三种梅毒螺旋体抗体检测方法的应用分析

刘长秀 李静 赵辰娜

人类是梅毒螺旋体（TP）的唯一宿主，梅毒螺旋体可通过性传播、母婴传播、血液传播。人体感染梅毒螺旋体可造成多系统多脏器损害，对健康造成巨大危害。临床上选择敏感性高、特异性强的检测方法对及时诊断和治疗梅毒具有很重要的意义［1］。当前，有多种实验室的方法可用于梅毒的诊断，血清学方法依然是梅毒螺旋体诊断的主要方法，常见的血清学检测方法包括非梅毒螺旋体抗原血清学试验（TRUST、RPR）和梅毒螺旋体抗原血清学试验（CMIA、TPPA、ELISA和RT）［2］。如果非梅毒螺旋体抗原血清学试验和梅毒螺旋体抗原血清学试验同时为阳性时，可以诊断为现症梅毒或见于部分晚期梅毒治愈后的病人；如果非梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性、梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性，可出现以下三种情况：①极早期梅毒；②既往感染；③早期梅毒治愈后；如果非梅毒螺旋体抗原血清学试验阳性、梅毒螺旋体抗原血清学试验阴性，考虑梅毒血清学假阳性。在妊娠过程中发现的梅毒称妊娠梅毒，此时TP可通过胎盘或脐静脉传给胎儿，让所生婴儿患先天梅毒。梅毒孕妇极易出现流产、早产、死胎。妊娠合并梅毒患者必须要进行规范化治疗，在孕期尽早开始治疗一疗程，孕晚期再次治疗一疗程，对于既住感染的孕妇应立即给予一个疗程的治疗。鉴于我国近年来妊娠合并梅毒报告病例数越来越多［3］，因此采用高敏感性和高特异性的检验方法对于该病的确诊和治疗具有重要意义。本研究运用磁微粒化学发光法（CMIA）、明胶颗粒凝集试验（TPPA）、甲苯胺红血清不加热血清试验（TRUST）三种血清学检测方法，对梅毒患者的标本进行检测，并对检测结果进行分析，旨在为梅毒临床诊断检测方法的选择提供参考，现将结果报告如下。

材料与方法

一、材料

2018年1月1日至2018年10月31日9 480例梅毒螺旋体抗体检测样本，其中女性8 080例，男性1 400例；孕妇5 526例，非孕妇3 954例。

二、仪器与试剂

CMIA检测采用AutoLumoA2000 Plus全自动化学发光测定仪及配套的梅毒螺旋体试剂盒和质控品，TPPA法采用珠海丽珠试剂盒，TRUST法采用上海荣盛试剂盒，所有操作严格按照试剂盒说明书进行。

三、检测方法

1.CMIA法：采用双抗原夹心法进行检测，用TP抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记TP抗原制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原-抗体-酶复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与TP抗体的含量成正比。

2.TPPA法：将梅毒螺旋体（Nichols株）的精制菌体成分包被在人工载体明胶粒子上。这种致敏粒子和样品中的梅毒螺旋体抗体进行反应发生凝集，产生粒子凝集反应，由此可以检测出血清和血浆中的梅毒螺旋体抗体，并且可用来测定抗体效价。

3.TRUST法：采用VDRL抗原重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成，供在白色卡片上进行试验，以检测血清或血浆中反应素用，可作为梅毒病人的诊断和疗效之参考。

四、统计学处理

用SPSS 18.0软件对数据进行统计分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

结 果

9 480例梅毒螺旋体抗体磁微粒化学发光（CMIA）检测结果显示，TP抗体阳性214例，其中194例TPPA确认为阳性，CMIA和TPPA进行比较，假阳性率0.21%，阳性预测值90.6%，CMIA的S／CO值越大，TP确认率越高，S／CO值＜5的阳性标本确认率仅为50.0%，S／CO值＞9的标本，阳性确认率为98.3%（表1）。比较各S／CO组TPPA获得阳性率，S／CO值＝7～9和＞9的两组差异有统计学意义（表1）。对于CMIA筛查阳性的，TPPA阴性的20例人员进行随访，13例生产三月后CMIA和TPPA均检测为阴性，2例新生儿和1例儿童一月后CMIA和TPPA均检测为阴性，2例人流术后三月CMIA和TPPA均检测为阴性，1例老年妇女半年后仍然为CMIA阳性，TPPA阴性，还有一例失去联系，未继续随访。9 480例梅毒螺旋体抗体检查结果显示，孕期的假阳性率为0.27%，非孕期的假阳性率为0.13% （P＝0.114）（表2），这些结果表明孕期的假阳性率比起非孕期更高，但这些差异并无统计学意义。9 480例样本中，TPPA阳性194例，TRUST阳性46例（均未曾治疗）。经过规范治疗后，TPPA转阴0例，TRUST转阴44例，其中有2例虽未转阴，但TRUST滴度分别从1∶64和1∶32降至1∶1，这些数据表明，TRUST的滴度检测对于梅毒的诊断和疗效评价有重要的临床意义。

表1 194例TPPA阳性样本在CMIA法不同S／CO值组的分布

表2 孕期与非孕期假阳性率的差异

讨 论

CMIA为梅毒螺旋体特异性抗体定性检测试验，临界值为1，检测结果S／CO＜1为梅毒螺旋体特异性抗体阴性，检测结果S／CO≥1为梅毒螺旋体特异性抗体阳性，阳性样本需加做非梅毒螺旋体特异性抗体检测（TRUST），如果非梅毒螺旋体特异性抗体（TRUST）为阳性，再进一步检测非梅毒螺旋体特异性抗体（TRUST）滴度，对于梅毒的诊断和疗效的观察有重要的临床意义。梅毒螺旋体特异性抗体（CMIA）出现阳性结果时，要用TPPA复检，报告结果要综合考虑患者的年龄、病史以及临床表现，如果两者均为阳性才可给出阳性报告，这样可大大减少假阳性的发生［4］。CMIA阳性结果的S／CO值＜5的阳性标本确认率仅为50%，而S／CO值＞9的标本，TPPA 确认率为98.3%。CMIA 阳性结果的S／CO值越大，TPPA的确认阳性符合率也相应增加，该结果符合先前的研究报道［5］。某些疾病（如恶性肿瘤、心血管疾病、肝炎、自身免疫性疾病等）患者体内含有异嗜性抗体、自身抗体、类风湿因子、甲胎蛋白等，这些物质会与试剂中的抗原成分非特异结合，产生假阳性［6］；还有一些特殊人群（如孕妇、婴幼儿、老年人）因为生理和免疫的因素，产生的抗体和蛋白质也易导致结果出现假阳性［7］，因此要考虑患者的年龄、病史、临床信息等进行综合分析。