儿童呼吸系统感染性疾病中淋巴细胞亚群的改变及临床价值*

吕晓艳，肖贺欣，王 言，朱长吉，王 莹

(吉林大学第二医院检验科，吉林长春 130021)

感染性疾病是儿童发病率最高的一类疾病，其中以呼吸系统感染性疾病发病率最高，占儿科门诊总数60%以上，肺炎患儿占儿科住院患者的60%居首位，严重威胁儿童健康[1]。儿童呼吸道感染性疾病主要由细菌、病毒或支原体等病原体入侵呼吸道引起，其发生、发展和预后均与患儿机体免疫功能密切相关。由流式细胞术检测的淋巴细胞亚群分析已广泛应用于临床，在免疫功能评估方面起到不可或缺的作用。淋巴细胞亚群是机体免疫防御体系中的重要组成部分，可反映机体细胞免疫和体液免疫水平，其变化与感染性疾病类型和程度有关[2-3]。因此淋巴细胞亚群的检测对判断患儿病情、指导临床治疗以及判断预后等方面都有极为重要的意义。本研究回顾性调查了儿童呼吸系统感染性疾病外周血淋巴细胞亚群的变化，并探讨了CD4+/ CD8+T细胞比值(T4/T8)在儿童呼吸系统感染性疾病中的辅助诊断价值，为其临床应用提供理论依据和数据支持。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取吉林大学第二医院2018年1-10月儿童呼吸系统感染性疾病患者121例作为感染组，纳入标准：(1)结合临床症状以及影像学、病原体分离、血常规、血清学检测结果进行分析，符合 《儿科学》[4]上呼吸道感染、支气管炎、毛细支气管炎、肺炎诊断标准;(2)研究前两周内未使用任何免疫调节药物;(3)病历资料完善，诊断明确。排除标准：(1)自身免疫疾病或免疫缺陷病;(2)合并其他部位感染；(3)心肝肾功能严重异常;(4)过敏性体质和家族史;(5)严重营养不良患儿。年龄范围为0～13岁，平均年龄5.8岁，其中男68例、女53例，包括上呼吸道感染36例，支气管炎33例，毛细支气管炎14例，肺炎38例。再选择同期健康体检儿童19例作为对照组，其中男9例、女10例，平均年龄5.2岁。比较感染组与对照组患儿年龄、性别等一般资料，差异均无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究属于回顾性研究，经医院伦理委员会批准，符合医学伦理要求。

1.2仪器与试剂

1.2.1淋巴细胞亚群分析 采用美国贝克曼公司 CytoFLEX 流式细胞仪。抗体为美国贝克曼公司四色鼠抗人单克隆流式抗体(CD45/CD4/CD8/CD3和CD45/CD19/CD56/CD3)。溶血素、鞘液、清洗液均采用贝克曼公司原装配套试剂。

1.2.2WBC计数 采用Sysmex公司的 XN-2000全血细胞计数仪检测WBC绝对计数。试剂均采用Sysmex原装配套试剂。质量控制采用常规室内质控方法。

1.2.3C反应蛋白(CRP)检测 采用免疫散射比浊法检测CRP水平，所用仪器和试剂为美国贝克曼公司Immage800全自动分析仪及原厂配套试剂。质量控制采用常规室内质控方法。

1.3方法 回顾性观察和记录纳入的呼吸系统感染性疾病患儿、体检健康儿童一般资料及血常规、CRP、细菌培养、鉴定、病原菌分布状况和淋巴细胞亚群检测结果。淋巴细胞亚群的检测：清晨抽取研究对象2 mL外周血置于肝素抗凝真空管中，要求在48 h内进行淋巴细胞亚群检测。取流式上样管，分别向试管中加入抗体10 μL，再加入肝素抗凝血100 μL，避光孵育20 min后加入溶血剂500 μL，孵育20 min后加溶血剂10 min，离心、洗涤、定容后立即上机，流式细胞术进行淋巴细胞亚群检测，4 h内检测完毕。

