连续监测新发现HIV感染者外周血T淋巴细胞亚群变化对机会性感染的预测价值

黄 萍

(广西来宾市人民医院感染性疾病科，来宾市 546100，电子邮箱：hp175114130@163.com)

人获得性免疫缺陷综合征(acquired immune deficiency syndrome，AIDS)又称艾滋病，是由人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)侵犯人体的免疫器官及系统，使机体免疫功能受损，进而出现各种机会性感染(opportunistic infections,OIS)的临床综合征[1]。随着现代社会不断发展，人口流动速度不断加快，HIV感染已经到了广泛流行的快速增长期。截至2016年9月30日，我国存活的HIV感染者共384 384例[2]，位居全球第14位，亚洲第2位[3]，HIV感染正在严重威胁我国居民身体健康与安全。HIV感染者大多因免疫抑制诱发各种OIS或肿瘤而死亡[4]，其中呼吸道(尤其是肺脏)是发生OIS最常见的部位。HIV感染者合并OIS则提示患者已发展为AIDS，大大增加了治疗的难度，有研究显示，80%～90% AIDS患者不是死于AIDS疾病本身，而是死于OIS[5]。T淋巴细胞亚群是反映机体细胞免疫功能的重要指标之一，其表达水平是否能预测HIV感染者发生OIS的风险，目前仍缺乏相关报道。本研究通过连续监测新发现HIV感染者外周血T淋巴细胞亚群的表达状态，探讨T淋巴细胞亚群表达状态改变情况与OIS的相关性，为治疗、控制疾病进展及改善预后提供参考。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 回顾性分析2016年1月至2017年8月在我院感染性疾病科首诊发现的28例HIV感染者临床资料。其中男性20例，女性8例，年龄32～62(44.24±8.52)岁。纳入标准：(1)符合《艾滋病诊疗指南》[1]中的HIV感染诊断标准：① 血浆HIV-RNA阳性；② 患者无其他临床症状，可有全身淋巴结肿大；③ CD4+T淋巴细胞≥200个/μL。(2)血浆HIV-RNA阳性，经广西区或来宾市有确证资格的疾病预防控制中心，采用蛋白印迹试验确证。(3)无乙型肝炎及丙型肝炎者。(4)既往无肺结核及其他结核病病史。(5)连续监测期间未发生OIS者。排除标准：(1)不配合完成相关检测者。(2)既往合并肿瘤者。(3)过去1个月内接受过增强免疫相关治疗者。(4)符合AIDS诊断标准[1]，即血浆HIV-RNA阳性，HIV抗体阳性，且合并25种临床症状中一种或者多种者。根据患者在连续4次监测(入组后每月监测1次，共监测4次)后1个月内是否出现OIS进行分组，发生OIS 8例为OIS组，未发生OIS 20例为非OIS组。其中OIS组男性6例、女性2例，年龄36～62(44.45±9.48)岁；非OIS组男性14例、女性6例，年龄32～60(44.08±8.12)岁。两组性别、年龄比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 T淋巴细胞亚群检测：(1)样本制备。采用真空抗凝管(乙二胺四乙酸三钾)采集静脉血5 mL，标记患者姓名及检测时间。在旋涡器中等速度混匀(倒立/正立时间5 min)，使用开盖器打开试管盖，加入50 μL Zenker固定液(上海泽叶生物科技有限公司，生产批号：ZY131223)，抗凝全血试管颠倒混匀>5次，混匀后，在避光室温条件下孵育2 h，整个样本制备过程均在<25℃室温下进行，操作时间<48 h。(2)上机检测。采用美国BD公司生产的流式细胞仪(FACSCalibur)检测外周血CD4+T淋巴细胞，操作过程严格按照仪器说明书进行。(3)结果读取。记录血常规结果中淋巴细胞计数值和流式细胞术检测的CD4+T淋巴细胞亚群占比，计算出CD4+T淋巴细胞计数，CD4+T淋巴细胞计数=血常规结果中淋巴细胞计数×流式细胞术检测的CD4+T淋巴细胞亚群占比。入组后患者每月检测1次，共检测4次。

1.2.2 OIS诊断：参照《艾滋病诊疗指南》[1]中OIS的诊断标准：(1)持续发热时间超过1个月；(2)慢性腹泻时间超过1个月，且每日腹泻4～5次；(3)肿瘤；(4)中枢神经系统感染；(5)青年患者出现痴呆；(6)明确合并结核病、弓形体病、卡氏肺孢子虫肺炎等感染；(7)不明原因出现带状疱疹。符合上述7条中的2条及2条以上，即可诊断为OIS。

1.3 观察指标 详细记录患者每次检测的CD4+T淋巴细胞计数，△CD4+T淋巴细胞计数=前次检测的CD4+T淋巴细胞计数-后次检测的CD4+T淋巴细胞计数。其中△1=第1次检测的CD4+T淋巴细胞计数-第2次检测的CD4+T淋巴细胞计数，△2=第2次检测的CD4+T淋巴细胞计数-第3次检测的CD4+T淋巴细胞计数，△3=第4次检测的CD4+T淋巴细胞计数-第3次检测的CD4+T淋巴细胞计数。CD4+T淋巴细胞下降比例(%)=△CD4+T淋巴细胞计数/前次CD4+T淋巴细胞计数×100%。其中△1%=(第1次检测的CD4+T淋巴细胞计数-第2次检测的CD4+T淋巴细胞计数)/第1次检测的CD4+T淋巴细胞计数×100%，△2%=(第2次检测的CD4+T淋巴细胞计数-第3次检测的CD4+T淋巴细胞计数)/第2次检测的CD4+T淋巴细胞计数×100%，△3%=(第4次检测的CD4+T淋巴细胞计数-第3次检测的CD4+T淋巴细胞计数)/第3次检测的CD4+T淋巴细胞计数×100%。

