卡介菌多糖核酸对寻常型白癜风患者外周血Treg细胞的影响

郭利平 牛瑞兵 东晓仙 郭隽

摘要：目的  探讨卡介菌多糖核酸BCG-PSN联合308 nm准分子光对寻常型白癜风患者外周血Treg细胞的影响。方法  选取2013年9月～2017年5月我院收治的寻常型白癜风患者120例设为治疗组，采用随机数字表法分成Ⅰ组和Ⅱ组，各60例。Ⅰ组采用308 nm准分子光单独治疗，Ⅱ组联合卡介菌多糖核酸肌注。另选取同期我院健康体检者30例作为对照组，比较治疗组与对照组外周血Treg细胞比值、治疗组不同分期外周血Treg细胞比值、各组治療前后外周血Treg细胞比值以及Ⅰ组和Ⅱ组治疗总有效率。结果  治疗组外周血Treg细胞比值低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;进展期外周血Treg细胞比值低于稳定期，差异有统计学意义（P<0.05）;与对照组比较，Treg细胞比值均降低，且进展期下降更明显;治疗后Ⅰ组、Ⅱ组Treg细胞比值均较治疗前升高，且Ⅱ组升高更为明显，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后Ⅰ组Treg细胞比值低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05）;Ⅱ组治疗总有效率高于Ⅰ组，差异有统计学意义（P<0.05）。结论  BCG-PSN可以通过增加Treg细胞水平提高患者细胞免疫功能，临床疗效确切，安全性高，不良反应少，值得临床应用。

关键词：寻常型白癜风;卡介菌多糖核酸;Treg细胞

中图分类号：R758.41                                 文献标识码：A                                DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.20.022

文章编号：1006-1959（2019）20-0082-03

Effect of BCG-polysaccharide Nucleic Acid on Peripheral Blood Treg Cells

in Patients with Vitiligo Vulgaris

GUO Li-ping，NIU Rui-bing，DONG Xiao-xian，GUO Jun

Abstract：Objective  To investigate the effect of BCG-PSN combined with 308 nm excimer light on peripheral blood Treg cells in patients with vitiligo vulgaris.Methods  120 patients with vitiligo vulgaris admitted to our hospital from September 2013 to May 2017 were enrolled in the treatment group. They were divided into group I and group II by random number table， 60 cases each. Group I was treated with 308 nm excimer light alone， and group II was combined with BCG polysaccharide nucleic acid. In addition， 30 healthy subjects in our hospital were selected as the control group. The ratio of peripheral blood Treg cells in the treatment group and the control group， the ratio of Treg cells in the peripheral blood of the different treatment groups， the ratio of Treg cells in the peripheral blood of each group before and after treatment， and the groups I and II. The total effective rate of treatment in the group.Results  The ratio of Treg cells in the peripheral blood of the treatment group was lower than that of the control group ， the difference was statistically significant（P<0.05）. The ratio of Treg cells in the peripheral blood was lower than that in the stable phase， the difference was statistically significant（P<0.05）. Compared with the control group， the ratio of Treg cells decreased， and the progression decreased. Obviously， the ratio of Treg cells in group I and group II increased after treatment， and the increase in group II was more significant ， the difference was statistically significant（P<0.05）. The ratio of Treg cells in group I after treatment was compared with the control group， the difference was statistically significant（P<0.05）. The total effective rate of group II was higher than that of group I ， the difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion  BCG-PSN can improve the cellular immune function of patients by increasing the level of Treg cells. The clinical efficacy is clear， the safety is high， and the adverse reactions are few， which is worthy of clinical application.

Key words：Vitiligo vulgaris;BCG polysaccharide nucleic acid;Treg cells

白癜风（vitiligo，Vt）是一种常见的获得性色素脱失症，治疗难度较高，严重影响患者的生活质量，近年来，随着免疫学的发展和实验技术水平的不断提高，对白癜风尤其是寻常型白癜风发病机制的研究逐渐深入。Treg细胞参与白癜风的自身免疫機制的探索是近年来临床研究的热点之一[1-3]。卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）是一种具有多种调节免疫功效的物质，其作用机制主要是诱导T淋巴细胞增殖活化，增强自然杀伤细胞的活性等[4]，本研究采用BCG-PSN联合308 nm准分子激光治疗白癜风，测定治疗前后Treg细胞等因子的变化，进一步观察BCG-PSN对白癜风的自身免疫功能的调节作用及治疗效果，现报告如下。

1资料与方法

1.1一般资料  选取2013年9月～2017年5月鄂尔多斯市中心医院收治的寻常型白癜风患者120例设为治疗组，其中女66例，男54例;病程：15 d～30年;年龄5～64岁;临床分型：局限性38例，散发性26例，泛发性25例，肢端性31例;皮损分布于头皮、面、耳后、前胸、腰、背、腿、手足等部位。临床分期：进展期71例，稳定期49例。采用随机数字表法分为308 nm准分子光组（Ⅰ组）和联合治疗组（Ⅱ组），各60例。Ⅰ组男性27例，女性33例;年龄5～60岁，平均年龄（29.01±0.50）岁。Ⅱ组男性27例，女性33例;年龄6～64岁，平均年龄（29.02±0.31）岁。另外选取健康体检者30例作为对照组，男性15例，女性15例;年龄5～60岁，平均年龄（30.01±0.20）岁。各组年龄、性别比较，差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。

