血塞通注射液与中硼硅安瓿的相容性试验中12种元素迁移量研究

黄勇 张欢 聂蕾 王公华 何昆云

1.云南省医疗器械检验研究院，昆明 650106；2.昆明医科大学药学院，昆明 650500；3.云南白药集团股份有限公司，昆明 650500

血塞通注射液主要成分为三七总皂苷[1]。目前市场上的血塞通注射液大多是采用低硼硅安瓿包装，低硼硅玻璃在生产使用过程中易出现脱片、破裂等不良现象，与药品接触过程中易出现稳定性和相容性问题[2]。而中硼硅安瓿由于具有膨胀系数小，耐急冷急热性强，加工过程中不易炸裂，抗冲击性强，化学稳定性好，耐酸耐碱耐水级别高等优点，逐渐替代低硼硅安瓿，成为注射剂包装[3-6]的首选材质。本文根据中硼硅玻璃的原材料、添加剂，建立了药用中硼硅安瓿与血塞通注射液相容性试验中B、Sb、Zn、Ca、Pb、Ti、Cd、Fe、Sr、Ba、Ce、Mn 12种元素迁移量[7-8]的电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）测定方法，并进行了方法学验证，评估元素迁移造成的用药风险。

1 仪器、试药与样品

1.1 仪器

iCAP RQ型电感耦合等离子质谱仪（ICPMS,thermos scientific）、Sartorius纯水机、100 mL、50 mL、25 mL、10 mL VITLAB塑料容量瓶、100-1000μL Sartorius移液器、1000-5000μL Sartorius移液器。实验所用容器均为塑料制品,实验用具均用硝酸浸泡过夜，用二级水冲洗备用。

1.2 试药

B、Sb、Zn、Ca、Pb、Ti、Gd、Fe、Sr、Ba、Ce单元素标准溶液（国家有色金属及电子材料分析测试中心，标示值1000μg·mL-1）、混合内标（spex certiprep，InternaL Standard Mix 1,10 ng·mL-1，Bi、Ge、In、Li、Sc、Tb、Y）、硝酸（65%，分析级，默克股份有限公司）、超纯水（Sartorius纯水机制备）、调谐液（thermos scientific，1.0μg·mL-1）。

1.3 样品

某玻璃股份有限公司生产的三批中硼硅安瓿，灌装一家公司生产的同一批血塞通注射液得样品1、2、3，规格：2mL：100mg。

2 方法与结果

2.1 考察方法

采用ICP-MS法测定中硼硅安瓿玻璃瓶包装的三个批号的血塞通注射液中B、Sb、Zn、Ca、Pb、Ti、Cd、Fe、Sr、Ba、Ce、Mn12个元素的含量。

2.2 仪器工作参数

射频功率1550W，蠕动泵转速40rpm，雾化室温度2.7℃，采样深度5mm，冷却气流速14 L·min-1，辅助气流速0.8000 L·min-1，雾化器流速0.8814 L·min-1。

2.3 溶液制备

2.3.1 混合标准溶液的配制

2.3.1.1 配制2个低浓度元素（Cd、Sb）的混合标准溶液 精密量取各单元素标准溶液，用2%的硝酸定容，制得1、2、3、4、5、0.5、0.1、0.05ng·mL-1的系列低浓度混合标准溶液。用2%的硝酸作为空白溶液。

2.3.1.2 配制10个高浓度元素的混合标准溶液（Fe、B、Zn、Ca、Pb、Ti、Sr、Ba、Ce、Mn）精密量取各单元素标准溶液，用2%的硝酸定容，制得1、2、4、10、20、40、60、80、100ng·mL-1的系列混合标准溶液。用2%的硝酸作为空白溶液。

2.3.2 内标液配制（0.1% Bi、Ge、In、Li6、Sc、Tb、Y）精密量取100μL混合内标溶液，置于100mL容量瓶中，加入5mL硝酸，用水稀释至刻度。

2.3.3 血塞通注射液供试品配制 取3批血塞通注射液原液记为供试品1、2、3。将原液稀释10倍和100倍，分别记为供试品1#、2#、3#和供试品1##、2##、3##。

2.4 方法学验证

2.4.1 专属性 采用电感耦合等离子体质谱法检测，测定的是由元素经高频电感耦合场激发到等离子化后其外层电子跃迁产生的特定波长光强度。各元素等离子体由于构造不同，其跃迁产生的光线波长也有其专属性。各元素在相应检查波长下均无谱线干扰，专属性好。

