辣椒碱对小鼠淋巴细胞免疫调节活性的影响

王利明 李敬双

摘要：为探讨辣椒碱对小鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响，试验采取MTT法检测辣椒碱对淋巴细胞增殖的影响，并采取ELISA法检测辣椒碱对淋巴细胞分泌细胞因子TNF-α、IL-6的影响。结果在一定的浓度范围内，辣椒碱能诱导淋巴细胞的增殖，促进细胞因TNF-α、IL-6的分泌，呈双向调节。表明辣椒碱可通过刺激淋巴细胞增殖和促进分泌细胞因子分泌发挥其免疫调节活性。

关键词：辣椒碱;淋巴细胞;细胞增殖;细胞因子

中图分类号：R285.5

文献标识码：B

doi： 10.3969/j.issn.2096-3637.201 9.13.003

0 引言

辣椒碱（Capsaicin）又称辣椒素，是辣椒中的主要呈辣物质;在自然界中主要存在于茄科植物辣椒及其变种的果实的胎座组织及果皮和籽中，是一种极其辛辣的香草酰胺类生物碱，纯度特别高的辣椒碱呈白色片状、针状的结晶或粉末，其分子式为C18H227NO3[1]。有研究表明，辣椒碱具有抗肿瘤[2]、抗氧化[3]、抑菌[4]、促进脂肪代谢[5]、抗炎镇痛[6]、调节胃肠道和心血管保护[7]等作用，已经在医学领域广泛使用。另外，辣椒碱在食品行业，生物农药行业、饲料领域[8]、保健品和食品添加剂工业等也以得到广泛应用，在免疫方面的研究较少。

试验使用MTT法检测辣椒碱对淋巴细胞增殖的影响，采用ELISA法检测辣椒碱对淋巴细胞分泌的细胞因子的影响，探讨辣椒碱的免疫调节活性，为辣椒碱在兽医临床及饲料添加剂行业中的应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物

SPF级健康Balb/e小鼠购自锦州医科大学实验动物中心。

1.1.2 试验药物

辣椒碱购自成都曼斯特生物科技有限公司;RPMI-1640培养基、台盼蓝和四甲基偶氮唑盐（ MTT）购自美国GIBCO公司;PBS缓冲剂购自上海生物技术服务公司;新生牛血清购自四季青生物工程有限公司;IFN-γ和IL-6试剂盒购白武汉博士德公司;三羟甲基氨基甲烷（ tris）购自南通润丰石油化工有限公司;DMSO购白Solarbio。

1.2 方法

1.2.1 小鼠脾脏淋巴细胞制备

把健康的BALB/C小鼠进行颈椎脱臼致死后，在无菌环境中剖开小鼠腹腔，摘除脾脏，将分离后的脾脏组织放于1个细胞筛中，将细胞筛放人装有PBS溶液的培养皿中。取1个无菌注射器，对其进行碾压，然后收集细胞筛外的PBS.1400 r/min离心15 min，收集悬液，加入ACK LysisBuffer（红细胞裂解液）放置5 min，1 400 r/min，离心15min，弃上清，重复2-3次。在5% CO2、37℃恒温条件下，用含10%新生牛血清的RPMI-1640完全培养基进行细胞悬浮培养，收集悬浮细胞。随后，用TrypanBlue染色鉴别，活细胞数要达到95%以上[9-10]。

1.2.2 淋巴细胞增殖检测

在96孔细胞培养板中加入所收集到的淋巴细胞悬液，每孔加入100 μL，并设置空白对照组，浓度分别为25、50、75和100μg/mL辣椒碱的RPMI-1640完全培养液，分别加入100 μL、放于37℃、5%C02的恒温箱中培养44h，再分别加入20 μL MTT液，混匀，4h后，以1 500 r/min的转速离心15 min，弃去上清液;每孔再分别加入150 μLDMSO液，检测酶标仪于570 nm处的OD值。运用公式刺激指数一药物孔OD值/对照孔OD值，以此计算淋巴细胞的增殖效率[11]。

