冠心病合并糖尿病病人血清miR-26a、miR-26b表达特征观察

冠心病与糖尿病均为临床常见病，以中老年病人居多。研究表明，糖尿病是冠心病等多种心血管疾病的危险因素，与非糖尿病者相比，糖尿病病人冠心病发生风险增加2～4倍[1-2]。近年来，随着人口老龄化的发展，我国冠心病合并糖尿病患病率逐年增高，死亡率也有所增长[3]。研究表明，动脉粥样硬化与冠心病合并糖尿病病人预后密切相关，且动脉粥样硬化的发生可导致血管平滑肌内部分微小核糖核酸(miRNA)出现异常表达，如miR-26a、miR-26b等[4]。miR-26a、miR-26b均为miR-26家族中的一员，其中miR-26a能抑制血管生成，miR-26b在机体脂肪细胞分化时呈高表达，且多种炎症因子对其表达水平有影响[5]。为了进一步明确冠心病合并糖尿病的临床特征，本研究纳入80例冠心病合并糖尿病病人为研究对象，分析这类病人血清miR-26a、miR-26b表达特征，为临床诊疗提供依据，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取我院2013年12月—2017年12月收治的80例冠心病合并糖尿病病人作为合并组，选取同期收治的80例单纯糖尿病病人作为糖尿病组。合并组，男42例，女38例；年龄40～75(59.41±11.27)岁；体质指数19.32～27.17(23.59±2.13)kg/m2；既往史中，吸烟史10例，高血压史15例。糖尿病组：男45例，女35例；年龄40～75(58.09±10.92)岁；体质指数19.15～27.42(23.63±2.09)kg/m2；既往史中，吸烟史12例，高血压史17例。两组性别、年龄、体质指数、既往史等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。

1.2 纳入与排除标准

1.2.1 纳入标准 ①年龄18～75岁；②糖尿病符合卫生部疾病控制司[6]制定的《中国糖尿病防治指南》中的相关标准，冠心病参考中华医学会心血管病学分会[7]制定的《中国心血管病预防指南》中的诊断标准，经临床实验室检查、影像学检查证实；③无认知、意识障碍；④无肝、肺、脑等脏器损害；⑤病人知情同意。

1.2.2 排除标准 ①恶性肿瘤；②免疫性疾病；③甲状腺疾病；④严重贫血、营养不良；⑤慢性感染性疾病；⑥多发性骨髓瘤；⑦血液性疾病。

1.3 检测方法

1.3.1 血清miR-26a、miR-26b表达量检测 在病人入院当天采集3 mL空腹静脉血，保存于促凝管内，利用离心机离心15 min，转速为3 000 r/min，分离血清，存于离心管内。①提取RNA：根据TRIzol说明书对血清及总RNA进行提取，经紫外分光光度计对RNA浓度、质量进行检测；②实时荧光定量PCR(qRT-PCR)：取总RNA 2 μL行逆转录，反应条件为16 ℃、15 min，42 ℃、60 min，85 ℃、5 min，反应结束后存放于-20 ℃冰箱内。经探针法行qRT-PCR定量检测，反应条件为95 ℃、5 min(95 ℃、15 s，60 ℃、1 min，40个循环)。各样品设副孔3个，取Ct值的均值，以2-△ct作为miR-26a、miR-26b相对表达量。

1.3.2 血清白介素-6(interleukin-6，IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor，TNF-α)检测 另取3 mL空腹静脉血，利用离心机离心15 min，转速为3 000 r/min，分离血清，存放于-80 ℃冰箱内待测。采用酶法测定血清IL-6与TNF-α水平，试剂盒购自上海恒远生物科技有限公司。

1.4 观察指标 观察并比较两组病人的血清miR-26a、miR-26b表达量以及血清IL-6与TNF-α水平，采用ROC曲线模型分析血清miR-26a、miR-26b表达量对冠心病合并糖尿病的预测价值，利用Pearson线性相关分析血清miR-26a、miR-26b表达量与冠心病合并糖尿病病人血清IL-6、TNF-α水平的相关性。

1.5 统计学处理 利用SPSS 20.0统计软件进行数据分析。计数资料采用χ2检验；计量资料采用t检验；利用ROC曲线模型分析血清miR-26a、miR-26b表达量对冠心病合并糖尿病的预测价值；采用Pearson线性相关分析两个变量的相关性，相关系数(r)范围为-1～1，越接近1或-1表明相关性越强。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组血清miR-26a、miR-26b表达量及IL-6、TNF-α水平比较 合并组血清miR-26a、miR-26b表达量及血清IL-6、TNF-α水平均高于糖尿病组，两组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。详见表1。

