采前喷施胺鲜酯对采后龙眼果实贮藏期间果皮活性氧代谢的影响

林毅雄，林河通,*，陈艺晖，王 慧，林艺芬,*

（1.福建农林大学食品科学学院，福建 福州 350002；2.福建农林大学农产品产后技术研究所，福建 福州 350002；3.亚热带特色农产品采后生物学（福建农林大学）福建省高等学校重点实验室，福建 福州 350002）

龙眼（Dimocarpus longan Lour.）俗称‘桂圆’，是一种著名的亚热带水果，主要种植在中国的南方地区如福建、广东、广西等，其具有较高食用品质和药用价值，深受人们的喜爱[1-7]。龙眼果实成熟于夏季高温、高湿季节，采后易发生品质劣变，在室温（25 ℃）下极不耐贮藏，一周左右全部腐烂，表现为果皮先发生褐变，后果肉自溶，最后整个果实腐烂变质[7-10]。这严重影响采后龙眼果实食用品质和商业价值，造成龙眼产业巨大经济损失，限制了其产业发展[11-14]。因此，龙眼果实采后保鲜成为产业发展和生产上亟待解决的难题。

前期研究认为，能量亏缺、病原菌侵染、外源活性氧（双氧水）处理会降低采后龙眼果实果皮超氧化物歧化酶（superoxidase dismutase，SOD）、过氧化氢酶（catalase，CAT）和抗坏血酸过氧化物酶（ascorbate peroxidase，APX）等活性氧清除酶活力，保持较高的还原型抗坏血酸（ascorbic acid，AsA）和还原型谷胱甘肽（glutathione，GSH）等内源抗氧化物质的含量，同时降低1,1-二苯基-2-三硝基苯肼（1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH）自由基清除能力和总还原能力，进而降低活性氧清除能力，导致活性氧和膜脂过氧化产物丙二醛（malondialdehyde，MDA）在细胞内的积累，最后使采后龙眼果实因活性氧代谢失调而降低其耐贮性[5,15-18]。何燕文等[19]研究发现，在采前1 周和采前1 d分别喷施6 g/L壳聚糖和质量分数20%高良姜提取液可提高采后龙眼果实果皮和果肉的SOD活力，降低果皮和果肉的MDA含量及果实的质量损失率和腐烂率，提高采后龙眼果实的耐贮性。据此认为，采后龙眼果实的耐贮性与活性氧清除系统的清除能力密切相关，同时其活性氧清除能力可以通过采前或采后处理措施进行调节。但是，目前对龙眼果实保鲜主要集中在采后处理，而采前处理较少。因此，很有必要开发采前管理措施控制采后龙眼果实活性氧代谢和提高其耐贮性的新型采前栽培技术。

胺鲜酯，化学名称为己酸二乙氨基乙醇酯（diethyl aminoethyl hexanoate，DA-6），是一种新型植物生长调节剂，其具有安全、无毒及使用简易等优点，同时可促进作物生长、提高产量及改善作物食用品质[20-21]。本课题组前期研究发现，采前喷施DA-6可有效降低采后贮藏期间龙眼果实呼吸强度，保持较高的果皮色素（叶绿素、类胡萝卜素、花色素苷、类黄酮）含量，及较高的果肉营养物质（可溶性固形物、可溶性总糖、蔗糖、VC）含量，提高龙眼果实耐贮性和保鲜效果，如延缓龙眼果皮褐变和果肉自溶的发生、降低果实质量损失率、保持较高的好果率[21]。但是，目前有关采前喷施DA-6对采后龙眼果实活性氧代谢的影响及其与耐贮性的关系鲜见报道。因此，本实验研究采前喷施DA-6对采后龙眼果实果皮活性氧代谢的影响，旨在为龙眼果实保鲜提供适用技术和科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

本实验基地选择在福建省安溪县龙眼科技示范果园，其果树树龄为8 年，选择生长较为一致并且树势中等的‘福眼’龙眼（Dimocarpus longan Lour. cv. Fuyan）果树进行采前喷施DA-6。