1.4 统计学分析 应用SPSS 19.0软件进行统计分析。计量资料以(x±s)表示，重复测量资料采用重复测量方差分析；计数资料用率(%)表示，比较采用χ2检验。绘制受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线并计算曲线下面积，评价参数的预测价值。以P<0.05为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 两组CD4+T淋巴细胞计数比较 两组的CD4+T淋巴细胞计数比较，差异有统计学意义(F组间=12.652，P组间=0.024)，两组的CD4+T淋巴细胞计数均有随时间变化的趋势(F时间=7.285，P时间=0.039)，分组与时间有交互效应(F交互=6.124，P交互=0.043)。OIS组在第3次及第4次测量的CD4+T淋巴细胞计数均低于非OIS组(均P<0.05)。见表1。

表1 两组CD4+T淋巴细胞计数比较(x±s，个/μL)

注：与OIS组比较，*P<0.05。

2.2 两组CD4+T淋巴细胞计数△1、△2、△3比较 OIS组的△1、△2、△3均高于非OIS组(均P<0.05)。见表2。

表2 两组CD4+T淋巴细胞计数△1、△2、△3比较(x±s，个/μL)

2.3 两组CD4+T淋巴细胞计数下降比例△1%、△2%、△3%比较 OIS组的CD4+T淋巴细胞数量下降比例△1%、△2%、△3%均高于非OIS组。见表3。

表3 两组CD4+T淋巴细胞数量下降比例△1%、△2%、△3%比较(x±s，%)

2.4 各参数预测OIS发生的价值 分别对4次检测的CD4+T淋巴细胞计数及△1、△2、△3、△1%、△2%、△3%进行ROC曲线分析，发现△1、△2、△3、△1%、△2%、△3%的ROC曲线面积较大，同时特异度和灵敏度均较高。见表4。

表4 各参数的ROC曲线分析结果

3 讨 论

HIV感染人体后会破坏机体CD4+T淋巴细胞，导致CD4+T淋巴细胞数量减少及功能下降，最终发展成为AIDS，OIS或肿瘤的发生是HIV感染发展为AIDS患者的标志之一，同时也是造成AIDS患者死亡的主要原因。但从HIV感染发展至AIDS过程的个体化差异较大，短则0.5年，长则可达20年[6]。近年来，出现不同作用靶点、不同作用机制的抗HIV药物，可减少药物使用剂量及服用次数，给患者带来极大的便利，但治疗时机的选择仍然是个难题，若刚确诊HIV阳性就开始服用抗病毒药物治疗，则可能需要终生接受抗病毒治疗，这一方面增加了耐药发生的概率，另一方面抗病毒药物的毒副反应会影响患者的生活质量，同时还增加医疗资源的压力[7]。因此，如何在HIV感染者中鉴别出快速发展为AIDS的患者，并对这些患者进行有针对性治疗，延长其发展至AIDS的时间显得尤为重要。

本研究结果显示，两组的CD4+T淋巴细胞计数均有随时间变化的趋势(P<0.05)，但OIS组仅在第3次及第4次测量时的CD4+T淋巴细胞计数低于非OIS组(均P<0.05)，提示单次测量的CD4+T淋巴细胞计数对HIV感染者近期是否发生OIS的预测价值不高。分析其原因可能为：(1)HIV感染时间难以确定。HIV感染/AIDS患者的流行病学特征如年龄[8]、传播途径[9]、性别、民族、地区、感染时间等均会影响T淋巴细胞亚群的表达状态[10]，其中年龄、传播途径、性别、民族、地区等因素比较好明确，而HIV感染时间常难以确定[11]。(2)未感染HIV前的CD4+T淋巴细胞水平无法确定。彭庭海等[12]对342例湖北省健康青少年及成人进行CD4+T淋巴细胞检测发现，CD4+T淋巴细胞计数参考值为(865.73±289.97)/mm3，可见该参考值的范围较广，如果无法参考患者HIV感染前的CD4+T淋巴细胞水平，而直接根据患者HIV感染后的CD4+T淋巴细胞水平无法准确鉴别其是否会快速发展为AIDS。鉴于以上原因，本研究通过连续监测患者CD4+T淋巴细胞的动态改变，可以规避上述两个无法确定的因素。本研究中，OIS组的△1、△2、△3、△1%、△2%、△3%均高于非OIS组(均P<0.05)，且△1、△2、△3、△1%、△2%、△3%预测OIS发生的ROC曲线面积较大，同时特异度和灵敏度均较高，提示机体的免疫功能正在被破坏，免疫细胞数量进行性下降，患者发生OIS的风险增加，因此以上参数对HIV感染者近期是否发生OIS具有较大的预测价值。但本研究的样本量较小，今后仍需要增大样本量进一步研究证实本研究结论。

综上所述，CD4+T淋巴细胞计数下降幅度较大，可能提示新发现HIV感染者免疫功能受到破坏，其OIS的风险升高，需积极治疗。