木香顺气丸对脾虚胃溃疡模型大鼠能量代谢和物质代谢的影响

2019-10-24刘志洋王馨怡孙光轩段周通李延璐

中成药 2019年10期

刘岩，刘志洋，王馨怡，孙光轩，段周通，李延璐

（长春科技学院，吉林长春 130600）

胃溃疡是临床常见的消化系统疾病之一，其典型表现为饥饿不适、饱胀嗳气、泛酸或餐后定时的慢性中上腹疼痛，严重时可有黑便或呕血。本病在中医学中属“胃脘痛”范畴，其主要病机是脾虚气滞，以肝脾（胃）为主要病变脏腑，多由肝失疏泄，脾失健运，导致脾胃虚弱，气机失调［1］。有研究表明，脾虚胃溃疡的发生和自愈过程常伴随能量代谢和物质代谢的异常［2］。

木香顺气丸是临床上治疗胃溃疡的常用药，主要由木香、砂仁、醋香附、槟榔、甘草、陈皮、厚朴、枳壳（炒）、苍术（炒）、青皮（炒）、生姜等构成。具有行气化湿，健脾和胃之功，用于湿浊阻滞气机、胸膈痞闷、脘腹胀痛、呕吐恶心、嗳气纳呆［3］。目前，已有大量的临床研究表明木香顺气丸对胃溃疡有很好的疗效，尤其是脾虚气滞型［4-8］，但相关实验研究的报道较少。本文以大黄法复制脾虚模型，再以醋酸法复制胃溃疡模型［9］，考察木香顺气丸对脾虚胃溃疡大鼠能量代谢和物质代谢的影响。

1 材料

1.1 动物清洁级Wistar 大鼠，体质量180～220 g，6～8周龄，由辽宁长生生物技术有限公司提供，动物生产许可证号SCXK（辽）2010-0001。

1.2 试药大黄购于亳州亳药堂药业有限公司，质量标准符合2015 年版《中国药典》要求。木香顺气丸购自山东孔圣堂制药有限公司，批号 170407；西咪替丁片购自上海信谊天平有限公司，批号160838。Na+-K+-ATP 酶、琥珀酸脱氢酶（SDH）、细胞色素C 氧化酶（COX）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、α-酮戊二酸脱氢酶（α-OGDC）及糖原磷酸化酶（GP）试剂盒均购自南京建成生物有限公司。

1.3 仪器酶标仪（美国Thermo 公司）；电子分析天平［赛多利斯科学仪器（北京）有限公司］；低速台式离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；可调式移液器和超纯水机（德国Eppendorf 公司）；紫外分光光度计（上海UNICO公司）。

2 方法

2.1 造模药物制备称取定量大黄加入10 倍量水，浸泡60 min，快速加热至沸腾，煎煮10 min，倾出药液，提取2次，合并2 次药液，滤过、浓缩后制成2 大黄水提液（生药量2 g／mL），4 ℃储存备用。

2.2 分组、给药清洁级Wistar 大鼠，雌雄各半，体质量180～220 g，随机分为5 组，分别为空白组、模型组、阳性药组（0.09 g／kg 西咪替丁）及木香顺气低、高剂量组（2.49、4.98 g／kg），每组10 只。各组大鼠适应5 d 后开始给药，除空白对照组外，其余4 组建立脾虚胃溃疡模型。采用大黄苦寒泻下法建立脾虚动物模型，每日灌胃给予2 g／mL的大黄水煎液，给药容积为10 mL／kg，2 次／d，连续灌胃给药14 d。脾虚造模成功后，采用醋酸涂抹法建立胃溃疡模型。大鼠乙醚麻醉后剖腹，拉出全胃于胃底部用自制胃夹将塑料管固定于上，向管内注入冰醋酸0.1 mL，使其与腺胃部前壁浆膜接触60 s，撤去胃夹，用生理盐水清洗局部，逐层缝合，并再次进行消毒。涂抹术后24 h，按体质量分别灌胃给药，西咪替丁组0.09 g／kg，木香顺气低剂量组2.49 g／kg，木香顺气高剂量组4.98 g／kg，模型组给予等容积生理盐水，给药容积为15 mL／kg，各组1 次／d，连续给药10 d。

2.3 样本收集治疗结束第2 天，将大鼠以1%戊巴比妥钠（0.4 mL／100 g）腹腔注射麻醉，迅速剖开腹部，结扎胃的幽门部和贲门部，切断食道及十二指肠，摘下全胃。切取腺胃部取组织，加生理盐水，按胃组织∶生理盐水=1∶9制备组织匀浆液，-80 ℃保存待用。从门静脉注射4℃的生理盐水，清除残留血液，取出肝脏。切取部分右侧中叶肝组织称重，加生理盐水，按肝脏∶生理盐水=1∶9制备肝匀浆液，-80 ℃保存待用。

2.4 HE 染色用4%多聚甲醛固定胃组织，梯度乙醇脱水，常规石蜡包埋切片，HE 染色，光镜下进行组织形态学观察。

2.5 生化指标检测 Na+-K+-ATP 酶、SDH、COX、MDA、α-OGDC、SOD 及GP 水平测定，按照各个试剂盒使用操作，绘制标准曲线，进行统计分析。

2.6 统计学分析采用SPSS 20.0 软件进行处理，数据以（±s）表示，采用单因素方差分析（ANOVA）方法。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 体征指标造模结束后，造模大鼠出现体质量下降、便溏泄泻、聚集蜷卧、皮毛晦暗、少动、反应迟缓。参考卫生部药政司《中药治疗脾虚证的临床研究指导原则》《实用中医症候动物模型学》以及文献中介绍的中医对脾虚的判断标准，结果表明大黄造大鼠脾虚模型成功。