氮蓝四唑、甲硫氨酸、核黄素、对氨基苯磺酸、二硫代硝基苯甲酸、硫代巴比妥酸、邻菲罗啉和α-萘胺北京索莱宝科技有限公司；过氧化氢、抗坏血酸、三氯乙酸、盐酸羟胺、三氯化铁、乙醇、磷酸、乙二胺四乙酸、磷酸二氢钠、石英沙和碳酸钙 国药集团化学试剂有限公司；硫酸 北京化工厂。

1.2 仪器与设备

HH-4数显恒温水浴锅 国华电器有限公司；GL-20G-II高速冷冻离心机 上海安亭科学仪器有限公司；T6新世纪紫外-可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司；BSA224S电子天平 赛多利斯科学仪器（北京）有限公司。

1.3 方法

1.3.1 原料处理

本课题组前期预实验发现，龙眼果实采前喷施不同含量的DA-6（0～15 mg/kg），其最佳含量为10 mg/kg。因此，本实验在龙眼盛花期后70、90、110 d各喷施10 mg/kg DA-6 1 次，同时以喷施蒸馏水作为对照组，每一处理喷施6 株龙眼果树。

龙眼果实于盛花期后120 d采收，采收当天先在冷库预冷，之后用冷藏车3 h内运到福建农林大学农产品产后技术研究所（福州），经过精细挑选（选择大小均匀、色泽一致、无病虫、无损伤的健康果实）的龙眼果实用蒸馏水清洗并取出自然晾干，接着用聚乙烯薄膜袋包装（0.015 mm厚，50 个果实/袋），对照组和DA-6处理组各50 袋，然后在（28±1）℃、相对湿度80%下贮藏。贮藏期间每天取样，测定果皮O2-·产生速率、MDA含量、活性氧清除酶活力、内源抗氧化物质含量、DPPH自由基清除率和总还原力。

1.3.2 测定方法

1.3.2.1 果皮O2-·产生速率和MDA含量测定

O2-·产生速率测定：从10 个龙眼果实中取果皮1 g，参照林河通等[22]的方法测定，单位为nmol/（min·g）。

MDA含量测定：从10 个龙眼果实中取果皮1 g，参照Sun Junzheng等[18]的方法测定，单位为mmol/g。

1.3.2.2 果皮活性氧清除酶活力和酶蛋白质含量测定

酶液提取：从10 个龙眼果实中取果皮1 g，加入液氮研磨后转移到研钵中，加入适量磷酸盐缓冲液（50 mmol/L、pH 7.0）并在冰浴中研磨，使样品与提取液充分混匀，转入10 mL离心管并定容，在4 ℃、15 000×g下离心20 min，转移上清液并用磷酸盐缓冲液定容至20 mL，取上清液作为活性氧清除酶提取液。

SOD、CAT和APX活力测定：参照Sun Junzheng等[18]的方法测定；谷胱甘肽还原酶（glutathione reductase，GR）活力测定：参照朱广廉等[23]的方法测定。

酶蛋白质含量测定：按照考马斯亮蓝G250染色法[24]测定蛋白质含量，以牛血清白蛋白作标准曲线。

以上酶活力单位均为U/mg，结果以蛋白质量计。

1.3.2.3 果皮AsA和GSH含量测定

从10 个龙眼果实中取果皮组织1 g，参照Sun Junzheng等[18]的方法测定，单位为g/kg。

1.3.2.4 果皮DPPH自由基清除率和总还原能力测定

从10 个龙眼果实中取果皮组织1 g，参考Lin Yifen等[17]的方法测定DPPH自由基清除率和总还原能力，其单位分别为%和g/kg。

1.4 数据处理与分析

以上各指标测定均重复3 次，取其平均值；采用SPSS 17.0软件进行数据统计分析和T检验法进行显著性分析。

2 结果与分析

2.1 采前喷施DA-6对采后龙眼果实果皮O2-·产生速率和MDA含量的影响

图1 采前喷施DA-6对采后龙眼果皮·产生速率（A）和MDA含量（B）的影响Fig. 1 Effect of pre-harvest spraying of DA-6 on O2-· production rate (A)and MDA content (B) in pericarp of harvested longan fruit

