TLR4 基因rs1927914的多态性与缺血性脑卒中易感性的Meta分析*

刘远兴，王士中，刘险辉，谢运泉，易宏淦

(梅州市人民医院，广东梅州 514031)

脑卒中是成人身体残疾的主要原因，发病率呈逐年上升趋势，给国家带来巨大经济和社会负担，尤其是中低收入国家[1-2]。其中，缺血性脑卒中占所有脑卒中的80%[3]，其中包括隐源性、间隙性和血栓栓塞性脑卒中，并且通常在脑部的血液供应中断时发生[4]。缺血性脑卒中发病机制复杂，多由遗传和环境因素共同作用致病，其脑缺血后所致的炎性反应是脑组织受损的重要病理生理机制之一。近年来，由于Toll样受体(TLR)家族作为一组跨膜受体介导的炎症信号通路的激活而被广泛关注。其中，TLR4在缺血性卒中的发生、发展和继发性脑损伤中起重要作用，TLR4基因的多态性的表达与缺血性脑卒中也受到密切关注。目前，不同研究对于TLR4基因rs1927914多态性与缺血性脑卒中易感性的关联性存在争议。本文通过对研究文献进行Meta分析评估TLR4基因rs1927914多态性与缺血性脑卒中的易感性，期望为缺血性脑卒中发病的遗传易感性提供循证学依据。

1 材料与方法

1.1资料来源 检索PubMed、ISI、EMBASE、Cochrane、CBM、CNKI、学术会议资料和学位论文等数据库，全面收集2001年1月至2017年2月发表的有关TLR4基因多态性与缺血性脑卒中易感性的病例对照和队列研究文献，检索词包括：“toll-like receptor 4”“TLR4 genepolymorphism”“TLR4”“rs 1927914”“Ischemic stroke”“Clots”。

1.2文献纳入标准排除标准 纳入标准：(1)文献通过病史和体征、影像学检查、实验室检查、疾病诊断和病因分型等诊断纳入已确诊缺血性脑卒中的疾病患者；(2)文献为队列研究和病例对照研究；(3)文献包括T等位基因和缺血性脑卒中的关联性以及TLR4 rs 1927914基因多态性与缺血性脑卒中易感性相关的关系数据，同时包括以上数据的OR值和95%CI以提供进一步统计计算；(4)单一数据来自同一个种族、同一个时期；(5)患者选择方式为连续性病例或某种抽样方式，对一般资料没有严格的限制。排除标准：(1)纳入的缺血性脑卒中患者同时合并其他系统疾病；(2)队列研究没有提供详细信息的病例研究；(3)同一数据来源于不同种族人群或不同时期的；(4)病例报道；(5)重复报道。

1.3数据提取和质量评估 两位作者独立完成文章数据的提取。应用Cochrane风险因素评估(Cochrane risk of bias tool)对RCT研究进行质量评估，而回顾性文章的质量评估则用修改后的Newcastle-Ottawa量表，Newcastle-Ottawa量表包括选择、可比性和结局三个部分，总分是9分。RCT文献和得分高于7分的回顾性研究被认为是高质量文章，4～7分的为中质量文献。所有的数据均由两个样本收集员进行收集评估，如果两个人出现分歧，则共同商议并联合第三位收集员进行确认。提取的基本信息包括作者姓名、每组患者人数、患者年龄、纳入患者所在国家、随访及每组之间是否配平等。

1.4敏感性分析和亚组分析 排除不符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律文献，进行敏感性分析，以确定Meta分析的稳定性。文献中的患者种族不同将文献分为欧美人口组及亚洲人口组来进行亚组分析，以确定异质性来源。

1.5统计学处理 Stata 12.0软件作为本研究统计分析的软件。应用显性模式(TT+TCvs. CC)、隐性模型(TTvs. TC+CC)和共显性模型(Tvs. C)分别对缺血性脑卒中的基因型和等位基因进行比较，计算等位基因T的OR值及基因频率；对资料进行异质性检验(采用Q检验和I2检验对纳入研究间的异质性进行检验，若P<0.10或I2≥50%， 表明各研究间异质性较大)，若各研究结果间的同质性较好，则采用固定效应模型进行数据合并，若各研究结果间具有异质性，采用校正后的随机效应模型进行数据合并。

2 结果

2.1研究一般特点 在数据库中一共检索到2 157篇相关文献，其中有501篇为重复文献，通过阅读标题与摘要后初步排除了1 553篇文献，通过全文数据库找到剩余的103篇文献的全文，仔细阅读后，最后可以纳入此次Meta分析的文献有13篇[6-18]。所有13个研究均为病例对照研究，其中有9篇文章纳入国外患者，另外4篇文章纳入患者为中国人群。一般情况见表1。每篇文章中所出现的TLR4rs 1927914基因多态性基因型分布见表2所示，共有13项与缺血性脑卒中TLR4基因rs 1927914位点多态性研究符合纳入该项研究的条件[6-18]。

2.2Meta分析结果 Meta分析结果显示，显性模型：OR=1.384，95%CI1.062～1.804，P=0.016，共显性模型：OR=1.232，95%CI1.002～1.515，P=0.048，隐性模型：OR=1.246，95%CI0.912～1.703，P=0.168，见表3。

