青皮配方颗粒质量标准研究*

2019-12-27吕小梨林彦朝陈红英

中国药业 2019年24期

吕小梨，林彦朝，陈红英

（仲景宛西制药股份有限公司，河南郑州 450003）

中药配方颗粒为传统中药煎剂的改良剂型，在保持传统煎剂特点外，还具有免煎煮，携带、服用方便，便于企业、医院的生产、贮存及流通等优点，越来越受到关注［1-2］。青皮为芸香科植物橘Citrus reticulataBlanco及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮，有疏肝破气、消积化滞功效，可用于治疗胸胁胀痛、疝气疼痛、乳癖、乳痈、食积气滞、脘腹胀痛［3］。青皮的主要化学成分为挥发油［4］、总黄酮［5］、多种氨基酸［6］，以及含升压有效成分左旋辛弗林乙酸盐和胺类成分［6］。国外学者还从冷压缩后的桔皮油固体中分离出了黄酮类化合物［7-8］。近年来关于青皮的药理作用已有很多研究，包括对心血管系统的作用［9-13］和平滑肌及能量代谢的影响等［14-18］。青皮配方颗粒采用2015年版《中国药典（一部）》中的青皮饮片为原料，通过工业化提取、分离、浓缩、干燥、制粒等制成，基本保证了有效成分和功效。本研究中采用薄层色谱（TLC）法对青皮配方颗粒进行了定性鉴别，采用高效液相色谱（HPLC）法对其中的橙皮苷进行了含量测定，以建立其稳定可行、质量可控的质量标准。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1260型高效液相色谱仪（包括VWD检测器、四元泵、柱温箱、化学工作站，美国安捷伦公司）；MS-105型电子分析天平、AL104型电子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；KQ-500DE型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

橙皮苷对照品（中国食品药品检定研究院，批号为110721-201617，含量96.1%）；青皮配方颗粒［仲景宛西制药股份有限公司，批号分别为171101，171102，171103，规格为每袋 1 g（相当于 6 g饮片）］；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

取样品各0.2 g，研细，加甲醇10 mL，超声（功率250 W，频率 40 kHz，下同）处理 20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇2mL使溶解，作为供试品溶液。取青皮对照药材0.5 g，加水50 mL，煎煮30 min，放冷，离心，取上清液，蒸干，残渣加甲醇10 mL，按供试品溶液制备方法制成对照药材溶液。取缺青皮阴性样品0.2 g，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。取供试品溶液、阴性对照品溶液各2 μL，对照药材溶液1 μL，点入1%氢氧化钠溶液制备的硅胶G薄层板，以乙酸乙酯-甲醇-水（100 ∶17 ∶13，V/V/V）为展开剂，展至约 3 cm，取出，晾干，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1，V/V/V/V）的上层溶液为展开剂，展至约8 cm，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365 nm波长紫外光灯下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。色谱图见图1。

图1 薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱：Xtimate-C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 -水（35 ∶65，V/V）；检测波长为 284 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30 ℃；进样量：5 μL。

2.2.2 溶液制备

取橙皮苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的对照品溶液。取装量差异项下的样品，研细，取约0.2 g，精密称定，置容量瓶中，加入甲醇适量，超声处理30 min，放冷，用甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取缺青皮阴性样品0.2 g，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

系统适用性试验：取2.2.2项下3种溶液各适量，按2.2.1项下色谱条件进样测定，记录色谱图，见图2。理论板数以橙皮苷峰计大于3 000，分离度大于1.5，基线分离良好。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察：精密量取2.2.2项下对照品溶液，加入甲醇，制成质量浓度为0.100 1 g/L的对照品溶液，精密吸取 1，2，3，5，8，10 μL，按 2.2.1 项下色谱条件进样，测定峰面积。以对照品进样量（X，μg）为横坐标、峰面积积分值（Y）为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=1 894.1X+14.438，r=0.999 9（n=6）。结果表明，橙皮苷进样量在0.100 1～1.001 0 μg范围内与峰面积积分值线性关系良好。

精密度试验：取2.2.2项下对照品溶液，分别进样测定6次，记录峰面积。结果的RSD为1.1%（n=6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取供试品（批号为171101）溶液，分别于室温下放置 0，2，4，6，8，12 h 进样，测定峰面积。结果的RSD为1.7%（n=6），表明供试品溶液室温下放置12 h内稳定。

重复性试验：取样品（批号为171101）适量，分别处理6次，依法制备供试品溶液，测定含量。结果的RSD为1.1%（n=6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取装量差异项下的样品（批号为171101），研细，取6份，每份约 0.2 g，精密称定，分别置50 mL容量瓶中，加入甲醇适量，超声处理30 min，放冷，用甲醇定容，摇匀，精密吸取25 mL置50 mL容量瓶中，精密加入对照品溶液3 mL（橙皮苷质量浓度0.483 0 g/L），加甲醇定容，摇匀，滤过，取续滤液，按2.2.1项下色谱条件进样测定，计算回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=6）

2.2.4 样品含量测定

取3批样品各适量，研细，取约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，再次称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液。按2.2.1项下色谱条件进样测定。结果批号为171101，171102，171103的样品中橙皮苷含量分别为 14.3，14.4，15.0 mg/g（按干燥品计）。