由图1A可知，对照龙眼果实的果皮O2-·产生速率随采后贮藏时间的延长而缓慢增加；进一步比较发现，采前喷施DA-6可有效降低采后龙眼果实的果皮O2-·产生速率，且在采后同一贮藏时间，其果皮O2-·产生速率极显著低于对照龙眼果实（P＜0.01）。如在采收当天，采前喷施DA-6的龙眼果皮O2-·产生速率比对照龙眼果实低43.43%；贮藏至第6天时，采前喷施DA-6的龙眼果皮O2-·产生速率比对照龙眼果实低26.57%。

由图1B可知，对照龙眼果实的果皮MDA含量随采后贮藏时间的延长而逐渐升高；进一步比较发现，采前喷施DA-6可有效降低采后龙眼果实的果皮MDA含量，且在采后同一贮藏时间，其果皮MDA含量极显著低于对照龙眼果实（P＜0.01）。如在采收当天和贮藏的第6天，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮MDA含量分别比对照龙眼果实低47.83%和44.13%。

上述结果表明，采前喷施DA-6可降低采后龙眼果实的果皮O2-·产生速率和减少膜脂过氧化产物MDA的生成。

2.2 采前喷施DA-6对采后龙眼果实果皮活性氧清除酶活力的影响

图2 采前喷施DA-6对采后龙眼果皮SOD（A）、CAT（B）、APX（C）和GR（D）活力的影响Fig. 2 Effect of pre-harvest spraying of DA-6 on activities of SOD (A),CAT (B), APX (C) and GR (D) in pericarp of harvested longan fruit

由图2A可知，对照和采前喷施DA-6的采后龙眼果实果皮SOD活力在贮藏0～1 d快速升高，贮藏1 d之后不同处理组变化不同。其中，对照龙眼果实的果皮SOD活力在贮藏1～2 d急速下降，2～4 d缓慢升高，4～5 d缓慢下降，5～6 d急速下降；而采前喷施DA-6的龙眼果实果皮SOD活力在贮藏1～2 d急速下降，2～5 d变化不大，5～6 d快速下降。在整个采后贮藏期间，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮SOD活力都高于对照龙眼果实，两者间的差异达到显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）水平。如贮藏至第3天和第6天，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮SOD活力分别比对照龙眼果实高10.93%和23.51%。

由图2B可知，对照龙眼果实的果皮CAT活力在贮藏0～2 d快速升高，2～3 d急速下降，3～4 d基本保持不变，4～5 d急速上升，5～6 d急速下降；采前喷施DA-6的龙眼果实果皮CAT活力在贮藏0～2 d缓慢上升，2～3 d急速下降，3～4 d急速上升，4～5 d变化不大，5～6 d急速下降。进一步比较发现，采前喷施DA-6可保持采后龙眼果实较高的果皮CAT活力，且在采后同一贮藏时间，其果皮CAT活力显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于对照龙眼果实。如采收当天和贮藏至第6天，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮CAT活力分别比对照组龙眼果实高34.54%和16.95%。

由图2C可知，对照龙眼果实的果皮APX活力在贮藏0～1 d急速升高，1～4 d较慢下降，4～5 d快速升高，5～6 d急速下降；采前喷施DA-6的龙眼果实果皮APX活力在贮藏0～1 d变化不大，1～2 d急速升高，2～4 d快速下降，4～6 d缓慢下降。进一步比较发现，在采后同一贮藏时间，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮APX活力都显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于对照龙眼果实。如采收当天、贮藏第2天和第6天，采前喷施DA-6的龙眼果皮APX活力分别是对照龙眼果实的1.71、2.04 倍和2.06 倍。

由图2D可知，对照龙眼果实的果皮GR活力在贮藏前期（0～2 d）变化不大，2～4 d快速升高，4～5 d较慢下降，5～6 d急速下降；采前喷施DA-6的龙眼果实果皮GR活力在0～2 d较慢上升，2～3 d快速上升，3～5 d较慢下降，5～6 d急速下降。进一步比较发现，在采后同一贮藏时间，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮GR活力都极显著高于对照龙眼果实（P＜0.01）。如采后当天、贮藏中期（3 d）和贮藏后期（6 d），采前喷施DA-6龙眼果皮GR活力分别是对照龙眼果实的1.41、1.70 倍和1.41 倍。