表1 两组血清miR-26a、miR-26b表达量及IL-6、TNF-α水平比较(±s)

2.2 血清miR-26a、miR-26表达量对冠心病合并糖尿病的预测价值 血清miR-26a、miR-26b表达量预测冠心病合并糖尿病的曲线下面积分别为0.776、0.783，详见表2。ROC曲线模型见图1、图2。

表2 血清miR-26a、miR-26表达量对冠心病合并糖尿病的预测价值

图1 血清miR-26a表达量预测冠心病合并糖尿病的ROC曲线模型

图2 血清miR-26b表达量预测冠心病合并糖尿病的ROC曲线模型

2.3 血清miR-26a、miR-26表达量与IL-6、TNF-α水平的相关性 经Pearson线性相关分析提示，血清miR-26a、miR-26表达量与冠心病合并糖尿病病人的血清IL-6、TNF-α无明显相关性(P>0.05)。详见表3。线性相关图见图3～图6。

表3 血清miR-26a、miR-26b表达量与合并组IL-6、TNF-α的相关性

图3 血清miR-26a表达量与IL-6的线性相关分析

图4 血清miR-26a表达量与TNF-α的线性相关分析

图5 血清miR-26b表达量与IL-6的线性相关分析

图6 血清miR-26b表达量与TNF-α的线性相关分析

3 讨 论

糖尿病病人存在代谢异常，若这种异常状态长期未能纠正，则会引起动脉内膜功能紊乱，从而导致一系列病理改变，如血脂代谢紊乱、胰岛素抵抗等[8-9]。上述因素均可导致多类细胞功能改变，如削弱血小板功能、凝血功能等，最终形成广泛性紊乱，并损害动脉内膜，增加动脉粥样硬化、冠心病风险[10]。近年来，我国糖尿病、冠心病患病率逐年增高，冠心病合并糖尿病在临床中也非常常见，这类疾病的发病机制非常复杂，且治疗难度大，预后欠佳[11]。

本研究发现与单纯糖尿病病人相比，冠心病伴糖尿病病人的血清miR-26a、miR-26b表达量显著增高，提示血清miR-26a、miR-26b表达量可能与该病的进展

过程相关。动物实验表明，冠心病小鼠血清miR-26a表达量较正常小鼠明显上调[12]，与本研究结论相似。李肖肖[13]研究显示，miR-26a对血管平滑肌细胞有调节作用，前者通过对后者的增殖、迁移等进行调节，从而促进动脉粥样硬化发生。另有研究发现，miR-26a对细胞凋亡、分化有抑制作用，而对血管平滑肌细胞增殖有促进作用，导致冠心病患病风险增加[14]。miR-26b也与冠心病伴糖尿病进展存在关联，研究表明，糖尿病小鼠肾皮质内miR-26b呈高表达水平，而miR-26b易引起心肌细胞肥大，造成心肌损害[15]。由此可见，miR-26a、miR-26b过表达对冠心病伴糖尿病病人病情影响较大。通过绘制ROC曲线模型发现血清miR-26a、miR-26b表达量对冠心病合并糖尿病具有一定预测价值。miR-26a、miR-26b已在上述研究中证实其在冠心病合并糖尿病病人中呈高表达。国外研究也发现，miR-26a、miR-26b等多种miRNA在动脉粥样硬化中异常上调，有利于为临床诊断提供依据[16]。

糖尿病与冠心病存在相同病理基础，即慢性炎症。在这类病人慢性炎症进展过程中，IL-6、TNF-α均发挥着重要作用，其中IL-6能使单核细胞移至血管内皮下，而TNF-α能提高血管内皮细胞通透性，二者均能促进动脉粥样硬化形成[17]。本研究Pearson线性相关分析提示，血清miR-26a、miR-26表达量与病人血清IL-6、TNF-α无明显相关性，这表明虽然4项指标均参与了这类疾病的进展过程，但彼此间未见明显关联性。

本研究证实冠心病合并糖尿病病人血清miR-26a、miR-26b较单纯糖尿病病人显著上调，且二者对冠心病伴糖尿病的预测存在较高价值，临床可将其作为这类病人的重点观察指标，但二者与血清IL-6、TNF-α未见明显相关性。本研究局限性在于纳入样本量少，未来将扩大样本量对此进行进一步论证。