CD4+CD25+FoxP3+T细胞调节性T细胞以及Th17细胞与Graves病的关系研究*

周晓静 李卫鹏

蚌埠医学院第一附属医院核医学科，安徽 蚌埠 233000

毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)是一种特异性自身免疫疾病，主要表现为甲状腺激素水平上升，主要特征为甲状腺自身抗体阳性、弥漫性甲状腺肿、高甲状腺素血症、突眼等。该病发病机制复杂，与遗传、感染、压力等因素均密切相关，可引起免疫功能紊乱，并损伤免疫耐受功能，使免疫细胞、成分破坏自身正常组织结构及功能[1]。但目前，临床上对自身免疫反应发生的原因尚未完全明确。本研究将分析Th17细胞、CD4+CD25+FoxP3+T细胞与Graves病临床状态的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年11月—2019年4月，在我院治疗的50例Graves病患者，所有患者均符合《内科学》(第7版)的诊断标准。将其中未使用过抗甲状腺药物治疗的22例患者作为初发组，其中，男性8例，女性14例，年龄24～50岁，平均年龄(37.59±5.45)岁。将使用抗甲状腺药物治疗超过6个月、甲状腺功能恢复的28例患者作为缓解组，其中，男性9例，女性19例，年龄23～49岁，平均年龄(36.95±6.17)岁。同时，选取同期健康体检者50例作为对照组，其中，男性17例，女性33例，年龄23～51岁，平均年龄(37.07±6.36)岁。

1.2 方法

初发组及缓解组Graves病患者、对照组健康人群均予以Th17细胞、CD4+CD25+FoxP3+T细胞检测，指定同一名高年资、高职称实验室检验人员严格按照仪器设备及试剂相关要求完成操作。

1.2.1CD4+CD25+FoxP3+T细胞检测 利用FITC对抗CD4抗体予以标记、PE-Cy5对抗CD25抗体予以标记、PE对抗FoxP3抗体予以标记、PerCP对抗CD3抗体予以标记，PE对抗FoxP3抗体同型对照予以标记，上述抗体均由BD公司提供。细胞内染FoxP3分子方法如下：将分离获得淋巴细胞首先加入CD3抗体、CD4抗体、CD25抗体(上述抗体分别由PerCP、FITC、PE-Cy5标记)，之后经固定、破膜30 min后加入FoxP3抗体(经PE标记)。细胞标记完成后利用流式细胞仪(由BD公司提供，型号：FACS Caliber)检测及配套专用软件(版本号：Cellquest 3.0)分析。

1.2.2Th17细胞检测 利用酶联免疫吸附实验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)检测Th17细胞相关因子IL-17(白介素-17，Interleukin-17)水平，人IL-17 ELISA试剂盒由Biosource公司提供，实验中设立阴性、空白对照。

1.3 评价标准

对比各组患者的CD4+CD25+FoxP3+T细胞Treg细胞、Th17细胞水平。

1.4 统计学方法

2 结 果

初发组患者CD4+CD25+Tr细胞水平明显低于对照组，Th17细胞高于对照组(P<0.05)；缓解组患者的CD4+CD25+Tr细胞水平与对照组无明显差异(P>0.05)，见表1。

表1 各组患者淋巴细胞亚群水平对比

3 讨 论

Graves 病属于自身免疫性甲状腺疾病，是导致甲亢的主要原因，占比约为85%。在普通人群中，Graves 病发病率较低，约为1%，且多为家族聚集性发病，多见于女性。研究发现，免疫性甲状腺疾病免疫病理与细胞因子具有相关性，对甲状腺细胞，细胞因子具有免疫调节、免疫稳定等作用。细胞因子对炎症、内分泌、免疫均具有调节作用，例如白细胞介素(IL)、干扰素(IFN)、集落刺激因 子(CSF)、肿瘤坏死因子(TNF)等，当细胞因子失衡后，可引起免疫功能紊乱，并导致甲状腺滤泡上皮细胞分化异常。

CD4+CD25+Tr具有维持免疫稳态的作用，可对机体免应答进行负调节，避免产生自身免疫，是预防自身免疫性疾病的重要细胞，当其数量、功能、分子表达发生异常时，均可能诱发自身免疫病。有研究证明，系统性红斑狼疮、1型糖尿病患者均存在CD4+CD25+Tr细胞水平下降情况。Th17细胞是CD4+T 细胞亚群，其功能受多种细胞因子调节。研究发现[2]，人体Th17细胞分化为IL-113 、TGF-β共同诱导，并会受IL6 增强。已有研究证实[3]，Th17 细胞可分泌IL-17，在感染性疾病、自身免疫性疾病发病过程中具有参与。有学者指出[4-5]，Th17 细胞功能及分化与CD4+CD25+Tr存在相互抑制的关系，在维持免疫防御、免疫稳态方面发挥了重要作用。在本次研究中，CD4+CD25+Tr细胞水平明显低于对照组，Th17细胞高于对照组，(P<0.05)，提示CD4+CD25+Tr、Th17在Graves病发病、发展过程中具有参与。从Graves病发生机制上看，主要为免疫系统识别自己或非己的机制异常引起，部分自身反应性T细胞可识别外周组织抗原，并破坏正常组织结构及功能，从而引起自身免疫反应。从本次研究结果上看，初发Graves病患者的CD4+CD25+Tr水平明显低于正常人，而Th17细胞水平高于正常人，表明在发病过程中，CD4+CD25+Tr细胞处于缺乏状态，而Th17细胞大量产生，导致免疫稳定失调。经过一段时间治疗后，CD4+CD25+Tr水平有所上升，但仍低于正常人，表明患者尽管甲状腺功能恢复，但免疫系统尚未完全恢复。以往有研究显示[6]，Graves病患者的CD4+CD25+Tr细胞水平明显低于正常人，且效应因子TGF-β、FoxP3 表达也低于正常人，认为CD4+CD25+Tr数量减少可能在Graves病发病过程中扮演了重要角色，与本次研究结果一致。

综上所述，CD4+CD25+Tr、Th17可能参与了Graves病发病过程。