1.2.3 淋巴细胞分泌IFN-γ，和IL-6检测

在24孔细胞培养板中加入收集到的淋巴细胞悬液，每孔1 mL，设置空白组、浓度分别为25、50、75和100μg/mL辣椒碱组RPMI-1640培养液，各加入1 mL。然后将培养板置于恒温箱中培养48 h。离心，收集上清液，放在- 20℃环境中保存。按照ELISA试剂盒的说明书检测细胞因子IFN-γ和IL-6含量。

1.2.4 统计学分析

采用SPSS 17.0软件进行一维方差统计学分析，数据以“平均数±标准差”表示，不同罗马数字表示差异极显著“P<0.01”。

2 结果与分析

2.1 辣椒碱对脾淋巴细胞增殖的影响

不同浓度组的辣椒碱组与空白对照组相比较：不同浓度的辣椒碱组淋巴细胞的OD值均极显著（P<0.01）高于空白对照组，说明辣椒碱可以有效刺激淋巴细胞的增殖。各浓度组之间比较：浓度为50μg/mL的辣椒碱组淋巴细胞的OD值都极显著（P<0.01）高于其他质量浓度组，说明浓度为50μg/mL时，辣椒碱对刺激淋巴细胞增殖的效果优于其他浓度组，并且呈现双向调节。见图1。

2.2 辣椒碱对脾淋巴细胞分泌细胞因子的影响

不同浓度组的辣椒碱组与空白对照组相比较：不同浓度的辣椒碱组分泌IFN-γ、IL-6的量均极显著（P<0.01）高于空白对照组，说明辣椒碱可以有效刺激淋巴细胞因子IFN-γ、IL-6的分泌。各浓度组之间比较：浓度为50μg/mL的辣椒碱组淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-6的量均极显著明显高于其他浓度组，说明浓度为50μg/mL时辣椒碱对刺激淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-6的效果优于其他浓度组，并且呈现双向调节。见图2、图3。

3 讨论

淋巴细胞在免疫应答过程中起核心作用。只有接受抗原刺激后才能分化增殖，发生特异性免疫应答，产生抗体或细胞因子，称为免疫活性细胞[[12]。淋巴细胞增殖和细胞因子的分泌是评价细胞免疫功能的重要指标。白细胞介素是一类主要负责信号传递，联络白细胞群，调节细胞的活化、增殖和分化作用的细胞因子。IFN-γ又称Ⅱ型干扰素或免疫干扰素，主要由T细胞、自然杀伤细胞等淋巴细胞分泌产生，可以诱导Thl型细胞的免疫应答，具有免疫调节作用[13]。IL-6具有调节细胞生理功能，介導炎症反应，参与免疫应答和组织修复等多种生物学功能，还能增强IL-1对Th细胞的有丝分裂作用，促进T细胞增殖、分化并产生抗体，IL-6主要免疫学功能是增强其他细胞因子的效果[14]。结果表明，在一定浓度范围内，辣椒碱可以刺激淋巴细胞的增殖和细胞因子IFN-γ、IL-6的分泌，提示辣椒碱通过激活静止的T细胞使其活化，增强淋巴细胞分化增殖，发生特异性免疫应答，产生抗体或细胞因子。通过调节细胞免疫反应与体液免疫反应，进而发挥免疫增强的作用。

4 结论

辣椒碱可有效刺激脾淋巴细胞的增殖，能够促进其分泌细胞因子IFN-γ、IL-6，从而，提高辣椒碱对小鼠淋巴细胞的免疫调节活性。

参考文献

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基金项目：辽宁省自然科学基金（ 20170540369）

作者简介：王利明（1963-），男，硕士，研究方向：兽医药理学与兽医免疫学。

通信作者：李敬双（1963-），女，硕士，教授，研究方向：兽医药理学与兽医免疫学。