2 结果

2.1儿童常见呼吸系统感染性疾病外周血淋巴细胞亚群的比较 与对照组比较，感染组总 T 细胞(CD3+)百分比差异无统计学意义(P>0.05)； CD4+T细胞 (CD3+CD4+)、T4 /T8、NK 细 胞(CD3-CD16+CD56+)百分比降低，CD8+T细胞百分比(CD3+CD8+)增高，差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较，感染组B 细胞(CD3-CD19+)百分比差异无统计学意义(P>0.05)。见图1。根据临床诊断结果将感染组分为4组：上呼吸道感染组，支气管炎组，毛细支气管炎组、肺炎组。与对照组比较，毛细支气管炎组、肺炎组CD3+T细胞百分比增高，差异有统计学意义(P<0.05)，而上呼吸道感染组及支气管炎组CD3+T细胞百分比差异无统计学意义(P>0.05)。4个疾病组与对照组比较，CD4+T细胞均有不同程度的降低，而CD8+T细胞百分比均增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。肺炎组B细胞百分比高于对照组(P<0.05)，其余3个疾病组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。NK细胞百分比在支气管炎、毛细支气管炎、及肺炎组均明显降低。见表1。

表1 儿童呼吸道感染性疾病各组外周血淋巴细胞亚群结果(%)

注：与对照组比较，*P<0.05；与上呼吸道感染组比较，#P<0.05；与支气管炎组比较，△P<0.05；与毛细支气管炎组比较，&P<0.05

注：与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01

2.2CRP、WBC与T4/T8比值3项指标的水平比较及ROC曲线分析 与对照组相比，儿童呼吸系统感染组CRP、WBC值明显增高，T4/T8比值显著降低，差异均有统计学意义(P<0.05)，见表2。绘制3项指标用于儿童呼吸系统感染性疾病的ROC曲线， CRP、WBC、T4/T8比值曲线下面积分别为0.754、0.759、0.696，当CRP的cut-off值为2.20 mg/L时，灵敏度、特异度分别为74.8,55.6；当WBC的cut-off值为6.85×109/L时，灵敏度、特异度分别为66.5%、61.1%；当T4/T8的cut-off值为1.47时，灵敏度、特异度分别为77.8%,51.6%。见图2、表3。

表2 CRP、WBC、T4/T8比值3项指标检测水平的比较

注：与对照组比较，*P<0.05

图3 3项指标用于儿童呼吸系统感染性疾病的ROC曲线

表3 CRP、WBC、T4/T8比值诊断儿童呼吸系统感染性疾病ROC曲线参数

3 讨论

感染性疾病是儿童发病率最高的一类疾病，往往具有起病较急、发展快、病情重等特点，是导致儿童死亡的主要原因之一，其中以呼吸道感染性疾病发病率最高。幼儿由于其呼吸道系统解剖生理特点以及机体免疫特点,极易发生呼吸系统感染性疾病。因此，加强儿童呼吸道感染性疾病研究是很有必要的。感染性疾病是各种病原体感染引起的，宿主免疫功能是影响患儿疾病发生、病情发展以及预后的重要因素。外周血淋巴细胞亚群的测定可以实时反映机体免疫功能状态，从而帮助临床判断感染类型以及全面、早期地评估患儿病情，对提高临床疗效、改善预后尤为重要[5]。

人体的免疫系统主要承担着免疫防护、免疫稳定以及免疫监视的作用，对外源性抗原物质如细菌、病毒等病原体的入侵，以及体内出现的异常细胞如肿瘤细胞、胞内微生物感染细胞等，能及时产生免疫应答予以杀灭，维护机体内环境的稳态。人体免疫功能主要靠免疫细胞 T 细胞、 B 细胞以及自然杀伤NK细胞，以及免疫球蛋白等炎性介质执行[6-7]。其中T细胞是机体免疫应答的重要参与者，执行细胞免疫功能。CD4+T细胞和CD8+T细胞是T淋巴细胞中功能相异的两个亚群，其中CD4+T细胞主要为辅助性T细胞(Th)，通过分泌细胞因子和表达膜分子发挥效应功能，起着参与细胞免疫应答，辅助B细胞产生调理性和中和性抗体的作用。CD8+T细胞主要为细胞毒性T细胞(Tc)，通过释放毒性蛋白和导致细胞凋亡杀伤靶细胞。二者形成T细胞网络，通过细胞间的直接接触或通过释放细胞因子，导致或抑制免疫效应，从而双向调控机体获得性免疫应答。B淋巴细胞则能通过产生分泌各种免疫球蛋白和抗体，从而介导体液免疫应答[8]。NK细胞是机体抗感染、抗肿瘤的第一道防线，发挥介导病原体感染细胞的细胞毒作用[9-10]。

