液相色谱-串联质谱法对锡林浩特地区马奶中泛酸含量的测定

王亚慧 ，侯海荣 ，陈明涛 ，孙春玲 ， 郝苗苗

（1.锡林郭勒职业学院，内蒙古锡林浩特 026000；2.锡林郭勒食品药品检验检测和风险评估中心，内蒙古锡林浩特 026000）

泛酸是B族维生素中的一种，又名“遍多酸”，也称为维B5，是人体所必需的维生素之一，也是辅酶A的组成部分，其主要功能是参与蛋白质、脂肪、糖在体内的新陈代谢[1-4]。马奶作为重要的马产品极具有地方特色，并且含有丰富的维生素、钙、磷和锌等多种微量元素[5]。有研究表明马奶相较于牛奶更接近人乳的营养组分[6]，而对于马奶中泛酸的具体含量分析报道较少。因此，以马奶为研究对象，采用液相色谱-串联质谱法[7]对马奶中的泛酸进行测定，为今后马奶的研究提供基础数据。

1 材料及方法

1.1 材料

1.1.1 样品来源

试验样品5份采集自内蒙古锡林浩特地区，由试验人员根据试验要求采集并及时送回检测。

1.1.2 仪器

SHIMADZU LCMS-8040型液相色谱-串联质谱联用仪，日本岛津公司产品；Accucore aQ柱（150 mm×2.1 mm，2.6 μm，美国赛默飞世尔科技中国有限公司产品；天平（感量0.1 mg，0.01 mg），梅特勒-托利多上海仪器有限公司产品。

1.1.3 试剂

乙腈（AR）、甲酸（AR）、盐酸（AR）、乙酸锌（AR）、亚铁氰化钾（AR)、泛酸钙（纯度≥98%），德国Dr Ehrenstorfer GmbH公司提供。

1.2 方法

1.2.1 标准溶液的配制

称取0.010 87 g泛酸钙倒入100 mL容量瓶，用水定容至刻度线，制得质量浓度为1 mg/mL的泛酸[8]储备液。从储备液中吸取1 mL至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度线，制得质量浓度为10 μg/mL的泛酸工作液A。从泛酸工作液A中吸取1 mL至10 mL容量瓶中，用水定容至刻度线，制得质量浓度为1 μg/mL的泛酸工作液B。取一定量的泛酸工作液，分别配制成质量浓度为50，100，500，1 000，1 500 ng/mL的标准点并对上述质量浓度点依次进行测定，以峰面积为纵坐标、各质量浓度点为横坐标绘制标准曲线。

1.2.2 样品前处理

（1） 试验组。称取样品20 g（精确到0.000 1 g）于150 mL三角瓶中，加入25 mL 30～40℃水，超声提取30 min。用浓度为5 mol/L的盐酸[9]溶液调节pH值至4.5±0.1[10]，加入2 mL乙酸锌（质量浓度为183 g/L）溶液及2 mL亚铁氰化钾（质量浓度为92 g/L） 溶液，转移至100 mL容量瓶中，用水定容至刻度线。将上述溶液倒入离心管中，以转速6 000 r/min离心5 min。取上清液经0.22 μm滤膜过滤，待测，每份样品称3组平行样。

（2） 加标组。选取其中2份样品做加标试验。每份样品称取18组试样，添加不同量的标准物质得到3个水平浓度的加标样品，样品前处理过程与试验组一致，待测。

1.2.3 色谱条件

以质量分数0.1%甲酸水为流动相A相，乙腈为B相，流速0.2 mL/min，Accucore aQ柱，柱温40℃[9]，进样量5 μL。洗脱梯度：0.01～5 min，B相为95%～30%；5～5.1 min；B 相为 30%～95%；5.1～10 min，B相为30%～95%。电雾化离子源ESI，正离子模式，多反应监测（MRM模式），离子源接口电压为4.5 kV，碰撞气为氩气进行测定。

2 结果与分析

2.1 泛酸标准曲线方程及色谱图

泛酸标准曲线见图1。

图1 泛酸标准曲线

根据各质量浓度点及测定结果绘制的标准曲线，所得标准曲线方程为Y=8 477.63X+38 675.7，相关系数R2=0.999 9，拟合度R2=0.999 7，拟合度高，在线性良好，线性范围在50～1 500 ng/mL，满足试验要求。

500 ng/mL泛酸标曲点色谱图见图2，1号样品色谱图见图3。

图2 500 ng/mL泛酸标曲点色谱图

图3 1号样品色谱图

由图2可知，质量浓度500 ng/mL的泛酸标曲点色谱图，可以看出泛酸的保留时间在3.760 min附近，色谱峰出峰明显，峰形对称。

2.2 样品测定结果

泛酸样品试验结果（n=3） 见表1。

表1 泛酸样品试验结果（n=3）

由表1可知，选取的试验号分别为1，2，3，4，5共5组样品，同组样品做3次平行样的平均值及相对标准偏差。

泛酸2份样品加标回收率和相对标准偏差（n=6） 见表 2。

表2 泛酸2份样品加标回收率和相对标准偏差（n=6）

由表2可知，选取3号添加100 μg/mL的标品0.10，0.15，0.20 mL这 3个级别，4号添加 100 μg/mL的标品0.20，0.30，0.40 mL这3个级别，每个级别做6次平行的平均回收率及相对标准偏差。

3 结论

利用液相色谱-串联质谱法对锡林郭勒盟马奶样品中的泛酸含量进行测定，配制50，100，500，1 000，1 500 ng/mL的标曲点所得的标准曲线为：Y=8 477.63X+38 675.7，相关系数R=0.999 9，拟合度R2=0.999 7，拟合度高，线性良好，满足试验要求。加标回收率为97.4%～102.7%，加标回收试验相对标准偏差在0.8%～2.4%，试验数据可信度高。经测定锡林郭浩特地区马奶样品泛酸含量分别为406.14，297.38，426.25，307.58，188.61 μg/100 g；平均值为 325.2 μg/100 g，相较于牛奶中含量365.9 μg/100 g[11]，人乳中含量 250.5 μg/100 g 而言，马奶中泛酸含量亦能满足机体的需要。