1.2纳入及排除标准

1.2.1纳入标准  诊断为寻常型白癜风的患者且愿意配合治疗及化验者。

1.2.2排除标准  ①患有免疫系统疾病、严重心肝肾功能障碍、器官衰竭、恶性肿瘤;②近1个月内接受过紫外线、皮质类固醇激素、免疫抑制剂、光感药物等治疗者。

1.3试剂及仪器  荧光标记单克隆抗体CD4-FITC、CD25-APC、Foxp3-PE及同型对照小鼠IgGl-FITC、IgGl-APC、IgGl-PE、破膜固定液、淋巴细胞分离液及荧光标准微球均购自美国BD公司。流式细胞仪FACSCalibur为美国BD公司所生产。

1.4标本采集和检测  所有对象于清晨空腹抽取肘静脉血2 ml，用枸橼酸钠抗凝剂抗凝，2 h内送检。采用Ficoll密度梯度离心法分离单一核细胞，调整细胞数为10×l06/ml，检测时每个标本取两管，一管为同型对照，一管做检测。向这两管中分别加入100 μl细胞悬液，然后检测管加CD4-FITC及CD25-APC各10 μl荧光标记单抗，同型对照管加小鼠IgGl-FITC及IgGl-APC各10 μl，混匀后室温避光孵育15 min;PBS洗涤后，固定破膜，然后同型对照管加IgGl-PE、检测管加Foxp3-PE抗体各   10 μl，混匀后室温避光孵育15 min。PBS洗涤后，重悬细胞，立即上流式细胞仪进行测定。对淋巴细胞群设门，每次获取设门内10000个细胞，并用CellQuest软件分析数据。Treg细胞以CD4+CD25+Foxp3+T细胞/CD4+T细胞比值表示。

1.5治疗方法  治疗组于初次就诊时检测Treg细 胞比值，Ⅰ组给予308 nm准分子光局部治疗， 2次/周。Ⅱ组在Ⅰ组基础上给予卡介菌多糖核酸（BCG-PSN）（湖南斯奇生物制药有限公司，批号：S20020019）肌肉注射，0.35 mg/次，隔日1次，均连续治疗3个月，每2周复查1次，记录观察皮损变化和不良反应。治疗结束后再次检测Treg细胞比值，对照组体检时行Treg细胞的检测。

1.6疗效判定标准  ①痊愈：白斑全部消退;②显效：白斑消退面积≥50%;③有效：白斑部分消退，消退面积10%～50%;④无效：白斑消退面积<10%。总有效率=（痊愈+显效）/总例数×100.00%[4]。

1.7统计学方法  采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料用（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料用[n（%）]表示，组间比较采用？字2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1治疗组与对照组外周血Treg细胞比值比较  治疗组外周血Treg细胞比值低于对照组，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2治疗组不同分期外周血Treg细胞比值比较  进展期外周血Treg细胞比值低于稳定期，差异有统计学意义（P<0.05）;与正常对照组比较，Treg细胞比值均降低，且进展期下降更明显，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

2.3各组治疗前后外周血Treg细胞比值比较  治疗后Ⅰ组、Ⅱ组Treg细胞比值均较治疗前升高，且Ⅱ组升高更为明显，差异有统计学意义（P<0.05）;治疗后Ⅰ组Treg细胞比值与对照组比较，差异有统计学意义（P<0.05），治疗后Ⅱ组与对照组比较，差异无统计学意义（P>0.05），见表3。

2.4Ⅰ组和Ⅱ组治疗总有效率比较 Ⅱ组总有效率高于Ⅰ组，差异有统计学意义（P<0.05），见表4。

3讨论

白癜风是世界公认的三大皮肤顽症之一，困扰全世界5000万以上的患者。由于病因不明，发病机制复杂，目前尚无十分有效的根治方案。根据白斑分布特点不同可将白癜风分为节段型和寻常型，节段型白癜风的白斑常沿单侧皮神经节段支配的皮肤区域分布，其发病率较低，约占10%;寻常型白癜风根据白斑分布部位及面积不同又可再分为局限性、散发性、泛发性和肢端性[5]。目前认为节段型白癜风和寻常型的发病机制并不相同，节段型白癜风的发生主要与神经因素相关，而寻常型的发病机制尚未明确，但多项证据支持自身免疫因素参与该型的发病[6]。

