慢性粒细胞白血病患者BCR-ABL融合基因P210表达对病程判断和预后评估的临床价值 *

刘伟平，官凡琪，宋耀辉，阮艳秋

(1.自贡市第一人民医院检验科， 四川自贡 643000；2.遵义医科大学医学与科技学院，贵州遵义 563000)

慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leuke-mia，CML)是骨髓造血干细胞的恶性克隆增殖性疾病。临床上通常按照病程将CML分为慢性期、加速期和急变期。一旦疾病进入急变期，预后极差[1]。90%以上的CML患者的血细胞中出现Ph染色体，即t(9；22)(q34；q11)，9号染色体长臂上abl原癌基因易位至22号染色体长臂的断裂点集中区(bcr)，形成BCR-ABL融合基因，并表达BCR-ABL融合蛋白[2]。BCR-ABL 融合基因以不同剪接方式形成mRNA-b3a2和b2a2，编码形成P210融合蛋白[3]；该蛋白具有异常活跃的酪氨酸激酶活性，并可活化细胞内相关的信号转导通路，从而调控细胞的分裂与增殖，使细胞凋亡信号降低、存活率延长，这是引起白血病细胞恶性增殖及凋亡抵抗的主要机制之一[4]。因此，本研究旨在探讨不同病程BCR-ABL融合基因P210的表达水平以及外周血象、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase，LDH)、α-羟丁酸脱氢酶(α-hydroxybutyrate，HBDH)和血糖(glucose，GLU)的变化，以期为临床的早期诊断、病程判断和预后评估提供一良好指标。

1 材料与方法

1.1 研究对象 收集2017年4月～2018年5月期间自贡市第一人民医院住院的CML患者共计30例，其中男性18例，女性12例，年龄24岁～86岁。疾病分期：慢性期13例，加速期8例，急变期9例。

1.2 试剂和仪器 Agilent StrataGene MX 3005P 实时荧光定量PCR仪购自美国安捷伦科技公司；BCR/ABL210融合基因定量检测购自上海源奇生物医药科技有限公司。XN-1000全自动血液分析仪购自希森美康生物有限公司，血清GLU，LDH，UA和HBDH购自迈克生物有限公司。

1.3 实验方法 CML诊断依据中国慢性髓性白血病诊断与治疗指南(2016年版)，结合骨髓细胞形态学、流式细胞术免疫表型、临床症状等进行综合分析。采用RT-PCR测定BCR-ABL融合基因P210表达水平，结果以BCR-ABL转录本水平与ABL(内参基因)转录本水平的比值(P210/ABL)来表示[5]；血细胞计数及分类采用XN-1000全自动血液分析仪，分类采用手工显微镜法进行确认；血清LDH和HBDH，GLU，UA，K+分别运用速率法、葡萄糖氧化酶法、尿激酶法、电极法进行检测。

1.4 统计学分析 采用SPSS 23.0统计学软件进行统计分析，符合正态分布的定量资料，三组间比较采用方差分析，非正态分布的定量治疗采用Mann-WhitneyU检验，率的比较采用卡方(χ2)检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同病程CML患者BCR-ABL融合基因P210检测结果 见表1。30例CML患者中，BCR-ABL融合基因P210阳性表达的有28例，占93.3%，其表达量通过Mann-WhitneyU检验分析比较，发现不同分期CML患者中BCR-ABL融合基因P210的表达差异有统计学意义(Z=9.561，P=0.000)，且运用伊马替尼治疗一年后，检测各病程BCR-ABL融合基因P210的阳性表达情况，运用卡方检验分析比较治疗前后BCR-ABL融合基因P210阳性表达率的差异，得出在13例慢性期CML患者中，治疗后此基因阳性表达率较治疗前差异有统计学意义(χ2=7.047，P=0.029)。此结果表明，BCR-ABL融合基因P210的表达在不同病程CML患者中表达差异有统计学意义，可用于临床对CML患者病程判断及预后评估。

