羊棘球蚴病基因工程亚单位疫苗免疫效果检测

王淑芳，何金桂*

（甘肃省天祝县动物疫病预防控制中心，733299）

甘肃省是包虫病重发区，天祝县是甘肃省包虫病流行一类区，从2018年全县实行羔羊包虫病强制免疫，为了准确掌握免疫效果，我们用羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗对试验羊进行了一免、二免疫两种不同程序的免疫，然后用间接ELISA法检测不同时期的血清抗体水平，分析抗体峰值高峰期，持续期和消失期，以找出合理有效的免疫程序。

1 材料与方法

1.1 疫苗和检测试剂羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗，生产厂家：重庆澳龙生物制品有限公司生产，疫苗批号：20180304；羊棘球蚴(包虫)ELISA抗体检测试剂盒，生产厂家：重庆澳龙生物制品有限公司生产，生产批号：20180915。

1.2 试验动物天祝县华藏寺镇韭菜沟村属于半农半牧区，羊包虫感染率低于纯牧区，我们选择2月龄以上临床检查健康，经包虫病感染抗体（羊棘球蚴（包虫）病间接ELISA检测试剂盒）检测呈阴性的绵羊40只。

1.3 试验分组4月份选择华藏寺镇韭菜沟村两家养殖户各取20只健康羔羊，分别为实验1组和实验2组。

1.4 试验方法实验1、2组羊只均在颈部皮下注射1mL(1头份)羊包虫疫苗，疫苗用无菌生理盐水稀释，并观察动物反应。实验2组在1免后30天再次免疫，分别在末次免疫后第30、60、90、180天采集血样，制备血清样品160份。

1.5 抗体检测方法用间接ELISA法检测血清中抗羊棘球蚴（包虫）主要保护性抗原EG95蛋白的抗体。操作方法参见ELISA试剂盒说明书。

1.5.1 试验结果同时满足下列条件，方为有效：标准阳性对照孔平均OD450≥0.6；标准阴性对照孔平均OD450≤0.3.

1.5.2 结果判定标准：样品OD450≤0.3，判为细粒棘球蚴抗体阴性，样品对细粒棘球蚴感染无保护力；样品OD450＞0.3，判为抗体阳性。样品OD450介于0.3与0.6之间，判为保护力低下，对细粒棘球蚴感染有一定保护力；样品OD450≥0.6，判为有保护力，抗体水平较高，在攻毒实验中可提供高于90%的抵抗力。

2 结果与分析

2.1 检测结果时间跨度7个月，实验1、2组抗体检测结果份阴性、阳性。阳性样品又分保护力低下和有保护力。结果见表1、表2、图1、图2：

表1 实验1（一免）组抗体检测结果统计单位：头份、%

表2 实验2（二免）组抗体检测结果统计单位：头份、%

3 分析与讨论

3.1 两组抗体水平消长分析：从表1、2、图1可看出，一免后30天采样检测阳性率为90%，二免后为100%，此后2个月二免组阳性率一直保持在100%，一免组的阳性率逐渐下降，分别是75%、65%，第90天已经低于农业部要求的70%标准，第180天时两组的抗体分别为53%、90%。可看出2免后免疫抗体半年内始终保持高水平，高于标准，而一免在第60天以后就达不到要求标准，所以说一免后有效免疫期为2-3个月，二免有效期在半年以上。

3.2 有保护力阳性率对比：1组的有保护力样品从第30天开始就低于第2组，虽然2组的抗体消长都成下降状态，但第2组始终高于第一组；第1组在第90天时高水平阳性样品已经成0，第2组在第180天时维持在45%，对包虫病感染有较强的抵抗力。可见二免效果明显高于第1组一免效果。

3.3 从实验结果看，羊棘球蚴(包虫)病基因工程亚单位疫苗对绵羊的棘球蚴感染具有较好的保护作用，尤其是二免后抗体水平较高，持续时间较长，有效保护力在6个月以上，并且有保护力的抗体在45%以上，能有效抵抗棘球蚴的攻击。

3.4 该疫苗是基因工程亚单位疫苗，具有质量稳定、生物安全性好，免疫效果好的特点。生产过程中又加入了免疫佐剂，对疫苗有免疫增强作用。此次检测结果也说明疫苗使机体产生免疫应答水平较高，免疫效果较好。

3.5 研发同类型疫苗者建议的免疫程序是：出生羔羊初次免疫2次，中间间隔1个月（或4周）时间，其后每年加强免疫一次，就能取得十分理想的免疫保护效果。张壮志[1]等做了科学研究和调查，证明按照此程序免疫抗体一年来抗体下降幅度慢，年末扔可保持在86%以上。

3.6 据统计2018年天祝县屠宰羊脏器包虫病感染率为6.86%，比2017年的8.73%下降1.87个百分点，每年感染率呈下降趋势，但绵羊包虫病仍然危害着人类健康和牲畜生长，做好犬类驱虫、检疫、无害化处理以及羔羊的免疫等多项工作并举是防控的关键，尤其是羔羊的免疫工作很重要，建议在生产实际中采取一免后一月再作二次免疫作为基础免疫，以后每年免疫一次的免疫程序，使抗体水平始终维持在较高水平，有效抵抗棘球蚴的攻击、感染。