肿牙龈（图4）等病灶中均分离到了化脓隐秘杆菌，并明确了其在山羊化脓性病例中的致病性。

图2 化脓性肺炎：胸腔充满脓性浑浊积液、肺脏有出血性黏脓性病变

图3 淋巴结炎：髋部淋巴结肿大化脓

图4 牙龈脓肿：牙龈根部组织溃烂，蓄积大量脓液

3.2 化脓隐秘杆菌病的流行原因 本次调查显示，化脓隐秘杆菌病占呼吸道疾病的比例为20%～42.9%，证实该病已经成为山羊呼吸道疾病的重要病原，广泛存在于当地羊群中。其中尤以长寿羊场化脓隐秘杆菌血清抗体阳性的比例最大，这与其养殖方式密切相关。该场采取散养不补饲的饥饿式饲养方式，一天只放牧一次，持续时间约为3 h，羊群缺乏营养，机体抵抗力较弱，一旦遇上气温骤降等外界因素变化，羊群就容易发病，故化脓隐秘杆菌感染率较高。大足羊场采取全舍饲养殖方式，武隆羊场采取舍饲加放牧的养殖方式，企业管理均较规范，营养供给较均衡，但后续调查羊舍消毒效果时发现其圈舍消毒程序还需改进，故这两家养殖场仍存在化脓隐秘杆菌感染。

3.3 山羊化脓隐秘杆菌病的防治 化脓隐秘杆菌为条件性致病菌，多在不良诱因存在的情况下导致羊群发病，故养殖过程中应注意羊群的防寒保暖，保持圈舍清洁、干燥和良好通风，保证羊群充足的营养需求，尤其要为羔羊提供优质饲草，发现病羊及时隔离治疗或处置，并对羊舍进行严密消毒。

山羊感染化脓隐秘杆菌后主要表现为渐进性消瘦、咳喘、流鼻液等临床症状，病理组织学变化为化脓性炎症［9］。如果养殖过程中未及时观察到病羊，随着病程延长，就会造成肺脏组织不可逆损伤，即使后期大量用药羊只也依然死亡。故在山羊养殖过程中，必须仔细观察羊群精神状态、采食状态，有无流鼻液、有无咳喘，尽量做到早发现、早治疗。重庆地区的山羊化脓隐秘杆菌对头孢菌素、杆菌肽、阿奇霉素、恩诺沙星、氟苯尼考、庆大霉素、卡那霉素等药物敏感[5]，可选用以上药物及早治疗。

目前，针对化脓隐秘杆菌病的防控策略强调“早发现、早治疗”，故在后期需要加强化脓隐秘杆菌病诊断试剂的研制，为尽早确诊提供有效产品。同时，鉴于该病严重影响羔羊的存活率，故应加快化脓隐秘杆菌病有效疫苗的研发，为防控该病提供有效产品。