调节性T细胞（regulatory T cells，Treg）是一类具有负调节作用的T细胞亚群，包括在胸腺内分化成熟后直接迁移到外周的自然调节T细胞（nTreg）和外周初始T细胞经转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）等细胞因子诱导分化的适应性调节T细胞（iTreg）。Treg的表型为CD4+CD25+Foxp3+。Treg细胞可以抑制CD4+T细胞和CD8+T细胞的活化与增殖，达到负调节作用，同时Treg还可以分泌具有抑制作用的细胞因子TGF-β、IL-10等，抑制多种免疫细胞达到免疫负调节作用[7]。Treg及其分泌的细胞因子的减少，可增加自身反应性T细胞的应答。白癜风患者的血清TGF-β水平比健康组有明显下降，TGF-β水平的下降导致Treg细胞成熟减少，从而抑制炎症的作用受损，有利于白癜风的发生，TGF-β水平的下降可能是CD8+T细胞反应引起的[8]。本研究结果显示，进展期的寻常型白癜风患者体内Treg细胞比值低于对照者（P<0.01），与多数研究[9，10]结果相似。另有研究显示[11]，患者体内Treg细胞比值高于正常人，这可能与研究对象、实验方法及淋巴细胞的时间生物学效应不同有关。另外，处于不同病程、分期、分型、皮损部位的患者T淋巴细胞变化亦不同。

BCG-PSN是新一代卡介菌提取物，由多糖及核酸等多种免疫活性物质制成，其主要作用机制是通过增强多种免疫细胞的免疫功能及其合成分泌的免疫分子发挥双向调节作用[12]。通过激活并增强单核-巨噬细胞功能、稳定肥大细胞减少其释放的活性物质、增强自然杀伤细胞（NK）的活性、刺激网状内皮系统、提高血清C3含量等，从而增强体内的细胞免疫、调节体液免疫、增强机体抗病能力[4]。本研究中发现，在308 nm准分子激光治疗的基础上加用卡介菌多糖核酸肌注可以收到良好的效果，总有效率明显提高（？字2=3.34，P<0.05）。与单独308 nm准分子激光照射组比较，差异有统计学意义（P<0.05）。提示卡介菌多糖核酸治疗寻常型白癜风可以通过上调Treg细胞水平，使其恢复免疫的负调节作用，从而使体内的细胞免疫达到新的平衡状态，恢复免疫调节功能，最终使黑色素细胞免于T淋巴细胞的攻击。

综上所述，寻常型白癜风与自身免疫，尤其是细胞免疫功能紊乱密切相关，而BCG-PSN可以通过增加Treg细胞水平提高患者细胞免疫功能，临床疗效确切，安全性高，不良反应少，值得在临床 应用。

参考文献：

[1]Zhou L，Li K，Shi YL，et al.Systemic analyses of immunophenotypes of peripheral T cells non-segmental vitiligo：implication of defective natural killer T cells[J].Pigment Cell Melanoma Res，2012，25（5）：602-611.

[2]Tembhre MK，Parihar AS，Sharma VK，et al.Alteration in regulatory T cells and programmed cell death 1-expressing regulatory T cells in active generalized vitiligo and their clinical correlation[J].Br J Dermatol，2015，172（4）：940-950.

[3]王迪，苗青，王萍.白癜风患者血清中IL-33和TNF-α水平的研究[J].中国美容医学，2019，28（2）：91-93.

[4]李建英，刘津民，曹海育，等.卡介菌多糖核酸对白癜风的免疫调节作用[J].中华临床医师杂志，2015，9（12）：2426-2428.

[5]赵辨.中国临床皮肤病学[M].南京：江苏科学技术出版社，2013：1268-1273.

[6]卢保振，柏冰雪.调节性T细胞在白癜风发病中的研究进展[J].国际免疫学杂志，2016，39（1）：93-96.

[7]趙娟娟.ATO对SAA患者外周血中CD4+CD25+CD127low调节性T细胞比例的调节作用[D]. 郑州大学， 2018.

[8]Basak PY，Adiloglu AK，Ceyhan AM，et a1.The role of helper and regulatory.T cells in the pathogenesis of vitiligo[J].J Am Acad Derntatol，2009，60（2）：256-260.

[9]顾明生，刘海琴，赵婧.窄谱中波紫外线联合退白颗粒治疗白癜风疗效与患者CD4+CD25+Treg水平分析[J].皮肤病与性病，2017，39（2）：79-82.

[10]Lili Y，Yi W，Ji Y，et al.Global activation of CD8+ cytotoxic T lymphocytes correlates with an impairment in regulatory T cells in patients with generalized vitiligo[J].PLoS One，2012，7（5）：e37513.

[11]李泓馨，王华，高天文.寻常型进展期白癜风患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞检测[J].临床皮肤科杂志，2008，37（11）：714-716.

[12]王洋.卡介菌多糖核酸联合奥洛他定治疗慢性荨麻疹的临床疗效观察[D].大连医科大学，2018.

收稿日期：2019-7-31;修回日期：2019-8-10

编辑/宋伟