不同月份桔梗中桔梗皂苷D 含量的比较

张雪娟，张 欣，王小莉，刘庆华，郭海利，张小民

（1.山西大学生命科学学院，山西太原030006；2.太原市食品药品检验所，山西太原030006；3.山西金科海生物科技有限公司，山西太原030006）

桔梗（Platycodon grandiflorus（Jacq.）A.DC）为桔梗科桔梗属多年生草本植物，别名僧帽花、土人参、苦梗菜[1-2]。桔梗作为药食同源的中药材，兼具药、食、观3 种用途，其主要药用价值有抗炎止痛、祛痰止咳、降血糖、血脂、抗肥胖及抑制肿瘤细胞增殖等功效[3-4]。桔梗资源在我国分布较广[5-6]。随着中药栽培技术的发展与桔梗需求量的增多，全国各地药圃也多见栽培[7]。桔梗根部药用活性成分种类较多，桔梗皂苷为其主要活性成分，桔梗皂苷D 是桔梗的质控对象[8-9]。研究表明，桔梗皂苷D 的含量受种植地区[10-12]、海拔高度[13]及采收期[14-15]的影响。桔梗皂苷D 含量的测定方法有很多[10-16]，但都围绕2015 版《中国药典》所记载的HPLC-ELSD 法展开。

本试验采用HPLC-ELSD 法测定了山西省盂县种植的2 年生桔梗在3—10 月根中桔梗皂苷D的含量，旨在确定该地区桔梗资源质量以及最佳采收时期。

1 材料和方法

1.1 试验材料

试验材料为2018 年3—10 月下旬在山西省盂县起耀中药材种植专业合作社采集的桔梗根部，经干燥后备用。桔梗皂苷D 标准品购自国家标准物质网；对照品桔梗购于药店。

1.2 试验方法

1.2.1 色谱条件 色谱柱为Kinetex C18（4.6 mm×100 mm，5 μm）；检测波长为210 nm；柱温为30 ℃；流速为0.5 mL/min；流动相为乙腈-水（体积比25∶75）。进样量为20 μL。

1.2.2 溶液配制

1.2.2.1 标准品溶液配制 精密称定标准品，加甲醇配制得每1 mL 含0.5 g 对照品的溶液，过0.45 μm微孔滤膜备用。

1.2.2.2 供试品溶液配制 供试品粉末过850 μm筛，称定1 g 置于锥形瓶中，加入CH3OH（50%，25 mL），进行超声处理（250 W，40 kHz，30 min），冷却至20 ℃，称质量，50%CH3OH 补质量，过滤，取续滤液，过0.45 μm 微孔滤膜备用。

2 结果与分析

2.1 桔梗皂苷D 标准品HPLC 分析

取桔梗皂苷D 标准品，质量浓度分别为5，10，20，25，50，100 μg/mL，在1.2.1 色谱条件下，测定不同质量浓度标准品的相对峰面积、相对保留时间，绘制标准曲线。在1.2.1 色谱条件下得桔梗皂苷D的HPLC 色谱图。

2.2 标准曲线的绘制

以桔梗皂苷标准品质量浓度（μg/mL）为横坐标、峰面积为纵坐标，绘制桔梗皂苷D 标准曲线，得回归直线方程为：y＝3.214 8x－0.522（R2＝0.999 5）（图1），标准品色谱图如图2 所示。

2.3 精密度试验

取5 μg/mL 的桔梗皂苷D 对照品溶液20 μL，在1.2.1 色谱条件下，重复5 次，测定含量，计算RSD值。结果表明，测得峰面积的RSD 为1.65%（n＝5）＜3%，说明该仪器的精密度良好。

2.4 稳定性试验

取8 月采集的中药桔梗供试样品1 g，分别在0，2，4，6，8，12 h 检测，检测条件同1.2.1，测定含量，并计算各RSD 值。测得峰面积的RSD 为1.13%（n＝6）＜3%，表明待测样品12 h 内稳定性较好。

2.5 重复性试验

取5 份8 月采集的中药桔梗供试样品1 g，在1.2.1 条件下，分别进样，进样量20 μL，测定含量，计算RSD 值。测得其RSD 为1.23%（n＝5）＜3%，表明样品的重现性良好。

2.6 加样回收试验

取5 份8 月采集的中药桔梗供试样品1 g，加入1.25 mg 桔梗皂苷D 对照品，制备供试液，测定其含量。结果表明，平均回收率为89.40%，RSD 为0.69%（表1）。试验测定的桔梗中桔梗皂苷D 含量的加样回收率符合要求。

表1 桔梗中桔梗皂苷D 回收率测定结果

2.7 样品桔梗皂苷D 含量测定

不同月份采集的桔梗干燥根与购于药店的中药桔梗，以1.2.2.2 制备供试液，在1.2.1 条件下进行桔梗皂苷D 含量测定。

由表2 可知，2 年生桔梗干燥根中桔梗皂苷D的含量波动范围约为2.580～11.280 mg/g，其含量随月份变化较为明显。3—5 月，含量呈上升趋势，5 月达到最高；6 月含量有所下降；7 月桔梗含量高于6 月；7—9 月，桔梗皂苷D 的含量呈平稳下降趋势；9，10 月含量稳定在2.600 mg/g 上下。同时，试验样品的桔梗皂苷D 含量明显高于药店桔梗。5，10 月桔梗根中桔梗皂苷D 含量色谱如图3，4 所示。

表2 不同月份的桔梗根中桔梗皂苷D 的含量

3 结论与讨论

本试验采用HPLC-ELSD 的方法测定了桔梗中桔梗皂苷D 的含量，该法快速简便，可准确测量桔梗中桔梗皂苷D 的含量。宋健等[17]研究了1 年生、2 年生和3 年生桔梗在9，10，11 月根中桔梗皂苷D 含量的变化情况，结果表明，2 年生桔梗根中桔梗皂苷D 含量较高。本试验材料为2 年生桔梗，其桔梗皂苷D 的含量较高。许传莲等[15]利用HPLC 测定了吉林农业大学药植园桔梗在4，5，9，10，11 月桔梗皂苷D 的含量，结果表明，9，10 月份含量较高。这与本试验结果存在差别，本试验材料在5 月份含量最高，9，10 月份含量变化趋于稳定，原因可能是由于桔梗种植地区和海拔高度不同。

本研究表明，供试材料中桔梗皂苷D 的含量显著高于药店购买的中药桔梗，说明该中药材基地桔梗质量较好，可用于大量开发。同时该地2 年生桔梗在5 月桔梗皂苷D 的含量最高，故为该地区2 年生桔梗进行春收提供了理论依据。9，10 月桔梗皂苷D 含量变化趋于稳定。该地区桔梗5 月采收质量最佳，考虑到采收桔梗种子，故留部分桔梗于9 月份采收为宜。