男性乳腺癌石蜡组织提取DNA个体识别1例
2019-12-13毛小慧蒋志霞王尧淇
毛小慧 申 文 蒋志霞 王尧淇
1.黄河中心医院河南唯实司法鉴定中心，河南 郑州 450000；2.河南申友医学检验所有限公司，河南 郑州 450000
一、案例
(一)案由
被鉴定人赵某，男性，59岁，单位体检时偶然发现右胸包块，行穿刺组织病理学活检，诊为乳腺癌。由于医学理论常识有限，赵某家属认为男性没有罹患乳腺癌的可能性，体检所在医院在做组织病理学检查取材时可能错拿样本，因此赵某家属认为该医院诊断结果存在差错。同时赵某家属希望能够避免再次穿刺确定组织病理学诊断结果的准确性，同时可以对被鉴定人赵某隐瞒病情，防止赵某因情绪失控出现意外，故将被鉴定人赵某血样及组织病理切片送至我鉴定中心进行DNA个体识别鉴定。
(二)检测方法
1.石蜡组织切片脱蜡
取未染色组织切片3张，将组织片刮下置于1.5ml离心管中，加入1.0ml二甲苯，震荡混匀，56℃水浴10min以上，14000转离心1min以上，弃上清，重复一次；加1.0ml无水乙醇，震荡混匀，14000离心1min以上，弃上清，重复一次；轻弹离心管底部，将沉淀打散，轻微打开离心管盖，将离心管置于100℃金属恒温浴内烘干。
2.样本DNA提取及扩增分析
采用QIAamp@石蜡组织DNA专提试剂盒(QIAamp@DNA FFPE Tissue Kit)，按照说明书中规定的方法提取石蜡切片组织DNA，按照《法庭科学DNA实验室检验规范》(GA/T 383-2014)、《法医生物检材的提取、保存、送检规范》(GA/T 1162-2014)及《法庭科学人类荧光标记STR复合扩增检测试剂质量基本要求》(GA/T 815-2009)标准规范中的方法，应用PowerPlex16HS试剂盒对提取的石蜡切片组织DNA及血斑样本进行PCR复合扩增，扩增产物经ABI3500Dx型基因分析仪电泳分离和激光扫描分析，得到石蜡切片组织和血斑样本的常染色体STR分型结果。
(三)分型结果
1.石蜡组织DNA分型结果
2.血样DNA分型结果
(四)鉴定意见
D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、PentaE、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1P0、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、FGA等15个常染色体STR基因座均为人类遗传标记，具有人类种属特异性和组织同一性，联合应用可以进行个体识别同一认定，其累积个体识别机率值为1-4.7070×10-20。
本案中，组织病理石蜡切片常染色体STR分型与赵某血斑样本15个常染色体STR分型结果相同，经计算似然比率(LR)值为2.1245×1019，其数值大于全世界人口总数。根据目前DNA检测结果，支持送检组织病理石蜡切片组织与赵某血斑样本来自于同一个体。
二、讨论
DNA个体识别鉴定一般用于鉴别遗留在刑事案件案发现场的生物学检材是否为嫌疑人所留，被广泛应用于刑事案件侦查中。随着生物科学技术和人们认识水平的发展，近年来DNA个体识别被应用于日常民事案件或个人需求的案例也越来越多。本案例即个人向社会鉴定机构委托进行DNA个体识别鉴定，用于明确是否系男性亲属罹患乳腺恶性肿瘤，进行该鉴定避免了该病人再次进行组织穿刺或手术，同时也满足了病人家属对病人病情进行保密的需要。根据现有医学理论，由于男性也有乳腺组织，也有罹患乳腺患的风险，但发病率很低，十分罕见，所以广大人民群众受知识理论限制，普遍认为男性没有乳腺恶性肿瘤的发病可能，本次鉴定也只是社会司法鉴定机构受理DNA个体识别一个特例。而社会司法鉴定机构受理的DNA个体识别业务范围还涉及恶性肿瘤保险合同欺诈、因组织病理误诊而产生的医患纠纷、面目毁损的尸体认领及车辆驾乘人员的认定等。通过本次鉴定可以看到，DNA检测司法鉴定手段可以有效地对此类案件进行答疑解惑。
本案的关键技术环节在于从石蜡组织切片中提取DNA分子。石蜡组织切片制作过程涉及福尔马林固定、水洗、乙醇脱水、二甲苯透明、石蜡包埋等一系列过程，其中福尔马林、二甲苯等化学试剂对DNA分子具有明确的破坏作用，所以石蜡组织切片中提取DNA分子有一定技术难度[1]。石蜡组织的DNA分子提取必须经过脱蜡处理和提取两个步骤。主要脱蜡处理方法有：水浴脱蜡、微波脱蜡及二甲苯脱蜡。提取方法有：Chelex-100+试剂盒提取法、磁珠提取法、Chelex-100+磁珠纯化法等[2]。本案我们利用的是二甲苯对组织进行脱蜡后，利用QIAamp@石蜡组织DNA专提试剂盒(QIAamp@DNA FFPE Tissue Kit)提取石蜡组织切片中的DNA分子，利用PowerPlex16HS试剂盒将提取的DNA分子和血斑样本进行复合扩增，利用ABI3500Dx型基因分析仪电泳分离和激光扫描分析，得到的基因图谱分型良好，并且经过再次复核试验结果后，出具DNA个体识别鉴定意见。本次鉴定也再次印证了QIAamp@石蜡组织DNA专提试剂盒(QIAamp@DNA FFPE Tissue Kit)商业化试剂盒提取石蜡组织切片中DNA分子的有效性。
随着DNA分子检测技术的发展，社会司法鉴定机构在DNA检测“软硬件”方面已经足以胜任各方面需求，我国很多地方的DNA亲子鉴定、DNA个体识别鉴定甚至“市场化”，可以看出法医物证技术带给我们社会价值日益凸显，但同时我们也不难看出法医物证类鉴定行业在案件受理、风险控制及伦理法律责任方面仍有欠缺，所以社会DNA检测机构行业规范和法律法规的完善也迫在眉睫，希望行业协会及相关行政管理部门予以重视，为维护司法公正和社会和谐创造有利政策条件。
