高效液相色谱法测定复方依美辛胶囊中3种成分含量

郭社民，王 静

（河南省濮阳市食品药品检验检测中心，河南 濮阳 457000）

复方依美辛胶囊是由马来酸依那普利、酒石酸美托洛尔、辛伐他汀、阿司匹林、氢氯噻嗪等组成的医院制剂，临床多用于治疗高脂血症、高血压、缺血性心脏病和脑卒中等症。原质量标准中仅对酒石酸美托洛尔进行了含量测定，为更有效地控制制剂质量，确保临床疗效，本研究中参考文献［1-10］建立了同时测定制剂中氢氯噻嗪、阿司匹林和酒石酸美托洛尔含量的高效液相色谱法。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；UVIKONxl型紫外分光光度计（法国Secoman公司）；CPA225D型电子分析天平（德国 Sartorius公司）；SK2200H型超声清洗器（上海科导超声仪器有限公司）。

1.2 试药

氢氯噻嗪对照品（批号为1000309-201404，含量99.7%），阿司匹林对照品（批号为100113-201706，含量99.8%），酒石酸美托洛尔对照品（批号为100084-201403），均购自中国食品药品检定研究院；复方依美辛胶囊（濮阳市第一人民医院制剂室，批号分别为20180226，20180421，20180619，规格为每粒含马来酸依那普利20 mg、酒石酸美托洛尔50 mg、辛伐他汀40 mg、阿司匹林75 mg、氢氯噻嗪12.5 mg）；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：XBridge C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：醋酸盐缓冲液（取醋酸铵3.9 g，加水810 mL溶解，加三乙胺 2.0 mL，冰醋酸10.0 mL，磷酸3.0 mL，摇匀）-乙腈（87 ∶13，V/V）；流速：1.0 mL/min；检测波长：275 nm；柱温：35 ℃；进样量：20 μL。

2.2 溶液制备

混合对照品溶液：取氢氯噻嗪对照品15.25 mg、阿司匹林对照品90.19 mg、酒石酸美托洛尔对照品60.25 mg，精密称定，置同一20 mL容量瓶中，加甲醇-乙腈（1 ∶1，V/V）5 mL，超声 5 min，加流动相适量，超声（功率 100 W，频率 53 kHz，下同）处理 10 min，使其溶解，放冷，加流动相定容，摇匀，作为对照品贮备液（每1 mL含氢氯噻嗪0.760 2 mg、阿司匹林4.500 5 mg、酒石酸美托洛尔3.012 5 mg），量取5 mL，置100 mL容量瓶中，加流动相定容，摇匀，作为混合对照品溶液。

供试品溶液：取样品20粒，将内容物混匀，取适量（约相当于氢氯噻嗪7.6 mg），精密称定，置200 mL容量瓶中，加甲醇 -乙腈（1 ∶1，V/V）5 mL，超声处理5 min后加流动相适量，再超声处理10 min使其溶解，放冷，加流动相定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

阴性对照品溶液：按复方依美辛胶囊处方比例及制备方法制备不含氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔的阴性样品，并依法制备阴性对照品溶液。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

系统适用性试验：取上述混合对照品溶液、供试品溶液各适量，按拟订色谱条件进样测定。结果各待测成分峰形良好、分离度均大于1.5，理论板数以氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔峰计均大于3000。色谱图见图1。

专属性试验：取对照品溶液、阴性对照品溶液各适量，按拟订色谱条件进样测定，记录色谱图，详见图1。结果，阴性对照品溶液在与混合对照品溶液保留时间相同处无干扰峰，表明方法专属性良好。

线性关系考察：分别精密量取混合对照品溶液0.4，0.6，0.8，1.0，1.5，2.0，2.5 mL，分别置 20 mL 容量瓶中，加流动相定容，摇匀，制成系列对照品溶液。取10 μL，按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。以待测成分质量浓度（X，mg/mL）为横坐标、峰面积（Y）为纵坐标进行线性回归，得氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔回归方程分别为Y1=1.346 1×105X1+42.13（r1=0.999 9，n=7），Y2=1.106 2×104X2+59.36（r2=0.999 9，n=7），Y3=9.187 5 ×103X3+86.52（r3=0.999 9，n=7）。结果表明，氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔检测质量浓度分别在 0.015 2～0.095 0 mg/mL，0.090 0～0.562 6 mg/mL，0.060 2～0.376 6 mg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取混合对照品溶液适量，按拟订色谱条件连续进样6次，记录峰面积。结果氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔峰面积的RSD分别为0.42%，0.48%，0.53%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取同一供试品（批号为20180421）溶液，分别于室温下放置 0，2，4，6，8，10 h 时按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积。结果氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔峰面积的RSD分别为0.63%，0.71%，0.75%（n=6），表明供试品溶液在室温下放置10h内基本稳定。

重复性试验：取同一批（批号为20180421）样品，依法制备供试品溶液，共5份，再按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积并计算含量。结果氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔的平均含量分别为99.8%，101.3%，101.7%，RSD分别为 0.70%，0.64%，0.68%（n=5），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取已知各成分含量的同一批（批号为20180421）样品内容物适量，共9份，分别加入低、中、高质量浓度的待测成分对照品溶液适量，依法制备供试品溶液，再按拟订色谱条件进样测定，记录峰面积，并计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=9）

2.4 样品含量测定

取样品适量，依法制备供试品溶液，再按拟订色谱条件进样测定，记录色谱峰面积并计算含量。结果见表2。批号20180226 20180421 20180619

3 讨论

溶剂选择：氢氯噻嗪在水中不溶解，阿司匹林微溶解，酒石酸美托洛尔极易溶解，三者的溶解性差异较大，氢氯噻嗪需要选择有机溶剂进行溶解。预试验结果表明，先加甲醇-乙腈（1∶1，V/V）适量溶解氢氯噻嗪后，再加流动相适量溶解其余2种成分，并进行超声处理，可使3种成分均得到充分溶解。

流动相选择：曾试用0.1 mol/L磷酸二氢钠-乙腈、醋酸盐缓冲液-甲醇、醋酸盐缓冲液-乙腈等系统及不同比例，试图用1种流动相同时分离和测定该制剂中各种主药成分，结果以文中溶液为流动相，能同时使氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔3种成分很好地分离，且峰形较好、无干扰。

检测波长选择：在200～400 nm波长范围内，对氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔对照品溶液分别进行全波长扫描，结果氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔的最大吸收波长分别为273，276，275 nm，且酒石酸美托洛尔的响应值较小，故选用275 nm作为检测波长。

综上所述，本研究中所建方法简便、准确、重复性好，可用于复方依美辛胶囊中氢氯噻嗪、阿司匹林、酒石酸美托洛尔的含量测定。