表1 被纳入13篇文献的基本信息

注：NA表示该项无数据

表2 TLR4rs 1927914基因多态性基因型分布

表3 Meta分析TLR4 rs 1927914位点T等位基因多态性与缺血性脑卒中之间的关系

注：显性模式=TT+TCvs.CC；隐性模型=TTvs.TC+CC；共显性模型=Tvs.C

2.3异质性和敏感性分析 研究来源的异质性和敏感分析如表3所示，经过排除不符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律文献，异质性有所减小；TLR4 rs 1927914的T等位基因遗传多态性和缺血性脑卒中显性模型(OR=1.653，95%CI1.416～1.930，P=0.000)和共显性模型(OR=1.525，95%CI1.350～1.723，P=0.000)与之前Meta分析结果一致，说明本Meta分析结果稳定。

2.4TLR4 rs 1927914(TT+TCvs. CC)多态性与缺血性脑卒中易感性相关的亚组分析 结果显示：欧美人口中T等位基因和缺血性脑卒中的患病风险具有显著关联性(显性模型：OR=1.201，95%CI1.080～1.322，P=0.021；共显性模型：OR=1.248， 95%CI1.002～1.494，P=0.043)，但在亚洲人口中TLR4基因的rs1927914位点与缺血性脑卒中的关联性未见显著差异(显性模型：OR=0.667，95%CI0.547～0.787，P=0.608；隐形模型：OR=1.152，95%CI1.029～1.275，P=0.061；共显性模型：OR=0.725，95%CI0.546～0.97，P=0.153)。见表4。同时进行亚组分析后，亚组中的异质性(I2)均有所降低，可见人口因素是造成异质性的一个因素。

表4 亚组分析TLR4 rs 1927914位点T等位基因多态性与缺血性脑卒中之间的关系

注：显性模式=TT+TCvs. CC；隐性模型=TTvs.TC+CC；共显性模型=Tvs.C

3 讨论

目前的大量研究提示缺血性脑卒中的患病率在种族间有很大的差异，有成家族和种族聚集的趋势。多项研究认为缺血性脑卒中具有基因遗传性，家族人员患病风险有显著增高的表现，虽然缺血性脑卒中也与环境因素有关，但是遗传基因所占的因素亦不容忽视，已有研究结果表明遗传因素在该病中起着至关重要的作用，但仍有争议，如现有研究中，GU等[5]报道TLR4基因rs1927914与男性缺血性脑卒中易感性有关;然而，XU X等认为rs1927914与缺血性脑卒中无关。

目前，多重易感性研究已经证明相关基因会增加缺血性脑卒中的风险，目前明确的相关基因包括血管紧张素转换酶(ACE)，亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)，丝氨酸蛋白酶抑制肽1(SERPINE1)，载脂蛋白E(APOE)[6]，细胞色素P4502C19(CYP2C19)和血小板衍生生长因子D(PDGF-D)，以及染色体12p13[16]。但对于TLR4基因特别是rs1927914片段多态性是否与缺血性脑卒中有关目前尚难定论。TLR基因全长216.86 kb，位于9q11.7是一种Ⅰ类跨膜蛋白，由胞外域、跨膜结构域和细胞内TIR结构域组成。 TLR4通过细胞外富含亮氨酸的重复序列的胞外结构域识别和绑定各种配体,激活TRIF信号通路，促进各种炎症因子释放[19-20]。

多项研究证实TLR4在动脉粥样硬化的多个病理阶段都发挥重要作用[18]。目前研究发现TLR4的3个单核苷酸多态性(SNP))位点(rs1927914、rs1927911、rs2149356)与冠心病、动脉粥样斑块钙化及血脂水平有关，是造成缺血性脑卒中的重要危险因素[19]。较多研究已证实TLR4基因位点rs1927911、rs2149356与缺血性脑卒中存在风险相关性[19,21]。在TLR4基因变异与缺血性脑卒中发病风险相关的研究，有学者进行了一项连锁不平衡分析，对缺血性脑卒中患者与健康人群的染色体基因对比研究发现TLR4基因的rs 1927914位点与缺血性脑卒中的关联程度较强。通过纳入分析13篇文献研究继续深入探讨位点上的等位基因型，其中9篇文献纳入患者为国外人口，其中有4篇文献认为携带TLR4基因的rs 1927914位点上的T等位基因是缺血性脑卒中的危险因素，但另外5篇文献研究表明TLR4基因的rs 1927914位点上的T等位基因不是缺血性脑卒中的危险因素。同时，有4篇文献纳入患者为中国人群，结果一致认为TLR4基因rs 1927914位点上的T等位基因不是缺血性脑卒中的危险因素。本课题组整合13篇文献后的Meta分析发现：TLR4基因rs 1927914位点上的T等位基因确实是缺血性脑卒中的危险因素，并且在亚组中进一步证明，不同人种中TLR4基因rs 1927914位点上的T等位基因对缺血性脑卒中的易感性不同，欧美人种T等位基因高时，更易出现缺血性脑卒中，但对于亚洲人口这一结论尚缺乏有效证据。

4 结论

在欧美人口中TLR4基因rs 1927914位点上的T等位基因很可能与缺血性脑卒中的易感性相关，但对于亚洲人口易感相关性尚缺乏有效证据。当然，此次Meta分析也存在一些不足：首先入选文献的地区病例数之间以及对照组之间的种族不同，国内文献华南区域的数据偏少，对照匹配之间存在一定的同质性差异，所以在分析中还需要把握此方面系统误差，本研究分析从一定程度上给缺血性脑卒中基因学研究提供了有价值的参考依据。鉴于此，笔者认为缺血性脑卒中的基因型的检测结果存在因种族不同导致的差异。