表1 不同病程CML患者BCR-ABL P210检测结果

2.2 不同病程CML患者外周血象检测结果 见表2。测定30例不同病程CML患者外周白细胞(white blood cell，WBC)、血红蛋白(hemoglobin，HGB)含量及中性粒细胞/淋巴细胞比值(NEU/LYM)并运用单因素方差分析比较。外周WBC，HGB和NEU/LYM在不同病程CML患者中的表达差异均具有统计学意义(均P=0.000)。由此得出，测定外周血中WBC，HGB的含量及NEU/LYM比值可用于临床对CML患者的病程进行判断，从而为其有效治疗提供一可靠指标。

表2 不同病程CML外周血指标的比较

2.3 不同病程CML患者血清部分生化指标比较 见表3。利用单因素方差分析比较不同病程CML患者血清GLU，LDH，HBDH，K+和UA的表达差异。不同病程CML患者血清中GLU，LDH的表达差异有统计学意义(P=0.026，0.0482)，但血清HBDH，K+和UA的含量在不同病程CML患者之间比较，差异均无统计学意义(均P>0.05)。由此得出，CML患者血清中GLU，LDH在不同病程的差异表达可为临床对其病程诊断提供一早期指标。

表3 不同病程CML部分生化指标的比较

3 讨论

BCR-ABL融合基因是白血病发生的必要条件之一，利用实时荧光定量PCR技术可有效检测BCR-ABL融合基因表达水平[6]。本研究显示，不同疾病分期BCR-ABL P210转录本差异有统计学意义(P<0.05)，且急变期患者的BCR-ABL P210的转录水平明显高于加速期和慢性期的患者。由此得出，通过对CML患者BCR-ABL P210的检测，有助于临床准确判断患者病程和病情变化，从而有效实施个体化治疗。

获得深层的分子生物学反应是酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase inhibitors，TKI)治疗CML追求的目标[7-8]。骨髓或外周血中BCR-ABL P210转录本为0或定性检测结果为阴性是CML完全缓解的重要指标[6]。本研究结果显示，13例慢性期CML患者采用伊马替尼治疗一年后，BCR-ABL P210阳性率明显降低。因此，对伊马替尼治疗的慢性期CML患者进行BCR-ABL P210基因表达水平的检测，有助于临床判断其疗效和监测其复发，此与文献报道相符[6，8]。

本研究表明，不同分期CML患者外周血WBC，NEU/LYM和HGB差异均有统计学意义。这提示针对不明原因的WBC，NEU/LYM异常升高和HGB下降对于CML患者的早期诊断具有重要意义。另外，各期CML患者LDH一般呈轻度或重度升高，其原因可能在于Ph染色体易位产生BCR-ABL融合基因并表达蛋白P210，使白血病细胞大量增殖，糖酵解增强，进而使血清中LDH及其同工酶活性增高。另有研究表明，CML患者骨髓增生程度极度活跃，各组织和器官被恶性细胞浸润，其肝脾肿大及功能受损使LDH加速释放入血，从而可导致血清LDH及其同工酶活性升高[10]。在对各期CML患者血糖测定过程中发现，血糖水平与CML分期密切相关。以上结果表明，在排除患者其它疾病情况下，测定LDH及GLU水平可用于CML临床分期诊断及预后评估指标之一。

综上所述，BCR-ABL融合基因P210表达水平可作为CML早期诊断、病程判断和预后评估的良好指标。此外，外周血WBC数量，NEU/ LYM，GLU及LDH可用于CML的分期诊断和预后评估。两者结合起来，可提高CML诊断和治疗的敏感度及准确度。然而本研究检测的临床样本较少，且分布较为局限，仍需纳入不同地区，不同人种的临床样本进行分析研究，以增加本研究的可信度，以期为临床对CML患者的分期诊断和预后提供理论依据。