鸡传染性喉气管炎病毒的分离和鉴定

李伟，刘冬冬，吴丹，李春辉

（⒈吉林省动物疫病预防控制中心 长春 130062；⒉永吉县西阳镇畜牧兽医站 吉林吉林 132100）

鸡传染性喉气管炎（ILT）是一种接触性病毒性传染病，主要是通过呼吸道和消化道感染，患病鸡和带毒鸡是主要的传染源，鸡传染性喉气管炎病毒（ILTV）感染后有6～12 d 的潜伏期，病程达7～15 d，感染康复后的鸡可以长期带毒排毒，成为本病的重要传染源[1]。临床上鸡传染性喉气管炎病毒在同群传播较快，所以，发病鸡一定要早期隔离和诊断，本文成功分离并鉴定了一株鸡传染性喉气管炎病毒，将分离和鉴定过程介绍如下。

1 发病情况

某蛋鸡场饲养蛋鸡2,000 只，2019 年5 月，开始出现蛋鸡产蛋下降，病鸡出现呼吸困难，流鼻液和眼泪，咳嗽，呼吸道有带血的黏液，蛋鸡采食下降，精神沉郁，产蛋品质下降，蛋壳薄，鸡蛋形状不规则，发病鸡死亡率10%左右。

2 病理剖检

取病死蛋鸡剖检可见喉头黏膜有出血点，气管黏膜充血、出血并有大量黏液，肺充血、出血，肝脏具有出血点，其它脏器病变特征不明显。

3 实验室诊断

3.1 PCR 检测

无菌取病死鸡的喉头和气管等病变组织，按1:3 比例加入灭菌生理盐水，用研磨器研磨成组织匀浆，离心机12,000r/min 离心15 min。吸取上清液做PCR 检测，并保存一部分上清液用于病毒分离。按照参考文献[2]的方法进行鸡传染性喉气管炎病毒的PCR检测，PCR 产物跑核酸电泳观察，结果表明PCR 扩增片段大小690 bp 左右，与预期大小一致，说明鸡传染性喉气管炎病毒核酸阳性。

3.2 病毒分离

将上面保存的组织上清液用0.45 μm 滤膜过滤除菌，尿囊膜途径接种10 日龄SPF 鸡胚10 枚，0.2 mL/胚，同时选择10 枚SPF鸡胚接种灭菌生理盐水作为空白对照，接种后的鸡胚放置在37 ℃温箱培养，每天照蛋观察鸡胚存活情况，死胚随时取出，剖检死胚的病变情况，接种后144 h 收集接种病毒鸡胚的尿囊膜和尿囊液，作为第1 代分离毒，按照同样的方法连续接种SPF 鸡胚并传至第3 代分离毒。每一代鸡胚分离毒经PCR 检测均鸡传染性喉气管炎病毒核酸阳性，每一代鸡胚分离毒在鸡胚尿囊膜上均呈现出痘斑病变，尿囊膜增厚明显，胚体表面有出血点，气管粘膜有出血和充血，而接种生理盐水的对照组鸡胚没有死亡和病变。

4 讨论

鸡传染性喉气管炎病毒在自然情况下主要感染鸡，各种鸡都易感，根据临床表现分为喉气管炎型和结膜型。喉气管炎型的主要临床表现为呼吸困难，咳嗽带血，血痰，喉头出血。结膜型的主要临床表现为眼结膜红肿，发炎，流泪，眼部有脓性分泌物，蛋鸡产蛋下降[3]。发生鸡传染性喉气管炎病毒感染后应该及时隔离病鸡，应用抗生素治疗防止发生继发感染，健康鸡群及时接种鸡传染性喉气管炎病毒疫苗，养鸡场内外彻底消毒，防止病毒扩散传播。鸡传染性喉气管炎病毒疫苗一般采用滴鼻、点眼的方式进行疫苗免疫接种，在进行疫苗免疫接种时防止发生遗漏，在没有发生过鸡传染性喉气管炎病毒感染的养鸡场可以不进行疫苗免疫接种，在鸡传染性喉气管炎病毒高发地区应该做好疫苗的免疫接种工作，疫苗免疫接种应该严格按照操作说明进行，确保免疫剂量，以免发生免疫失败[4]。鸡传染性喉气管炎病毒在一年四季都可以发生，成年鸡感染后症状较重，雏鸡感染后临床表现轻，为了预防鸡传染性喉气管炎病毒感染，一定要加强鸡群的饲养管理，采取全进全出的养殖模式，早期诊断对于防控鸡传染性喉气管炎病毒十分重要，所以要定期观察鸡群的临床表现，出现呼吸困难的病鸡要立即隔离，并采集病鸡的喉头气管分泌物送实验室进行PCR 诊断，PCR 检测方法是进行早期诊断的最好方法，可以对潜伏感染期的病毒进行检测，有助于鸡传染性喉气管炎病毒的早期诊断。鸡传染性喉气管炎病毒的发生与鸡舍的养殖环境密切相关，鸡舍要定期通风换气，降低饲养密度，降低舍内粉尘和氨气浓度[5]。由于康复鸡可以带毒排毒，所以康复鸡不能与易感鸡群混合饲养，康复后也应该淘汰处理。总之，鸡传染性喉气管炎病毒是一种严重的急性呼吸道病毒传染病，其发生和流行十分普遍，目前呈世界性分布，在养殖场发病后会导致鸡死亡和蛋鸡产蛋下降，严重危害养鸡业发展，造成巨大经济损失，所以在规模鸡场一定要做好鸡传染性喉气管炎病毒的防控，严防本病的发生和流行。