2.4.2 线性关系 取2.3.1配制的系列混合标准溶液进行测定，以待测元素的CPS值（每秒计数值）与内标液CPS值得比率(A)为纵坐标，待测元素的浓度（C，ng·mL-1）为横坐标绘制标准曲线，计算相关系数，结果见表1。

表1 线性关系考察结果

2.4.3 检出限与定量限 取空白溶液2%的硝酸溶液连续进样11次，以测定结果3倍的标准偏差所对应的浓度值作为各元素的检出限，10倍标准偏差所对应的浓度计算各元素的仪器定量限，结果见表2。

2.4.4 精密度 分别取质量浓度为 3 ng·mL-1和40ng·mL-1的混合标准溶液连续测定6次，得各元素的RSD 值，结果见表2。

2.4.5 重复性 因供试品中各元素的含量极微小，故采用加样的方法进行重复性实验。取同一批注射液20mL，加入质量浓度为10ng·mL-1（测定Cd、Sb）的混合标准溶液2mL，用空白定容至25mL，平行6份。取同一批注射液7.5mL，加入质量浓度为100ng·mL-1（测定其他10种元素）的混合标准溶液2.5mL，用空白定容至25mL，平行6份。各自比较六份供试液中各元素的的质量浓度，RSD结果见表2。

表2 检出限、定量限、精密度和重复性实验结果（n=11）

2.4.6 加标回收率试验 10个高浓度元素（2.3.1.2）加标回收率：取20mL血塞通注射液9份，置于25mL容量瓶，再精密量取1、2、3mL混合标准溶液(100ng·mL-1)各3份，置于容量瓶内，加2%硝酸溶液稀释至刻度，各配制三份平行样。2个低浓度元素（2.3.1.1）加标回收率：取7.5mL血塞通注射液9份，置于25mL容量瓶，再分别精密量取2、2.5、3mL混合标准溶液(10ng·mL-1)各3份，置于容量瓶内，加2%硝酸溶液稀释至刻度，各配制三份平行样。结果见表3。

表3 加标回收率

2.5 样品测定

取3批样品按“2.3.3”项方法制备供试品溶液，进行测定（测定B时稀释100倍），计算供试品溶液质量浓度，同时将测定结果转换为实际PDE 值，结果见表4。

3 讨论

3.1 结果分析

方法学验证结果显示，本测定方法灵敏，检出限低，相关系数大于0.999，回收率达到80.7%～122%，精密度的RSD均小于5%，重复性的RSD均小于15%，符合分析要求。同时样品测定结果显示，各元素含量均较低，测定所得实际人每日允许暴露量均远远小于规定值。

表4 测定结果

3.2 测定时应防止元素污染

使用电感耦合等离子质谱法测定元素含量时，由于仪器对硼元素存在记忆效应，为防止仪器交叉污染，每进完一个样品都用空白液（2%硝酸）进行仪器的清洗，再进下一个样品[9]。

3.3 内标元素的选择

内标的应用能校正信号波动，质量数接近的分析元素受信号波动和基底效应的影响大小相近，所以内标的选择以质量数接近为好，而进行多元素分析时，应选用双内标或多内标[10]

3.4 待测元素的选择

玻璃通常包含B2O3、CaO、MgO、B、Fe、Zn、Ti等成分，由于玻璃原料的复杂和药液储存时间较长，玻璃中的金属离子有可能迁移到药品中，影响药物的稳定性和人体的用药安全。本次实验重点考察了B、Sb、Zn、Ca、Pb、Ti、Cd、Fe、Sr、Ba、Ce、Mn 12种元素。

3.5 安全性评价

3.5.1 注射途径人每日允许暴露量（PDE）的确定 指导原则明确规定：通过“文献及毒性数据库查询相关浸出物”或“进行安全性研究”，得到相关毒理数据，换算成人每日允许最大暴露量，即根据测定的水平计算实际的每日暴露量与毒理学评估中得到的PDE值进行比较，做出包装系统是否与药物具有相容性的定论[11]。本文所涉及的元素中12中元素中除Sr、Ce两个元素未确定PDE值，其它10种均通过查阅ICH Q3D得，并见表4。

3.5.2 分析评估阈值（AET）的确定 为评估相容性研究迁移试验中的元素对人类的毒理学危害，需要将化学物质的毒理数据转换为化学物质的分析方法，实现药品与包装材料中对迁移物的控制。AET代表一种化合物的浓度，根据人每日允许最大暴露量或者安全性阈值·限定阈值、用药剂量以及制剂包装特点等计算每包装容器中特定的可以提却物和或浸出物含量[12]。血塞通注射液成人用量每日不超过400mg，通过每日最多可以使用的剂量来计算不同元素的AET值见表4。