本研究检测了121例常见婴幼儿呼吸道感染性疾病淋巴细胞亚群变化情况，分析了各指标与疾病的相关性，结果提示，与健康儿童相比，呼吸道感染组总T细胞百分比并没有明显改变,但CD4+T细胞百分比显著降低，CD8+T细胞明显增高，导致T4/T8比值显著降低。B细胞比例略有升高，提示呼吸道感染组儿童普遍存在细胞免疫功能低下，体液免疫功能相对增强现象，个别感染严重患儿甚至出现免疫功能紊乱。上呼吸道感染、支气管炎、毛细支气管炎、肺炎组比较，以肺炎组改变尤为明显，T4/T8水平降至0.9±0.4(P<0.01)，出现倒置现象，说明该组患儿细胞免疫功能低下尤为明显，提示儿童呼吸系统感染性疾病细胞免疫功能紊乱程度与患儿病情严重程度有一定相关性。有报道亦提出总T细胞、T4细胞百分比、T4/T8、NK细胞百分比与下呼吸道感染性病情呈负相关，与T8细胞、B细胞百分比呈正相关[11]，这与本研究结果基本是一致的。

另外，与对照组比较，支气管炎、毛细支气管炎及肺炎组NK细胞百分比显著降低。NK细胞在机体发挥着非特异性固有免疫的功能，可不依赖抗体、补体和预先致敏作用即可快速杀伤靶细胞，并与单核细胞、粒细胞等协同起到抗感染作用[11]。该结果提示患儿机体固有免疫功能受到影响，病原体快速清除能力受到抑制，这可能和患儿易反复发生感染有关。因此监测NK细胞水平有助于掌握患儿病情，指导临床治疗。

本研究还探讨了T4/T8比值在儿科呼吸系统感染性疾病的诊断效率和价值。目前儿童传统呼吸道感染性疾病采用WBC、CRP、降钙素原等指标来进行粗略判断[13-14]。更为准确的血培养和病原学鉴定时间较长，不适合门诊和急诊患者。因此，探求新型、有临床价值的检测指标是有必要的。在淋巴细胞亚群报告中，T4/T8比值是反映淋巴细胞功能强弱的一个较为简单和明确的指标。CD4+和CD8+T细胞在感染进程中发挥着正、负调节作用，形成T细胞网络，双向调控免疫应答。大多病原微生物感染不同程度上将引起。CD4+T淋巴细胞数量上的降低，或者CD8+T细胞反应性增高，二者均可导致T4/T8比值降低甚至倒置[15-18]。绘制T4/T8比值用于儿童呼吸系统感染性疾病的ROC曲线，并与临床常用指标CRP、WBC比较，考察其诊断价值。结果显示，CRP、WBC、T4/T8比值曲线下面积分别为0.754、0.759、0.696，表明三者对儿童感染性疾病均有一定诊断价值。与CRP、WBC相比，T4/T8比值曲线下面积略低，但灵敏度较高，当T4/T8的cut-off值为1.47时，灵敏度为77.8%，略高于WBC和CRP。基于上述研究结果可知，T4/T8指标的检测对儿童呼吸系统感染性疾病有良好的诊断价值。但由于本文并未对感染性疾病病原体进行分类，针对于不同的感染类型，T4/T8比值的诊断效率有待进一步验证。

4 结论

儿童呼吸系统感染性疾病患者普遍存在免疫功能受损现象，天然免疫受到抑制，而特异性免疫调节功能下降，甚至紊乱。加强淋巴细胞亚群检测有助于判断病情，指导临床治疗以及评估预后。针对于免疫功能较低，反复发生感染的患儿，适当进行免疫调节治疗，对患儿病情的康复，提高治疗效果可能有一定的价值。另外，血清T4/T8比值是一个有较高临床应用价值的指标，可与CRP水平及WBC联合检测，作为诊断儿童感染性疾病的临床常规检查指标。