上述结果表明，采前喷施DA-6可保持采后龙眼果实较高的果皮SOD、CAT、APX和GR等活性氧清除酶活力。

2.3 采前喷施DA-6对采后龙眼果实果皮内源抗氧化物质含量的影响

图3 采前喷施DA-6对采后龙眼果皮AsA（A）和GSH（B）含量的影响Fig. 3 Effect of pre-harvest spraying of DA-6 on contents of AsA (A)and GSH (B) in pericarp of harvested longan fruit

由图3A可知，采后龙眼果实的果皮AsA含量随采后贮藏时间的延长而逐渐下降。对照龙眼果实的果皮AsA含量下降速度快于采前喷施DA-6的龙眼果实。如贮藏第6天时，与采收当天相比，对照龙眼果实的果皮AsA含量下降了37.59%，而采前喷施DA-6的龙眼果实果皮AsA含量仅下降了8.37%。进一步比较发现，在采后同一贮藏时间，采前喷施DA-6的龙眼果皮AsA含量都显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于对照龙眼果实。如在采收当天和贮藏第6天，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮AsA含量分别是对照龙眼果实的1.06 倍和1.56 倍。

由图3B可知，采后龙眼果实的果皮GSH含量随采后贮藏时间的延长而逐渐下降。对照龙眼果实的果皮GSH含量在贮藏0～1 d变化不大，1～2 d急速下降，2～3 d较慢升高，3～5 d快速下降，5～6 d略有下降；采前喷施DA-6的龙眼果实果皮GSH含量在0～4 d缓慢下降，4～5 d急速下降，5～6 d变化不大。进一步比较发现，在采后2～6 d的同一贮藏时间，采前喷施DA-6的龙眼果皮GSH含量都显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于对照龙眼果实。如采后贮藏第3天和第6天，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮GSH含量分别比对照龙眼果实高13.30%和23.09%。

上述结果表明，采前喷施DA-6可有效延缓采后龙眼果实果皮内源抗氧化物质（AsA、GSH）含量的下降。

2.4 采前喷施DA-6对采后龙眼果实果皮DPPH自由基清除率和总还原能力的影响

由图4A可知，采后龙眼果实的果皮DPPH自由基清除率随采后贮藏时间的延长整体呈下降趋势。对照龙眼果实的果皮DPPH自由基清除率在贮藏0～1 d略有升高，1～2 d急速下降，2～5 d缓慢下降，5～6 d快速下降；采前喷施DA-6的龙眼果实果皮DPPH自由基清除率在贮藏0～1 d略有升高，1～2 d较快下降，2～6 d缓慢下降。进一步比较发现，在采后同一贮藏时间，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮DPPH自由基清除率都显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于对照龙眼果实。如采收当天、贮藏第3天和第6天，经采前喷施DA-6的龙眼果实果皮DPPH自由基清除率分别比对照龙眼果实高7.496%、21.03%和24.37%。

由图4B可知，对照龙眼果实的果皮总还原能力在采后贮藏0～1 d略有升高，1～2 d快速下降，2～4 d缓慢下降，4～6 d较快下降；采前喷施DA-6的龙眼果实果皮总还原能力在采后贮藏0～1 d略有升高，1～2 d较快下降，2～3 d快速下降，3～5 d缓慢下降，5～6快速下降。进一步比较发现，在采后同一贮藏时间，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮总还原能力都显著（P＜0.05）或极显著（P＜0.01）高于对照龙眼果实。如采收当天、贮藏第2天和第6天，采前喷施DA-6的龙眼果实果皮总还原能力分别比对照龙眼果实高6.25%、16.05%和18.52%。

图4 采前喷施DA-6对采后龙眼果皮DPPH自由基清除率（A）和总还原能力（B）的影响Fig. 4 Effect of pre-harvest spraying of DA-6 on DPPH radical scavenging ability (A) and total reducing power (B) in pericarp of harvested longan fruit

