Tris-HCl溶液替代原烟碱检测连续流动分析法缓冲剂效果

张文 周崇健 王跃 饶玉慧 常城

摘 要：新缓冲剂Tris-HCl溶液不与钙、镁离子及重金属离子生成沉淀，对生物化学过程干扰小。而原烟碱检测连续流动分析法缓冲剂中的磷酸氢二钠易与烟叶中富含的钙、镁、重金属离子液缔合生成沉淀。因此，使用Tris-HCl替代磷酸氢二钠成为烟碱检测连续流动分析法的缓冲剂将有助于检测精度的提升。

关键词：烟碱;连续流动分析法;缓冲剂

烟碱检测连续流动分析法通常均选用磷酸氢二钠作为烟碱美拉德反应缓冲剂的组成部分。然而，近些年的分析化学研究结果表明以磷酸氢二钠为代表的磷酸盐类的缓冲剂易与常见的钙Ca2+离子、镁Mg2+离子以及重金属离子缔合生成沉淀。在烟碱检测过程中，烟叶样品溶液中存在的游离态重金属离子穿透透析膜后与磷酸氢二钠溶液缔合生成沉淀，沉淀附着在透析膜上，影响烟碱等物质的穿透，造成检测结果的漂移，且漂移幅度随检测的进行持续增加。因此，本研究致力于验证使用新缓冲剂Tris-HCl替代磷酸氢二钠的可行性。

1 试验设计

试验针对“烟碱含量检测连续流动氰化钾法”与“烟碱含量检测连续流动硫氰酸钾法”分别建立对比试验。即，对比一：对比测试变更缓冲剂对氰化钾法的影响;对比二：对比测试变更缓冲剂对硫氰酸钾法的影响。

试验涉及两种烟碱检测法共计4种处理方案。4种处理方案具体见表1。

2 结果与分析

2.1 原始数据

按照本次试验方案，针对4种处理方式，各连续检测烟叶样品（青州标样）标准溶液60次，得到4组共计240个检测数据。

2.2 变更缓冲剂对氰化钾法的影响

使用spss软件“独立样本非参数检验”分析“处理1”与“处理2”的试验数据，以确认使用两种不同缓冲剂有无显著性差异：

曼-惠特尼检验结果表明，相伴概率为0.006小于显著性水平，可认为拒绝零假设，使用氰化钾法的前提下，两种缓冲剂的处理结果存在显著性差异。

2.3 变更缓冲剂对硫氰酸钾法的影响

使用spss软件“独立样本非参数检验”分析“处理3”与“处理4”的试验数据，确认使用两种不同缓冲剂有无显著性差异：

曼-惠特尼检验结果表明，相伴概率为0.004小于显著性水平，可认为拒绝零假设，使用硫氰酸钾法的前提下，两种缓冲剂的处理结果存在显著性差异。

2.4 使用新缓冲剂两种检测方法有无差异

使用spss软件“独立样本非参数检验”分析“处理2”与“处理4”的试验数据，曼-惠特尼檢验结果表明，U=1729.5，W=3559.5，Z的值为-.420，相伴概率为0.674大于显著性水平（P=0.05），可认为接受零假设，使用Tris-HCl缓冲剂的前提下，两种检测法的处理结果无显著性差异。

2.5 新缓冲剂对检测结果正确性影响分析

通过“标准物质归一化偏差En值”验证测试结果的“正确度”，其计算公式为：

4种处理方式的“正确度”分别为“处理1：0.3498”、“处理2：0.0721”、“处理3：0.3172”、“处理4：0.0699”。其结果表明：使用“Tris-HCl缓冲剂”的处理2与处理4，其标准物质归一化偏差En值均低于处理1与处理3，说明采用新缓冲剂后，检测结构的正确度要优于原缓冲剂。即，对于烟碱检测连续流动分析法，使用“Tris-HCl缓冲剂”效果更优。

3 结论

使用三羟甲基氨基甲烷（C4H11NO3）与盐酸（HCL）混合配置的缓冲剂可用于烟碱检测连续流动分析法，且对反应进程干扰小，检测正确性高。

参考文献：

[1] YCT 160-2002.烟草及烟草制品 总植物碱的测定 连续流动法[S].北京：国家烟草专卖局，2002.

[2] YCT 468-2013.烟草及烟草制品 总植物碱的测定 连续流动（硫氰酸钾）法[S].北京：国家烟草专卖局，2013.