3.2 木香顺气丸对大鼠胃组织病理学形态的影响空白组大鼠胃黏膜表面细胞完整，各层细胞排列规则且结构正常，无溃疡性损害，未见萎缩、脱落或缺损；模型组大鼠胃黏膜有较严重损伤，有明显组织细胞坏死和破损、脱落，黏膜下可见大量炎性细胞浸润；阳性药组大鼠胃黏膜破损情况有极大改善；木香顺气丸组大鼠胃窦部黏膜皱壁上皮排列整齐，虽有破损和部分脱落，但破损情况较模型组改善，无明显炎细胞浸润。见图1。

3.3 木香顺气丸对大鼠肝组织Na+-K+-ATP 酶、COX 水平的影响与空白组比较，模型组大鼠肝组织Na+-K+-ATP、COX 水平显著降低（P＜0.01）；与模型组比较，阳性药组能显著升高Na+-K+-ATP 酶水平（P＜0.05），木香顺气丸高剂量组能显著升高Na+-K+-ATP 酶、COX 水平（P＜0.05，P＜0.01）。见图2。

3.4 木香顺气丸对大鼠肝组织α-OGDC、GP、SDH 水平的影响与空白组比较，模型组大鼠肝组织α-OGDC、GP 水平显著升高（P＜0.01），SDH 水平差异无统计学意义；与模型组比较，木香顺气丸高剂量组能显著降低大鼠肝组织α-OGDC、GP 水平（P＜0.05，P＜0.01）。见图3。

3.5 木香顺气丸对大鼠胃组织SOD、MDA 水平的影响与空白组比较，模型组SOD 水平显著降低，MDA 水平显著上升（P＜0.05）；与模型组比较，木香顺气丸组能显著提高SOD 水平，抑制MDA 水平（P＜0.05，P＜0.01）。见图4。

4 讨论

Na+-K+-ATP 酶维持细胞的离子梯度差，不仅使细胞膜内外离子水平处于平衡状态，也调节细胞的体积和驱动某些细胞中糖和氨基酸的运送。Na+-K+-ATP 酶与ATP 的分解关系密切，酶活性的升高伴随有ATP 消耗的增加［10］。细胞色素C 氧化酶（COX），即呼吸链复合物Ⅳ，位于呼吸链的末端，催化细胞色素的氧化，同时驱动ATP 的合成，是线粒体的标志酶，其酶活性的发挥对于维持线粒体结构和功能以及细胞能量的产生有非常重要的意义［11］。本研究结果显示，脾虚胃溃疡模型大鼠Na+-K+-ATP 酶、COX水平显著降低，说明脾虚胃溃疡大鼠出现能量代谢障碍，木香顺气丸能显著升高脾虚胃溃疡大鼠Na+-K+-ATP 酶、COX 水平，表明木香顺气丸能促进脾虚胃溃疡大鼠能量代谢。

α-酮戊二酸脱氢酶（α-OGDC）是三羧酸循环第三个关键酶和重要调节点。能催化α-酮戊二酸氧化脱羧生成ACoA。在琥珀酸脱氢酶催化下，琥珀酸脱氢生成延胡索酸［12］。琥珀酸脱氢酶（SDH），是线粒体内膜的结合酶，是连接氧化磷酸化与电子传递的枢纽之一，为线粒体的一种标志酶。作为参与三羧酸循环的关键酶，琥珀酸脱氢酶是反映线粒体功能的标志酶之一［13］。本研究结果显示，脾虚胃溃疡模型大鼠α-OGDC 水平显著升高，木香顺气丸能显著降低脾虚胃溃疡大鼠α-OGDC 水平，表明木香顺气丸可调节脾虚胃溃疡大鼠物质代谢的紊乱。

糖原磷酸化酶（GP）催化糖原分解生成葡糖-1-磷酸，是糖原分解过程中的重要调节点［14］。肝糖原的合成与分解参与并维持着血糖浓度的相对稳定。当体内糖来源丰富和细胞中能量充足时，即合成糖原将糖储存起来。当糖的供应不足或能量需求增加时，储存的糖原即可分解为葡萄糖进入血液。研究结果显示，脾虚胃溃疡模型大鼠GP 水平显著升高，木香顺气丸能显著降低脾虚胃溃疡大鼠GP 水平，表明脾虚胃溃疡大鼠糖原分解加快，而木香顺气丸能调节脾虚胃溃疡大鼠糖原代谢的紊乱。

图1 木香顺气丸对大鼠胃组织病理学形态的影响（×200）

图2 木香顺气丸对大鼠肝组织Na+-K+-ATP 酶、COX 水平的影响

超氧化物歧化酶（SOD）是生物体内重要的抗氧化酶，具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质［15］。许多病理过程，包括胃溃疡的形成，与氧自由基所致的细胞损伤密切相关。丙二醛（MDA）即血浆中脂质过氧化物的代谢产物，MDA 水平可反映机体内脂质过氧化物的程度，间接地反映出机体细胞受氧自由基攻击的严重程度［16］。本研究结果显示，脾虚胃溃疡模型大鼠SOD 水平显著降低，MDA 水平有升高趋势；木香顺气丸能显著升高脾虚胃溃疡大鼠SOD 水平，降低MDA 水平。结果表明，木香顺气丸可通过抑制体内脂质过氧化和减少氧自由基对胃黏膜的损伤发挥抗溃疡作用。