上述结果表明，采前喷施DA-6可延缓采后龙眼果实果皮DPPH自由基清除率和总还原能力的下降，并保持在较高水平。

3 讨 论

果蔬自身积累的活性氧可通过自身的活性氧清除系统清除，其活性氧清除系统包括活性氧清除酶系统（SOD、CAT、APX和GR）和非酶清除系统内源抗氧化物质（AsA和GSH）[5-6,15-18,25-30]。果蔬采后活性氧代谢强弱与果蔬的耐贮性有关。通常情况下，果蔬活性氧清除能力越强，则果蔬越耐贮藏；反之，果蔬活性氧清除能力越弱，则果蔬越不耐贮藏[5-6,15-18,25-30]。Sun Junzheng等[18]研究报道，焦腐病菌（Lasiodiplodia theobromae(Pat.) Griff. & Maubl.）侵染采后龙眼果实，会导致活性氧清除酶（SOD、CAT、APX）活力和内源抗氧化物质（AsA、GSH）含量快速下降，DPPH自由基清除率和总还原能力维持较低水平，使活性氧清除能力下降而积累大量活性氧和MDA，进而破坏细胞膜结构，最后导致龙眼果皮褐变和病害的发生。Lin Yifen等[17]研究报道，2,4-二硝基苯酚处理可降低拟茎点霉（Phomopsis longanae Chi）接种龙眼果实的果皮活性氧清除能力而积累大量活性氧和MDA，进而加快龙眼果皮褐变和病害的发生进程；而外源ATP处理可使拟茎点霉接种龙眼果实保持较高的果皮活性氧清除能力，从而减缓龙眼果皮褐变和病害的发生。此外，Lin Yifen等[15]研究报道，外源活性氧（过氧化氢）处理可降低龙眼果实的果皮活性氧清除能力而促进活性氧的产生和积累、促进膜脂过氧化产物MDA的产生，从而加快采后龙眼果实果皮褐变的发生；但外源活性氧清除剂（棓酸丙酯）处理可保持采后龙眼果实较高的果皮活性氧清除能力，从而减少活性氧产生和MDA积累，最后延缓采后龙眼果实果皮褐变的发生[16]。Chomkitichai等[31]研究认为，用二氧化氯熏蒸处理可提高采后龙眼果实果皮活性氧清除能力，进而减少活性氧在细胞内的积累，同时可以抑制脂质过氧化作用和保持较好的细胞膜结构，延缓衰老进程的速度，最后提高其耐贮性。张帆等[32]研究发现，采前喷施浓度为1 mmol/L的水杨酸可提高采后树莓果实DPPH自由基清除率和总抗氧化能力，从而提高采后树莓果实耐贮性。冯磊等[33]研究认为，在桃果树不同盛花期，采前喷施氯化锰和氯化钙可提高采后桃果实活性氧清除酶活力，而降低O2-·产生速率和MDA含量，进而提高采后桃果实耐贮性和贮藏品质。综上所述，采后果蔬的耐贮性与其活性氧代谢密切相关。由此可见，活性氧代谢强度可以通过采前或采后处理进行调节，从而控制采后果蔬的耐贮性和保鲜效果。DA-6作为一种新型植物生长调节剂，目前鲜见采前喷施DA-6对采后龙眼果实果皮活性氧代谢影响的报道。因此，本研究结果可为龙眼及其他果蔬采后保鲜提供新的科学依据。

本研究发现，与对照龙眼果实比较，采前喷施DA-6可提高采收当天和采后贮藏期间龙眼果实的果皮活性氧清除酶（SOD、CAT、APX、GR）活力和内源抗氧化物质（AsA、GSH）含量，保持较高果皮DPPH自由基清除率和总还原能力，降低果皮O2-·产生速率和MDA含量。联系到本课题组前期研究结果，采前喷施DA-6可以降低采收当天和采后贮藏期间龙眼果实呼吸强度、保持较高果皮色素含量及果肉营养物质含量，减少果皮褐变和果肉自溶，最后提高其耐贮性和保鲜效果[21]。据此认为，采前喷施DA-6可提高采后龙眼果实的耐贮性与其提高采收当天和采后贮藏期间果皮的活性氧清除能力有关。